银染步骤及注意事项

银染步骤及注意事项银染色步骤为1 次固定 10 分钟冰醋酸2 用双蒸水洗涤凝胶，每次1 分钟3染色液1g硝酸银5mL37甲醛1L双蒸水现在匹配染色30分 钟 4.快速清洗并清洗凝胶数次 5开发30克碳酸钠1.5毫升37甲 醛200微升10毫克/升硫代硫酸钠显影直到出现清晰的条纹银染色成 功的关键因素包括：1 .用超纯水，如纳米纯水或Milli-Q或双蒸水进行 银染色的纯化2.使用提供的碳酸钠或ACS试剂级碳酸钠染色后用于 水洗的时间长度非常重要清洗胶水，然后将其放入通常浸泡在水中 的显色溶液中，只需5-10秒钟 4使用前及时向显色液中加入甲醛和 硫代硫酸钠ul/1ml5.使用前及时配制染液银染方法有很多种，目前文 献报道有1 00多种然而，确切的染色机理还不是特别清楚一般原 理是银离子在碱性酸碱度环境下还原成金属银，沉淀在蛋白质表面形 成颜色银染色广泛用于2D凝胶分析和垂直凝胶，用于极低蛋白质 含量的测定，因为它对低于 1 纳克/蛋白质斑点的染色凝胶具有高灵 敏度本文介绍了我们实验室成功使用的银染色法，以补充关键操作 和要求主要用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋白的检测，如内源 GST-Pulldown、Co-IP 等实验中相互作用蛋白的研究。

银染色程序用 于检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质实验原理是在碱性条件下，用甲 醛将蛋白质带上的硝酸银和银离子还原成金属银，在蛋白质带上沉积 银颗粒染色程度与蛋白质中某些特殊基团的有关不含或很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时会被染色银染的 详细机制尚不十分清楚试剂乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、 硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或乙二胺四乙酸Na2.2H2O,甲醛实验程 序固定30 分钟或更长时间100毫升乙醇40毫升乙醇25毫升冰醋酸 10 毫升冰醋酸加水250 毫升敏化30分钟75 毫升乙醇30毫升乙醇17 克醋酸钠 28.2 克三水醋酸钠 0.5 克硫代硫酸钠加水 250 毫升水洗涤 3x10毫升银染料20分钟0.625克硝酸银100微升37甲醛加水至最终 体积250毫升使用前用水冲洗2x1min注意掌握时间水冲洗时间长颜 色慢点是黄色发展取决于情况o 6.25 g Na2CO3 o 50 ul 37甲醛添加o 水至最终体积2使用前50ml终止10 min o 3.65 g EDTA、na 2.2h2o 或1g甘氨酸o加水至最终体积250ml保存1冰醋酸4°C注意事项1 如果固定时间较长,加一步水洗 30 分钟以避免胶水太脆而破裂。

使 用前加入甲醛 3 最好是第一次再准备一种显色溶液,当溶液变浑浊 时,再换成透明的 4 .色彩开发过程中要注意把握时机,避免过度染 色 5 银染色液和显色液需要预冷 6 所用的器具应干净,不需要直接 接触手,以避免被外来蛋白质污染7 洗涤水应尽可能使用高纯度去离 子水蒸馏水,这有利于减少背景色。