实验一实验一 实验动物的捉持和给药方法实验动物的捉持和给药方法【目的】观察并掌握实验动物的捉持和给药方法【动物】小白鼠和家兔1 小白鼠的捉持和给药方法小白鼠的捉持和给药方法1.1 捉持方法捉持方法右手提起鼠尾，放在粗糙物（如鼠笼）上面，轻向后拉其尾，此时小鼠前肢抓住粗糙面不动；用左手拇指和食指捏住双耳及头部皮肤，无名指、小指和掌心夹其背部皮肤及尾部，便可将小鼠完全固定腾出的右手，可以给药此外，也可单手捉持，难度较大，但速度快先用拇指和食指抓住小鼠尾巴，用小指、无名指和手掌压住尾根部，再用腾出的拇指、食指及中指抓住鼠双耳及头部皮肤而固定1.2 给药方法给药方法（1）灌胃法小鼠固定后，使腹部朝上，颈部拉直，右手用带灌胃针头的注射器吸取药液（或事先将药液吸好） ，将针头从口角插入口腔，再从舌背紧沿上腭进入食道若遇阻力，应退出后再插，切不可用力过猛，防止损伤或误入气管导致动物死亡灌胃药一般不超过 0.25ml／10g2）腹腔注射法抓鼠方法同上，右手持注射器（5～6 号针头） ，从耻骨联合上一侧向头端方向以 30°角刺入腹腔（应避开膀胱） 可先刺入皮下2～3mm，再刺入腹腔，以防药液外漏针头刺入部位不宜太高太深，以免刺破内脏。
注射量一般为 0.1～0.25ml／10g3）皮下注射法一般两人合作一人左手抓住小鼠头部皮肤，右手拉住鼠尾；另一人左手提起背部皮肤，右手持注射器（针头号向上） ，将针头刺入提起的皮下若一人操作，左手小指和手掌夹住尾巴，拇指和食指提起背部皮肤，右手持注射器给药一般用量为 0.05～0.25ml／10g4）肌肉注射法两人合作时，一人抓鼠方法同上，另一人左手拉直一侧后肢，右手持注射器，注射部位多选后腿上部外侧（针头号同上） 如一人操作，抓鼠方法类似于腹腔注射，只是药液注射在肌肉内每腿的注射量不宜超过 0.1ml5）尾静脉注射法将小鼠置于特置的固定筒内，使鼠尾外露，并用酒精或二甲苯棉球涂擦，或插入 40℃～50℃温水中浸泡片刻，使尾部血管扩张左手拉尾，选择扩张最明显的血管；右手持注射器（4～5 号针头） ，将针头刺入血管，缓慢给药如推注有阻力而且局部变白，说明针头不在血管内，应重新插入穿刺时宜从近尾尖部 1／3 处静脉开始，以便重复向上移位注射一般用药量为 0.1～0.2 ml／10g ，不宜超过 0.5／10g 2、家兔的捉持和给药方法、家兔的捉持和给药方法2.1 捉持方法捉持方法一般用左手抓住兔颈背部皮肤，将其提起，右手托住臀部呈坐位姿态。
不要抓两耳，以防兔挣扎2.2 给药方法给药方法（1）耳缘静脉注射法一人操作时，将兔放入固定箱或实验台上，选好耳缘静脉（在耳背的下缘） ，拔除局部的毛，用酒精棉球涂擦，并用食指轻弹耳壳，使血管扩张用左手的食指和中指夹住耳根部，拇指和无名指夹住耳尖部拉直；右手将抽好药液的注射器（6～7 号针头）针头刺入血管，用拇指和食指使针头和兔耳固定，将药液推入如针头在血管内，推注轻松，并可见血液被药液冲走；如不在血管内，则推注有阻力，耳局部变白或肿胀，应立即拔出重新注射注射完毕，则用手指或棉球压在针眼上，再拔出针头，并继续按压片刻，防止出血如两人操作，一人夹住兔子，用手暴露血管，压住耳根部使血管充盈，另一人注射给药2）灌胃法两人合作，一人坐下，两腿夹住兔身，左手固定兔耳，右手抓住前肢；另一人将开口器从嘴角插入口腔，压在舌上，并向后翻转几下，使兔舌伸直取 8 号导尿管由开口器中部的小孔插入食道约 15cm如插入气管，兔子则强烈挣扎、呼吸困难也可将导尿管外端浸入水中，不见气泡则表示插在胃中插好后，把注射器接在导尿管上，将药液推入再注入少量空气，使导尿管中所有药液进入胃内灌完药液后，先慢慢抽出导尿管，再取出开口器。
一般用药量为 5～20ｍl／kg3）腹腔、肌肉、皮下注射法基本同小白鼠，唯针头可稍大（6～7 号） ，给药量可稍多，一般腹腔为 1.0～5.0ｍl／kg，肌肉、皮下为0.5～1.0ｍl／kg4) 眼结合膜内给药法将兔固定在兔箱内或夹在掖下，左手拇指和食指拉开兔下眼睑成杯状，中指压住眼内眦，以防药液由鼻泪管流入鼻腔内而被吸收滴入药液 1～2 滴，将下眼睑向上合拢，使眼球充分接触药液约 1min后将手放开，让药液自然流出实验二实验二 五苓散对小白鼠尿量的影响五苓散对小白鼠尿量的影响【目的】观察五苓散的利尿作用材料】器材：灌胃器、玻璃漏斗（或烧杯） 、玻璃板、粗天平、棉花、注射器、小白鼠药品：100%五苓散水煎醇沉液、生理盐水动物：小白鼠方法】取小白鼠 12 只，各用 1 ml 自来水灌胃后，随机分成两级第 1 组腹腔注射 100%五苓散水煎醇沉液 0.5ml，第 2 组腹腔注射生理盐水 0.5ml分别将两组小白鼠罩在玻璃漏斗内，漏斗下垫有玻璃板3h 后各组用约 2g 棉花团吸取尿液，并称重用吸取尿液后棉花团的重量减去棉花自身的重量即为各组小白鼠 3h 内尿液的重量比较两组尿量结果】组 别小鼠数 （只）药 物腹腔注药量 （只）3h 内尿量 （g）16100%五苓散水煎醇沉液0.5ml26生理盐水0.5ml【注意点】1. 本实验不能在高温干燥的情况下进行，因尿液挥发量过大会影响实验效果。
2. 用棉花团吸取尿液时，棉花团上不能沾上大便，以免影响重量3.观察时间不得少于 2.5h实验三实验三 秦艽对动物急性关节肿胀的影响秦艽对动物急性关节肿胀的影响【目的】观察秦艽煎剂的抗炎症渗出作用材料】器材：1ml 注射器、台秤、软皮尺药品：100%秦艽水煎醇沉液、新鲜蛋清、生理盐水动物：大白鼠 2 只方法】1、皮尺测量法 选用体重约 150g 的大白鼠，称重，标记用软皮尺测量踝关节的周长，以一踝关节周长为正常值，以量踝关节周长的差为关节肿胀的程度指标然后，分别腹腔注射 100%秦艽水煎醇沉液 3 ml/kg 和生理盐水 3 ml/kg 30min 后再分别给各鼠左踝关节附近皮下注射新鲜的鸡蛋清 0.1 ml，此后每 20 min 分别测量各鼠关节的周长，再计算肿胀百分率2、容积测量法（略） 结果】【附】水煎醇沉液煎制方法取一定量的中药饮片，先用适量清水浸泡 24h，然后煎煮 1～2 h，滤纸过滤，再加 5 倍量的 95%或无水乙醇，在 4℃的冰箱中静置 48 h，滤纸过滤，自然挥发或水浴蒸发去乙醇，用蒸馏水调成所需浓度，即为水煎醇沉液关节周长（mm）体重注射蛋清后（min）鼠号（kg）药物 正常 20406080100差值（左-右）肿胀百分率（%）（左-右）／右鸡蛋清左 1秦艽煎剂 右鸡蛋清左 2生理盐水 右实验四实验四 溶血性检查试验溶血性检查试验溶血系指血液中红细胞破裂、溶解的一种现象。
许多中草药如：人参、桔梗、远志和甘草等含有其相应的皂苷，可引起溶血为了保证用药安全，以中草药制成的注射剂（特别是供静脉注射者）通常要做溶血性检查[目的目的] 学习溶血性实验的基本操作方法[材料材料] 器材：小烧杯 竹签（去纤维蛋白用）,试管，试管架，吸管，恒温水浴锅，离心机药品：柴胡注射液、4%的桔梗煎液、生理盐水动物：家兔 1 只（供采血用） [方法方法] 取 7 支试管，编号，按下表加入各种溶液第 6 管不加入供试品，作为空白对照第 7 管不加供试品并以蒸馏水代替生理盐水，作为完全溶血对照轻轻摇匀后置 37℃的水浴中保温，1h 后观察结果，再离心 5min 后观察结果试管123456782%兔血混悬液（ml）2.52.52.52.52.52.52.52.5生理盐水（ml）2.42.32.22.12.02.5蒸馏水 2.54%桔梗煎液(ml)0.10.20.30.40.5柴胡注射液（ml）2.537℃保温 1h 后的结果注：注：1 1）） 、、2%2%兔血生理盐水混悬液的配制：取新鲜兔血兔血生理盐水混悬液的配制：取新鲜兔血 10-20ml10-20ml用竹签搅拌以除去纤维蛋白，然后吸。
用竹签搅拌以除去纤维蛋白，然后吸取没有发生凝血和溶血现象的全血取没有发生凝血和溶血现象的全血 2ml2ml，加生理盐水稀释至，加生理盐水稀释至 100ml100ml 摇匀即得摇匀即得2 2）） 、、4%4%的桔梗煎液：取桔梗的桔梗煎液：取桔梗 4g4g ，按普通煎煮法制成，按普通煎煮法制成 4%4%的溶液结果判断依据：结果判断依据：完全溶血：溶液澄明，红色，管底无红细胞残留部分溶血：溶液澄明，红色或棕色，管底尚有少量红细胞残留不溶血：红细胞全部沉淀，上层液体物色澄明凝集：虽不溶血，但出现红细胞凝集，经振瑶后不易分散，或出现药物沉淀 实验五实验五 药物半数致死量（药物半数致死量（LD50）测定）测定【【目的目的】】了解测定方法药物半数致死量（LD50）的方法【【材料材料】】动物：大白鼠（用前禁食 24h）药物：桔梗总皂苷（200%的水溶液）器材：注射器、针头、鼠罐【【实验方法实验方法】】综合计算法综合计算法目前测定药物半数致死量的方法有多种，如 Bliss 法、改进寇氏法、简化机率单位法、累积插值法等其中孙氏综合计算法（改进寇氏法）简化和发展了寇氏法，该法在精确度方面较原法有提高，计算步骤也较简单，经常应用。
本法要求下述实验设计条件1、 每个实验组的动物数目相等2、 各组剂量要按等比级数安排，组距不宜太大，一般相邻两组的剂量比可取1：0.7~1：0.93、 反应情况大致符合常态分布，即 0%~50%及 50%~100%反应各组的动物数大致相等4、 反应率包括 100%及 0%，至少应当有 80%以上及 20%以下的反应率5、 按上述剂量给各组大白鼠腔注射观察每组死亡只数，并当场记录（2h 后死亡的动物） 结果记录结果记录】】 剂量(ml/kg)剂量对数X每组鼠数n死亡数r死亡率P死亡率平方P29.011.3414.1417.6422.04合计∑r=∑P=∑P2=6、计算方法（1） LD50的计算：LD50=㏒-1[Xm—i(∑P—0.5)]（2） LD50的 95%可信限（FL）的计算：FL=㏒-1(㏒LD50±1.96i)）12 nPP式中：Xm：最大剂量的对数；i：相邻两组剂量比值的对数（大剂量的为分子）P：各组的死亡率（用小数表示如 80%死亡率即写成 0.08）∑P：各族死亡率的总和（以小数表示）∑P2：各组死亡率的平方和n：各组动物数附：附：100%桔梗总皂苷水溶液的制备：。