单击此处编辑母版标题样式,,,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,免疫学实验的室内质量控制,焦作市中心血站 张国平,,,免疫学实验的室内质量控制焦作市中心血站 张国平,1,血站实验室的室内质控,室内质量质控的概念,如何进行室内控制,如何进行统计学质量控制,如何做质控图,质控规则的选择,,,血站实验室的室内质控室内质量质控的概念,2,一、室内质量控制的概念,由实验室工作人员，采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在,监测和控制本实验室工作的精密度,，提高本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性，以确定测定结果是否可靠、可否发出报告的一项工作可概括为:,(1),执行者,：实验室技术人员；(2),目的,：监测实验室测定的重复性；(3),功能,：决定了当批测定的有效性，报告可否发出是对实验室测定的,即时性评价,一、室内质量控制的概念由实验室工作人员，采取一定的方法和步骤,3,二、分析前的质量控制,2.1 人员培训,,免疫学实验的基本原理,临床意义,易出差错的环节及难点,熟悉检测试剂性能（包括试剂盒组成，包被片段及其组成）,熟悉检测仪器的原理及性能；,掌握数据处理的能力和质量控制知识,,,二、分析前的质量控制2.1 人员培训,4,2.2 试剂盒选择,,有生产批准文号、批批检报告，并贴有防伪标签。
从灵敏度，特异性，精密度，稳定性，简便性，安全性及经济性作出全面的评价,,使用血清考核盘进行检测,,参考室间质评评价报告中对试剂的评价结果,,注意高值钩状效应（HOOK）,,,2.2 试剂盒选择,5,2.3 仪器校验,,,移液器（加样枪）,,水浴箱（温箱）,,洗板机,,酶标仪,,,全自动加样仪,,全自动酶免分析系统,,,,2.3 仪器校验,6,2.4 标本的采集、处理、保存,,标本避免溶血抗凝不完全可造成假阳性血清置4℃冰箱不应超过5天如需保存一周以上则要-20℃冰冻保存，融解时应 充分混匀，避免产生气泡避免标本间的污染,,,2.4 标本的采集、处理、保存,7,三、ELISA实验的室内质量控制,3.1 最佳条件下的变异（OCV）,在本实验室最佳条件下（包括操作者、试剂、仪器等）检测质控血清20-30次，测得结果计算，求出该组数据的均值、标准差（SD）和变异系数（CV），表示实验室的最佳工作质量三、ELISA实验的室内质量控制3.1 最佳条件下的变异（O,8,3.2 常规条件下已知值质控血清的变异（RCVK）,,做常规检验的技术人员，在常规检验的条件下，将质控血清作为常规检测样本，进行20次检验，结果计算同OCV法。
3.2 常规条件下已知值质控血清的变异（RCVK）,9,3.3 常规条件下未知值质控血清变异(RCVU)的测定,测定步骤同RCVK，但检测的操作者不知质控血清的定值，或在操作者不知哪份是质控血清的条件下进行常规检验，以排除操作者的主观性3.3 常规条件下未知值质控血清变异(RCVU)的测定,10,3.4,绘制质控图,根据质控品的靶值和控制限绘制,Levey-Jennings,控制图（每张图一个浓度水平），将选择的质控规则应用于质控数据，判断每一分析批是在控还是失控3.4 绘制质控图,11,,3.5 质控规则的功能,,简单地说就是用于判断测定批的失控还是在控失控信号的出现受多种因素的影响，包括操作上的失误、试剂、校准物、质控品的失效，仪器维护不良以及采用的质控规则、控制限范围、一次测定的质控标本数等等排除假失控3.5 质控规则的功能,12,3.6 质控规则的表达方式,通常质控规则以符号,A,L,来表示，其中,A,为质控测定中超出质量控制限的测定值的个数，,L,为控制限，通常用均值或均值±1～3SD来表示当质控测定值超出控制限L时，即可将该批测定判为失控常用的1,3S,质控规则，其中1为原式中的A，3s为原式中的L，表示均值±3s，其确切的含义为：在质控测定值中，如果有一个测定值超出均值±3s范围，即可将该批测定判为失控。
3.6 质控规则的表达方式,13,常用质控规则的符号及定义,符 号 定 义,1,2S,,一个质控测定值超出±2s控制限1,3S,,一个质控测定值超出±3s控制限2,2S,,两个连续的质控测定值同时超出+2s或-2s 控制限R,4S,,同一批测定中，两个不同浓度质控物的测定值之间的差值超出4s控制限4,1S,,四个连续的质控测定值同时超出+1s或－1s控制限7,T,,七个连续的质控测定值呈现一个向上或向下的趋势变化10,X,,十个连续的质控测定值同时处于均值的同一侧常用质控规则的符号及定义,14,四、“即刻法”质控,“即刻法”质控方法是在对同一批外部质控血清连续测定3次后，即可对第3次检验结果进行质控具体计算方法如下：,,,四、“即刻法”质控“即刻法”质控方法是在对同一批外部质控血清,15,4.1 将质控血清的测定值从小到大排列：x,1,，x,2,，x,3,……x,n,(x,1,为最小值，x,n,为最大值),,4.2 计算,,X,,和,,S4.1 将质控血清的测定值从小到大排列：x1，x2，x3……,16,4.3 计算SI,上限值,和SI,下限值,,SI,下限,=,,X,,- X,最小值,,S,SI,上限,=,,X,最大值,-,,X,,S,,,4.3 计算SI上限值 和SI下限值SI下限= X -,17,4.4 将SI,上限,、SI,下限,与SI值表中的数字比较,,SI值表,,n,,,n,3s,,n,2s,,,n,,,n,3s,,,n,2s,,,3,,,1.16,,,1.15,,,12,,,2.55,,,2.29,,,4,,,1.49,,,1.46,,,13,,,2.61,,,2.33,,,5,,,1.75,,,1.67,,,14,,,2.66,,,2.37,,,6,,,1.94,,,1.82,,,15,,,2.71,,,2.41,,,7,,,2.10,,,1.94,,,16,,,2.75,,,2.44,,,8,,,2.22,,2.03,,,17,,,2.79,,,2.47,,,9,,,2.32,,,2.11,,,18,,,2.82,,,2.50,,,10,,,2.41,,,2.18,,,19,,,2.85,,,2.53,,,11,,,2.48,,,2.23,,,20,,,2.88,,,2.56,,,,,,4.4 将SI上限、SI下限与SI值表中的数字比,18,（1）当SI,上限,和SI,下限,
继续重复以上各项计算2）当SI,上限,和SI,下限,有一值处于n,2s,~n,3s,值之间时说明该值在2s,,3s范围，处于“告警”状态3）当SI,上限,和SI,下限,有一值> n,3s,值时说明该值已在3s范围之外，属“失控”数值处于“告警”和“失控”状态应舍去，需重新测定该质控血清和病人样品舍去的只是失控的这次数值，其它测定值仍可继续使用,1）当SI上限和SI下限
五、影响ELISA实验的常见原因5.1 试剂准备 操作前将,21,5.3 孵育,温度过高或过低，,孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底；,孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底,5.4洗板,采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板针堵塞，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差反应板过多造成洗板等待时间长,,,5.3 孵育,22,5.5 显色,显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂；,加显色剂时溅出孔外造成液体回流A、B液应避免接触金属器械5.6 读板,读板时板底不清洁5.5 显色,23,敏感性高、特异性强、重复性好试剂稳定、易保存、操作简便结果判断比较客观可用于大规模筛查，也可用于少量标本的检测可以定性，也可以定量分析广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域ELISA的影响因素较多，加强质量管理才能充分发挥其方法学的优点ELISA实验的特点,,,敏感性高、特异性强、重复性好ELISA实验的特点,24,谢 谢,,,谢 谢,25,。