1反相高效液相蒸发光散射检测法测定三金软胶囊中羟基积雪草苷含量[摘要]目的：建立测定三金软胶囊中羟基积雪草苷含量的方法方法：采用反相高效液相色谱法测定羟基积雪草苷含量色谱条件为 DiamonsilC18 柱(150mm×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇-水(50∶50)，检测器为蒸发光散射检测器结果：羟基积雪草苷在 1.006~10.064μg 的范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9992） ，精密度、8h 内稳定性、重复性均符合要求，平均回收率为 100.16%（RSD=2.28%） 结论：该含量测定方法灵敏、准确，重复性好，专属性强，适合羟基积雪草苷的含量测定[关键词]三金软胶囊；高效液相色谱法；蒸发光散射检测器；羟基积雪草苷[Abstract]Objective：TodeterminethecontentofmadecassosideinSanjinSoftCapsulae.Methods：HPLCmethodwasusedtodeterminethecontentofmadecassoside.ThecolumnwasDiamonsilC18(150mm×4.6mm,5μm),themobilephasewasmethanol-water(50∶50),andtheevaporativelight-scatteringdetector(ESLD)wasusedasdetector.Results：Thelinearrangewas1.006-10.064μg(r=0.9992),precision,stabilityandreproducibilityweregood,theaveragerecoverywas100.16%(RSD=2.28%).Conclusion：Themethodissensitive,accuratewithgoodreproducibilityandstrongspecificity,anditcanbeusedforthedeterminationofmadecassoside.[Keywords]SanjinSoftCapsulae;HPLC;ELSD;Madecassoside三金软胶囊是由金樱根、积雪草等中药组成的复方制剂，具有清热解毒、利湿通淋、益肾的功效。
可治疗下焦湿热，小便短赤，淋沥涩痛，热淋，肾盂肾炎，膀胱炎，肾虚湿热下诸证者[1，2]临床应用广泛，具有较好的疗效本研究参考文献[3]使用反相高效液相色谱法，测定积雪草中羟基积雪草苷的含量1 仪器与试药Agilent1100series 高效液相色谱仪，SEDEX75 蒸发光散射检测器，AgilentHPLC 色谱工作站；羟积雪草苷对照品（中国药品生物制品检定所） ；三金软胶囊(自制)；甲醇为色谱纯；水为重蒸馏水；其余试剂均为分析纯2 方法与结果2.1 色谱条件DiamonsilC18 柱(150mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇-水(50∶50)；检测器为蒸发光散射检测器；漂移管温度：35℃；载气（空气）压力：3.6bar；柱温30℃；流速 1.0ml/min[2，3]色谱图如图 1 所示2.2 溶液配制2.2.1 对照品溶液的制备取羟基积雪草苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 1ml 分别含 0.2mg、0.6mg 的溶液，即得2.2.2 供试品溶液的制备取本品 12 粒，精密称定内容物 1.0g，精密加入甲2醇 40ml，称定重量，超声处理（功率 250W，频率 40kHz）30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。
精密量取续滤液 25ml，回收溶剂至干，残渣加水 20ml 使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取 2 次，每次 15ml，合并提取液，用氨试液洗涤 2 次，每次 15ml，取正丁醇液，减压回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至 5ml 量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得另按处方制备缺积雪草的三金软胶囊，同法制得阴性样品溶液，备用2.3 标准曲线精密吸取羟基积雪草苷（0.503mg/ml）对照品溶液2、4、8、12、16、20μl 进样，测定峰面积，以峰面积对进样量分别取对数后，进行线性回归，回归方程为：A＝1.352M+15.698（r=0.9992） ，表明羟基积雪草苷在 1.006～10.064μg 的范围内，进样量与峰面积的线性关系良好2.4 精密度试验精密吸取羟基积雪草苷对照品溶液 10μl，连续进样 6 次，记录峰面积，RSD=1.56％，表明仪器精密度良好2.5 稳定性试验取供试品溶液，在 8h 内每隔 2h 精密吸取 10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，其 RSD=1.80%，表明供试品溶液在 8h 内稳定性良好2.6 重复性试验取样品 5 份，每份 1.5g，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，测定并计算其含量，RSD=1.90%，表明分析方法的重复性良好。
2.7 回收率试验精密称取已知羟基积雪草苷含量的样品 6 份，分别精密加入定量羟基积雪草苷对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率，结果见表 12.8 样品测定分别精密吸取上述两种浓度的对照品溶液各 10μl，供试品溶液 10μl注入液相色谱仪，测定峰面积，用外标两点法对数方程计算样品中羟基积雪草苷的含量，3 批样品含量分别为 1.85、1.80、1.83mg3 讨论在研究过程中，根据羟基积雪草苷易溶于水、醇等极性溶剂，不溶于氯仿等低极性溶剂的理化性质，并考虑醇提时易溶出大部分的其他成分，特别是有机酸、酚类及多糖类成分，对所测的羟基积雪草苷干扰严重的情况，实验采用甲醇溶液超声提取，回收甲醇，加水溶解，正丁醇萃取，再用氨水洗涤正丁醇，基本避免了有机酸、酚类及多糖类等成分的干扰使用紫外检测器的 HPLC 图谱中，羟基积雪草苷峰干扰较多，专属性不强；使用蒸发光散射器的 HPLC 图谱中，羟基积雪草苷峰干扰少，方法简便、准确、可靠，可作为质量控制方法[参考文献][1]中华人民共和国国家药典委员会.《卫生部药品标准》中药成方制剂第１２册[S].1997.11.[2]中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2005.326.3[3]曾建国,宋云飞,侯团章,等.HPLC 法测定积雪草中三萜类化合物的含量[J].基层中药杂志,2000,14(6):7-8.。