英国药典附录附录 XP.XP. 富含富含 Omega-3Omega-3 酸的油酸的油1.1. 脂肪酸的构成脂肪酸的构成 欧洲药典 方法 2.4.29 该方法可用于对不同浓度下的鱼油产品中 Omega-3 的 EPA 与 DHA 的定量测定该方法适用于 三酸甘油脂或乙酯类，其结果用三酸甘油脂或乙酯分别表达EPAEPA andand DHADHA 气相色谱分析（2.2.28）.执行快速操作，避免受到光，氧化性物质，氧化催化剂（例如： 铜和铁）和空气的影响. 该方法可对待检测物质中的甲基酯或乙基酯（All-Z）二十碳五烯酸(EPA; 20:5 n-3)和 (All-Z) 二十二碳六烯酸(DHA; 22:6 n-3)进行检测 内部标准 二十三酸甲酯R试验溶液试验溶液(a)(a) A. 根据表 2.4.29-1, 将待检测样品与 70mg 内标（二十三酸甲酯 R）在 50 毫克/升丁基苯 甲醇的三甲基戊烷溶液中溶解并用相同溶液稀释至 10 毫升对乙酯进行分析检测，对于甘油三酯，继续按步骤 B 中所述的进行B. 提出步骤 A 所获得的 2 毫升溶液放入石英管中，用平缓的氮气流 R 蒸发溶剂。
添加 1.5 毫升含量为 20 克/升氢氧化钠的甲醇溶液，以氮气覆盖，用聚四氟乙烯帽盖紧，混合后放入 水中加热 7 分钟添加 2 毫升三氟化硼的甲醇溶液，以氮气覆盖，用聚四氟乙烯帽盖 紧，混合后放入水中加热 30 分钟冷却至 40 到 50 °C，添加 1 毫升三甲基戊烷溶液，盖 紧后用力摇动 30 秒立即添加 5 毫升饱和的氯化钠溶液，以氮气覆盖，盖紧后用力摇动 15 秒转移上部混合层至另一真空管中加 1 毫升的三甲基戊烷溶液再次摇匀甲醇层清洗三 甲基戊烷混合提取物 2 次，分别为 1 毫升水和干燥过的无水硫酸钠溶液每个样品准备三个 溶液 试验溶液(b) 在 50 毫克/升丁基羟基甲苯的三甲基戊烷的溶液中溶解 0.3 克的样品，用同 样的溶液稀释至 10 毫升按照试验溶液(a)所描述的进行操作参考溶液(a) 在 50 mg/l 丁基羟基甲苯的三甲基戊烷的溶液中溶解 60 毫克的二十二碳六 烯酸乙酯 CRS, 内标 70 毫克和 90 毫克的二十碳五烯酸 CRS用同样的溶液稀释至 10 毫升 当检测分析乙酯时按照试验溶液(a) A 步骤进行操作对于甘油三酯，继续按试验溶液(a) 中的步骤 B 进行，每个样品准备三个溶液。
参考溶液(b) 在一个 10 毫升容量瓶中用 50 mg/l 丁基羟基甲苯的三甲基戊烷溶液中的溶 解 0.3 克的棕榈酸甲酯，0.3 克硬脂酸甲酯，0.3 克二十酸甲酯和 0.3 克的二十二酸甲酯， 用同样的溶液稀释至 10 毫升参考溶液(C) 在一个 10 毫升容量瓶中用 50mg/l 丁基羟基甲苯的甲酯溶液溶解一个样品，该 样品含 55 毫克的二十二碳六烯酸和大约 5 毫克的二十四碳-15-烯酸甲酯用同样的溶液稀 释至 10 毫升Column:Column: 柱子柱子材料：石英玻璃 尺寸：l = 至少 25 m, Ø = 0.25 mm, 固定相：聚乙二醇（膜厚度 0.2 µm） 运载气体：氢气色谱分析法或氦气色谱分析法 流速：1 毫升/分钟 分流比：1:200，或者不分流用温度控制（在注射前样品溶液需要在 50 毫克/升丁基羟基甲 苯的三甲基戊烷溶液中稀释至 1/200）温度：检测：火焰电离 注射：1 µl, 两次系统适用性-- 参考溶液(b) )获得的色谱图中，区域百分比含量按如下顺序递增：棕榈酸甲 酯，硬 脂酸甲酯，二十酸甲酯，二十二酸甲酯棕榈酸甲酯和二十而酸甲酯的区域百分比差异小于 2.0 区域单位。
-- 解析度：参考溶液(c)获得的色谱图中二十二碳六烯酸和二十四碳-15-烯酸甲酯的峰高之 间最小值为 1.2 --当与试验溶液(b)获得的色谱图进行比较的时候，试验溶液(a)获得的色谱图中，二十三碳 酸甲酯和二十一碳五烯酸甲酯或乙酯(C21:5)的峰都是分开的（如果不是，需要使用矫正因 子）用下列公式计算 EPA 及 DHA 的百分含量，同时要考虑到参考物的指定值m1 = 试验溶液(a)中内标质量, 单位：毫克 m2 = 试验溶液(a)中待检测样品的质量，单位：毫克 m3 = .参考溶液(a)中内标质量，单位：毫克mx,r = 参考溶液(a)中二十碳五烯酸乙酯 CRS 或二十二碳六烯酸乙酯 CRS 的质量，单位：毫 克Ax = 试验溶液(a)获得的色谱图中二十碳五烯酸酯或二十二碳六烯酸酯的峰面积Ax ,r = 参考溶液(a)获得的色谱图中二十碳五烯酸酯或二十二碳六烯酸酯的峰面积A1 = 试验溶液(a)获得的色谱图中内标的峰面积 A3 = 参考溶液(a)获得的色谱图中内标的峰面积 C = 乙酯和甘油三酸酯之间的转换因数C=1.00 乙酯C=0.954 EPAC=0.957 DHA总总 Omega-3-Omega-3-脂肪酸脂肪酸通过对 EPA 和 DHA 的试验分析，按如下公式计算总 Omega-3 酸，并通过色谱图确认各峰。
EPA + DHA + An - 3(EPA + DHA) AEPA + ADHAEPA= EPA 含量百分比DHA=DHA 含量百分比An-3 = 试验溶液（b）获得的色谱图中 C18:3n-3, C18:4n-3,C20:4n-3,C21:5n-3 及 C22:5n-3 甲酯的峰面积总和AEPA= 试验溶液（b）获得的色谱图中 EPA 酯的峰面积ADHA= 试验溶液（b）获得的色谱图中 DHA 酯的峰面积。