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昆虫基因组DNA的提取

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昆虫基因组DNA的提取_第1页
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昆虫基因组DNA提取方法一 CTAB法1. 将95%酒精浸泡过的标本取出,用吸水纸吸去标本表面的乙醇,用IXTE Buffer 浸泡两次,每次 20min;2. 解剖取个体胸部肌肉组织约0.02g,将组织转入1.5mL离心管加入ImL 液氮使其迅速冻结, 用玻璃棒迅速有力地将团状组织研磨成细粉末3. 然后加入600》L预热至60°C的2%CTAB提取缓冲液(2% CTAB,0.1mol/L Tris・C1 pH8.0, 0.02 mol/L EDTA, 1.4 mol/L NaCl), 20mg/mLProK 2.5 M L(终浓度100mg/mL),和0 -巯基乙醇溶液1.0》L,轻轻混匀,60C下恒温水 浴2.0-3.0 hr,不时加以轻轻混匀4. 水浴后取出,等体积氯仿/异戊醇(24: 1)混合液混匀,然后7,000 rpm 离心10min,取其上层清液,量体积;重复一次5. 在上层清液中加入2倍体积冷冻的无水乙醇于一20C沉降2小时(或1 倍体积异戊醇于一20C沉降1hr)4°C、10,000 rpm下离心15min,取沉淀 小心 弃上清6. 用500m L 70%预冷的乙醇洗涤沉淀,10,000 rpm下离心5min,弃上清; 重复一次。

7. 室温晾干或抽真空干燥;用40m L TE Buffer重溶8. 于基因组DNA中加入终浓度为50ug/mL的RNase (每次使用前90C灭 活 10min),于 37C消化 1.0-1.5hr9. 用0.8%的琼脂糖凝胶检测,取3m L DNA样品及2》L Load-buffer (含溴 酚蓝和缓冲液),加入点样孔实验所用 Marker 是 DNA(EcoR/HindIII), 100V 电压电泳90分钟凝胶成象分析仪进行检测10.用紫外可见分光光度计测定DNA的OD值,判定DNA纯度和浓度。

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