大黄中蒽醍类的提取与分离 一、实验目的 学习目的:掌握大黄中蒽醍类化学成分的提取 分离技术 知识要求：1、掌握大黄中蒽醍类化合物的提取、分离原理2、熟悉大黄中蒽醍类化合物的结构及主要理化性质3、了解大黄中蒽醍类化合物的提取分离新进展 能 力要求：1、熟练进行大黄中蒽醍类化合物的提取、分离及鉴定操作2、学会大黄中大蒽醍 类化合物的色谱鉴定技术二、实验原理 大黄（Rheum palmatum L.）：蓼科多年生草本植 物，掌叶大黄的干燥根可入药，性寒味苦，具有清热解毒、活血化瘀、泻火凉血等多种作 用大黄中化学成分复杂，主要以蒽醍衍生物为主包括游离蒽醍、蒽醍苷、二蒽酮苷、鞣 质等游离蒽醍主要有大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、芦荟大黄素、大黄酸 提取分离原理：大黄中的蒽醍苷经酸水解成游离蒽醍苷元，苷元可溶于乙醚而被提取出来再 利用各种蒽醍类化合物酸性不同，采用pH梯度萃取法分离得到各种蒽醍类化合物三、 实验材料器材： 器材：500ml圆底烧瓶、烧杯、滴管、橡皮管、球形冷凝管、30cm层析 缸、标本瓶、索氏提取器一套、250ml分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、普通滤纸、薄层板、 喷雾器、广泛PH试纸药品：大黄20g、5%碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶液、0.25%氢氧化 钠溶液、5%氢氧化钠溶液、浓硫酸、浓盐酸、浓硝酸、甲醇、乙醚、含水氯仿（水饱和）、 石油醚（沸程60-90°C）、冰醋酸、乙酸乙酯、醋酸镁、柱层析用硅胶（100〜200目）、硅胶 G、CMC四：实验步骤 （一）粉碎:将大黄药材切片剪碎，用粉碎机粉碎得到大黄粗粉， 经80目筛子得到大黄细粉。
二）酸解:取大黄粉20 g，加20%H2SO4 200ml，在70C水 浴上加热3~4小时三）水洗、抽滤、干燥抽滤，滤饼水洗至中性后，于70C左右干 燥，研成粉末 （四）索式提取:圆底烧瓶内的抽提剂受热挥发，蒸气经导气管向上，在冷凝管中冷却为液体，滴入装有样品滤纸筒的管中，使样品浸在纯净的抽提剂中 待提取物质逐渐从样品中溶解到抽提剂中当样品管中的抽提剂液面逐渐上升到与回流管（虹 吸管）上端齐平时，在虹吸作用下，携带所提取的物质一同从侧面的虹吸管流入烧瓶中即完 成一轮循环 滤饼经干燥后，置索氏提取器中以乙醚约150ml回流提取3~4小时，得乙醚提取液 初步检验：乙醚提取液经薄层检查含有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚 检测方法：取硅胶-CMC-Na板，将上述乙醚提取液点样后，用石油醚（60-90C）-醋酸乙酯（7： 3）为展开剂，展开晾干，在可见光下观察，可见到4个 黄色斑点，Rf值由大到小分别是大黄酚与大黄素甲醚的混合物、大黄素、芦荟大黄素、大 黄酸置氨蒸汽中熏后，斑点变为红色五）萃取结晶:取乙醚提取液2/3量，置250ml 分液漏斗中1、大黄酸：用2.5% NaHCO3溶液60ml,分三次萃取，合并三次萃取液，用 浓盐酸调pH2-3,抽滤，得大黄酸沉淀。
2、大黄素:分离出大黄酸的乙醚层，用2.5% Na2CO3 溶液60ml分三次萃取，合并三次萃取液，用浓盐酸调pH2-3,抽滤可得大黄素沉淀芦荟 大黄素：分离出大黄素的乙醚层，继续用2.5% Na2CO3溶液60ml分四次萃取，合并四次萃 取液，用浓盐酸调pH2-3,抽滤可得芦荟大黄素沉淀4、大黄酚和大黄素甲醚混合物:将分 离出芦荟大黄素的乙醚层，用0.5% NaOH溶液60ml,分三次萃取，合并三次萃取液，用浓盐 酸调pH2-3,抽滤，得大黄酚和大黄素甲醚混合物 （六）硅胶薄层层析:薄层层析是一种快速分离和定性分析少量物质的实验技术它是将某种吸 附剂在玻璃板（或硬制塑料板等）上均匀地铺成薄层，把待分析鉴定的样品溶液点在薄层的 一端，然后选择合适的溶剂作为流动相（展开剂），在密闭的层析缸内进行层析，从而达到 分离鉴定的目的吸附剂：硅胶一CMC展开剂：石油醚（60〜90C）：乙酸乙酯=7：3 （七）. 柱层析法分离大黄酚和大黄素甲醚（1）装柱取一玻璃层析柱，垂直固定在铁架台上， 在管的下端垫入少量棉花，装入100〜200目硅胶（约1/3高，湿法装柱）2）上样 将 样品置于小蒸发皿中，用少量石油醚分散，另加用3倍量硅胶拌和均匀，并于水浴上缓缓蒸 去溶剂。
然后将含有样品的硅胶装入色谱柱的上端，并盖一圆形滤纸3）洗脱 将色 谱柱活塞打开，洗脱剂为石油醚（沸程60-90C）-乙酸乙酯（15 : 1）混合液4）收集 洗脱液25ml 一份，分别收集，回收溶剂至小体积，放置，即可析出结晶，合并相同晶形部分先洗脱下的化合物为大黄酚，后洗脱下的化合物为大黄素甲醚五、鉴定 1、蒽醍类成分化学鉴定（1）碱液试验 分别取各蒽醍结晶数毫克置于小试管中，加2%氢氧化钠 溶液1ml，观察颜色变化凡有互为邻位或对位羟基的蒽醍呈蓝紫至蓝色，其它羟基蒽醍呈 红色2）醋酸镁试验 分别取蒽醍结晶数毫克，置于小试管中，各加乙醇1ml使溶解， 滴加0.5%醋酸镁乙醇溶液，观察颜色变化六、注意事项1.本实验提取方法是采用酸水 解法，使药材中蒽醍苷水解得到游离蒽醍化合物，再用连续回流的方法，使游离蒽醍被氯仿 提取出来，这样提取的游离蒽醍类成分较为完全，收率高2.酸水解后的滤饼一定要水洗 至中性，为了节省时间，可将第一次抽滤得到的滤饼混悬在水中，加10%NaOH水溶液调pH 值至6,抽滤后再水洗至中性3.pH梯度萃取法分离羟基蒽醍，是利用羟基蒽醍的酸性不 同，可溶于不同pH的碱液中，在分离时，应注意萃取的次数不宜过多，否则被分离的成分 间回游混杂，最好同时用薄层对照。
所用碱液的pH值分别如下：5%碳酸氢钠为8, 5%碳酸 钠为10-11，0.5%氢氧化钠为12以上 七、思考题1.简述大黄中5种游离羟基蒽醍化合 物的酸性与结构的关系2. pH梯度萃取法的原理是什么？如何利用该方法分离大黄中的 5种游离羟基蒽醍化合物？ 3.大黄中5种游离羟基蒽醍化合物的极性与结构的关系如何？ 薄层鉴别时常用何类吸附剂？ Rf值顺序如何。