乙型肝炎病毒的生物危害评估报告1．危害程度分类1.1分类等级根据《中华人民共和国传染病防治法》，乙型肝炎病毒（HBV）属于乙类传染病在卫生部2006年公布的《人间传染的病原微生物名录》中将其列为危害程度第三类病原微生物运输包装仅病毒培养物为A类，UN编号为UN28141.2实验室操作生物安全实验室级别要求根据《人间传染的病原微生物名录》要求：乙肝血清学检测未经培养的感染材料的操作，应在Ⅱ级生物安全实验室（BSL-2）实验室中进行2．背景资料2.1一般生物学特性乙型肝炎病毒属嗜肝DNA病毒，有包膜，病毒颗粒为直径42nm的圆球形在病毒感染者的外周血中还有直径22nm的圆形和管形颗粒这种颗粒为乙型肝炎表面抗原，没有核酸，无传染性1）大球形颗粒：亦称Dane颗粒，它是一种由一个囊膜和一个含有DNA分子的核衣壳组成的病毒颗粒，直径约42nm核衣壳为20面体对称结构游离的核衣壳只能在肝细胞核内观察到血中Dane颗粒浓度以急性肝炎潜伏期后期为最高，在疾病起始后则迅速下降Dane颗粒表面含有HBsAg，核心中还含有双股有缺口的DNA链和依赖DNA的DNA多聚酶目前认为Dane颗粒即完整的HBVHBV DNA的两链长短不一，长链（L）完整，为负链，长度恒定，约3200个核苷酸。
短链（S）为正链，长度可变，约为长链长度的50～100%，链的增生按5′-3′顺序进行在不同分子中短链3′端的位置是可变的，而短链和长链的5′端位置固定点为粘性末端，通过250～300个核苷酸碱基配对，以维持DNA分子的环状结构在粘性末端两侧，两链5′端各有一个由11个bp组成的直接重复序列（Direct repeat DR）-5′TTCACCTCTCC，该DR位于第1824个核苷酸者称DR1，位于第1590个核苷酸者称DR2，在病毒复制中起作用2）小形球颗粒：直径约22nm的小球形颗粒是HBV感染后血液中最多见的一种它由HBsAg，即病毒的囊膜组成化学组成为脂蛋白，可按其特有的密度与正常血清蛋白部分分离在此颗粒中未检出达DNA多聚酶活性目前认为HBV的小颗粒不是HBV，可能是它感染肝细胞时合成过剩的囊膜而游离于血循环中3）管形颗粒：直径约22nm，长度可在100～700nm之间实际上它是一串聚合起来的小颗粒，但同样具有HBsAg的抗原性2.2对外界环境的稳定性HBV对外界抵抗力环境抵抗力较强，对干燥、紫外线、75%乙醇等均有耐受性，60℃可存活2小时，30℃-32℃至少可存活6个月，－20℃可存活5年。
但100℃煮沸10分钟；高压蒸汽灭菌、0.5%过氧乙酸、5%次氯酸钠等均能灭活病毒，因此，注射器具、医疗用具通过高温消毒、煮沸或蒸汽消毒完全可以达到消毒目的2.3传播途径及致病性乙型肝炎病毒通常是经过肠道外途径传播,其典型的传播途径是输入污染的血及血制品HBV的传染性很强，外科和口腔手术、针剌、使用公用剃刀、牙刷等物品，皮肤微小操作污染含少量病毒的血液，均可成为传染源另外, 由于乙型肝炎患者和HBsAg携带者的精液、阴道分泌物均可检出HBsAg，因此，两性接触传播乙型肝炎的可能性是存在的近来有人报告在急性乙型肝炎患者和慢性HBsAg携带者唾液标本中检测到HBsAg及Dane颗粒，因此，HBsAg随唾液经口传播的途径应当重视孕妇在妊娠后期患急性乙型肝炎，新生儿易感染此病2.4乙型肝炎预防、诊断和治疗2.4.1预防措施1）健康教育：应向群众宣传乙肝知识，认清乙肝病毒传播途径的复杂性和乙肝在我国人群中的普遍性，树立预防为主，自我保护意识2）执行新生儿乙肝疫苗计划免疫，做好产前检查，特别是HBsAg伴有HBeAg的双阳母亲新生儿，用乙肝疫苗联合乙肝高效价免疫球蛋白注射以阻断母婴传播3）献血员的筛选：献血员必须做到每次献血前检测血清转氨酶（ALT），以敏感的方法（ELISA）检测HBsAg，两项中任何一项阳性均不得献血。
4）防止医源性传播，各级医疗卫生单位，应严格实行一人一针一管2.4.2实验室检查及其诊断乙型肝炎的临床表现形式多样，诊断的依据除病人症状，体征外，须根据流行病学，实验室检查和或肝活检等手段进行综合分析，动态观察诊断1）流行病学资料：半年内接受过血及血制品或曾有其他医源性感染，生活中的密切接触，尤其是性接触2）症状：近期出现的无其他原因可解释的持续一周以上的明显乏力和消化道症状3）体征：肝肿大，伴有触痛或叩痛；皮肤，巩膜黄染4）肝功能检查：谷丙转氨酶（ALT）明显增高5）HBV标记物检查：乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性2.4.3 治疗 病毒性肝炎目前还缺乏可靠的特效治疗方法各型肝炎的治疗原则均以足够的休息、营养为主，辅以适当药物，避免饮洒、过劳或损害肝脏药物1）急性肝炎以一般及支持疗法为主①休息与隔离 应强调早期卧床休息，至症状明显减退，可逐步增加活动②饮食 饮食宜清淡，热量足够，蛋白质摄入争取达到每日1－1.5g/kg，适当补充维生素B族和C，不强调高糖和低脂肪饮食2）轻度慢性肝炎除一般及支持疗法以外，还需要进行对症和抗病毒治疗①休息 无需绝对卧床休息，宜用动静结合的疗养措施处于活动期的患者，应以静养为主；处于静止期的患者，可从事力所能及的轻工作。
症状消失，肝功能正常3个月以上者，可恢复其原来工作，但仍需随访1－2年②饮食 应适当进食较多的蛋白质，避免过高热量饮食以防止肝脏脂肪变性也不宜进食过多的糖，以免导致糖尿病③对症治疗 包括降低转氨酶制剂，如联苯双脂、垂盆草、齐墩果酸等，具有非特异性降低ALT的作用这些降酶药物虽然可能具有护肝的作用，但停药后容易产生ALT反跳故在显效后应注意逐渐停药一般的非特异性护肝药物，主要包括维生素类（B族、C、E、K等），促进解毒功能药物如葡醛内脂（肝泰乐）、还原型谷胱甘肽、维丙胺、硫辛酸等，促进能量代谢药三磷酸腺苷（ATP）、促进蛋白质合成药物（肝安、水解蛋白等）以改善微循环药物（丹参、低分子右旋糖酐等）可作为辅助治疗，但宜精简，避免使用过多药物④抗病毒治疗：a.干扰素 慢性乙型肝炎时干扰素使用的指征为：HBV在活动性复制中；肝炎处于活动期；HBV DNA血浓度低；抗-HBc IgM 阳性使用干扰素治疗时剂量应偏大（300万－600万U/次），疗程应偏长（6个月－1年）干扰素一般仅能抑制HBV复制，使HBeAg和HBV DNA转阴，而难以使HBsAg转阴b. 核苷类似物 拉米夫定（lamivudine，3TC，TM）主要通过抑制HBV DNA逆转录酶的活性及抑制共价闭合环DNA（covalently closed circle DNA,cccDNA）的合成而抑制HBV DNA的合成。
它不抑制线粒体DNA和骨髓，无直接调节免疫作用，因而基本上无不良反应长期（6个月以上）用药可使HBV DNA发生变异而产生耐药性3．从事实验室活动的危险性分析及相应的预防措施3.1实验室实验活动背景资料本实验室主要从事HBV/HCV/HIV 病毒及梅毒螺旋体的血清学检测HBV 抗体筛查实验: 酶免法(ELISA)3.2可能危害在实验操作过程中，接收样本时样本包装密封性不好造成样本泄露；操作过程中如打开容器盖时样本外溅，加样、孵育、震荡、分离保存血清等时由于操作不慎导致样本溅出、离心管破裂崩溅、气溶胶等实验室工作环境的污染，实验人员如果接触污染的实验仪器表面、冰箱、加样器、实验台、门把手及实验废弃物等均可能被感染3.3预防及处置措施3.3.1预防避免职业性血液及体液暴露是实验室预防HBV传播的主要措施1) 实验检测过程均应在生物安全防护Ⅱ级实验室内进行2) 操作者在实验全过程包括样品接收，都应穿戴好一切生物安全防护装备，一次性的口罩、帽子、乳胶手套，防护衣、必要时配戴防护镜等，操作全过程应严格执行实验室的标准操作规程（SOP）3) 尽量避免在实验室使用针头、刀片、玻璃器皿等利器，以防刺伤。
如果必须使用，在处理或清洗时应采取措施防止刺伤或划伤，并应对用过的物品进行消毒处理4）完成乙型肝炎病毒疫苗接种程序，并且进行抗体检测5）经过规范的生物安全培训，并经过严格考核和取得上级主管部门人员许可；近期较深的开放性伤口的人员应该禁止或限制其进入相关实验操作区6）限制在妊娠早期的工作人员进行病毒相关的感染性材料的操作7) 如接触物传染性危险大，可戴双层（两付）手套以增加保护操作时手套破损，应立即丢弃、洗手并戴上新手套8) 禁止采用口腔吸液管，必须使用移液器来操作实验室的所有液体9) 工作完毕，要对工作台面消毒工作台面应当用0.1%~0.2%次氯酸溶液消毒；用消毒液清洗后要干燥20min以上；10) 工作完毕，脱去手套后洗手，再脱去工作衣，用肥皂和流动水洗手3.3.2处置措施1) 所有的血液、血清（血浆）均应视为有潜在传染性，都应以安全的方式进行操作应按操作未知的有传染风险样品一样，小心存放、拿取和使用所有可能有传染性的质量控制和参考物质2) 接收样本时，核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏，如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，若样本外漏到标本容器外面，应立即用浸有5%含氯消毒液的多重软布及擦拭标本容器，必要时通知重新留取标本。
打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅废弃的标本视为高危物质放置到高压灭菌锅内消毒，同时立即更换污染的手套，污染的手套也应放到高压灭菌锅内灭菌3) 在进行操作时，若发生液体外溅，应将被溅的地方用5%含氯消毒液浸泡的物质覆盖，待消毒液起作用10-15分钟后清理该地方，移走吸水性物质所有实验用品应按污染物质处理，放入高压灭菌锅内灭菌4) 在离心过程中，若发生离心管破裂及样本外溅，应立即停止离心，待离心机自动停止并发出提示信号30分钟后，确保穿戴好一切防护用品后，方可打开离心机盖，用止血钳子夹出离心的碎片，被样本污染的地方，防置浸泡有5%含氯消毒剂的吸水性物质，待消毒剂起作用后10-15分钟再清理污染处，移走吸水性物质，并用0.5%含氯消毒剂或2%戊二醛多次消毒污染处所有消毒处理用过的物品应按高危物质处理，放入高压灭菌锅内灭菌4．实验室职业暴露后的立即处理职业暴露发生后，应立即报告尽快地使用HBIG、乙型肝炎疫苗 1) 皮肤针刺伤或切割伤：立即用肥皂和大量流水冲洗，过程中挤压伤口尽可能挤出损伤处的血液，持续15—20min后并用75%酒精或者0.5%碘伏进行消毒2) 皮肤污染：用水和肥皂冲洗污染部位，并用适当的消毒剂浸泡，如75%乙醇或其它皮肤消毒剂。
3) 粘膜污染：用大量流水或生理盐水彻底冲洗污染部位4) 衣物污染：尽快脱掉污染的衣物，进行消毒处理5) 污染物泼溅：发生小范围污染物泼溅事故时，应立即进行消毒处理发生大范围污染物泼溅事故时，应立即通知实验室主管领导和安全负责人到达事故现场查清情况，确定消毒的程序5.职业暴露后预防与管理 5.1职业暴露后的预防应考虑几个因素：a.暴露源的HBsAg状态、暴露者的乙型肝炎疫苗接种情况和疫苗反应状态对未免疫接种的工作人员的血液或体液暴露，应启动乙型肝炎疫苗接种并对暴露者的乙型肝炎疫苗接种情况和疫苗反应状态进行评估推荐预防方案见表1表1 暴露于HBV的推荐方案暴露者的免疫接种和抗体反应状况处理暴露源HBsAg阳性暴露源HBsAg阴性暴露源不明确或未检测未免疫接种注射乙型肝炎免疫球蛋白、乙型肝炎疫苗接种乙型肝炎疫苗接种乙型肝炎疫苗接种已免疫接种有反应者不需处理不需处理不需处理已免疫接种但抗体反应未知测试抗-HBs，如果有，不需处理；否则施与HBIG和疫苗增强。