第24卷增刊2003年10月Vol.24Suppl.Oct.2003质谱学报JournalofChineseMassSpectrometrySociety低流速高效液相色谱-质谱联用技术用于大鼠脑细胞中核昔酸的分析蔡宗苇…，钱天秀」杨思敏2(1.香港浸会大学化学系.香港，2.香港浸会大学生物系.香港〉200200踪昔和其相应的核昔酸，单磷酸腺昔，双磷酸腺苛和三磷酸腺昔是重要的生物分子，因为在各种细胞内的生化过程中他们提供能量和反应底物.检测他们在细胞内的水平对细胞内的能量代谢可提供有价值的信息，因此建立灵敏和可信的分析方法来检测细胞中微量的核昔酸显得很重要1实验部分11主要仪器及装置APIQSTARPulsari型四极杆飞行时间质谱联用仪：加拿大AppliedBiosystem公司产品，电喷雾高子源;Agilent1100毛细管高效液相色谱：美国Agilent公司产品.L2实验材料及处理大鼠C6glioma细胞在含不同浓度氧化锌的媒介中于37C分别培养3h,除去媒介后，用高氯酸裂解细胞以提取核昔酸，再用等当景的量氧化钾中和酸性提取液，然后离心，上清液用于核昔酸检测二甲基己胺离子对试剂和乙睛为流动相用于核昔酸的分离.以正离子电离方式进行检测.2结果和讨论2.1微径液相柱用于核昔酸的分离微径液相柱的优点在于能为质谱检测提供较好的灵敏度以对微量成分达到有效的检测。
2.2商子对试剂的应用由于核昔酸的磷酸根上带负电荷，极性很大，常规色谱条件下在反相柱上不会保留，但带正电荷的离子对试剂能够和带负电荷的核昔酸之间形成加合离子,使其能够用反相高效液相色谱得以分离，并且能够用正离子质谱检测离子对和核首酸之间形成的加合高子被选作定量分析离子，因为它们比质子化的核昔酸离于灵敏度高出几十倍图1为离子对试剂用在流动相中使核昔酸得以分离的色谱图.7.62A[AMP+DMHA+H-]m/z477[2008.602.04.06.08.010.012014.016.0加in[ADP+DMHA+H*]mZz5571002.04.06.08.010.012.014.016.0t/min7.62【ATP+DMHA+H1m/z6372.04.06.08.010.012.014.016.0t/mtn图】离子对试剂和核昔酸加合育子的液-质色谱图Fig.1LC-MSspectraofion-pairingagentandadductionsofnucleotide2.3液相-质谱联用方法用于生物样品中核昔酸的检测建立的该液相-质谱联用方法应用于生物样品中核昔酸的检测，结果显示，该方法对在极其复杂成分的生物样品中的核昔酸具有很高的灵敏性，检测限达到纳克级，所得结果已应用于细胞能量代谢的研究.参考文献：⑴CAIZ.AnalyticalSciences.2001,17a；199.[2]CAIZ,SONGF,YANGMS.JChromotogrA,2002,976:135.LowFlow-rateHPLC-MSforNucleotideAnalysisinRatBrainCellsCAIZong-wei1**,QIANTian-xiu1,MildredS.M.YANG2(1.DepartmentofChrmiitry^HongkongBaptistUniversityfHongkong,China;2.DeparimeniofBiology»HongkongBaptistUniversily,Hongkong.China}Abstract:Amethodusingion-pairingHPLC-MSwasdevelopedforanalyzingadenosine5*-monophosphate(AMP),adenosine5'-diphosphate(ADP)andadenosine5'-triphosphate(ATP).Dimethylhexylamine(DMHA)wasusedasion-pairingagenttoretainandseparatetheanalytesonareversed-phasemicroborecolumnwithagradientprogram.PositiveionESI-MSwasusedforthedetection.AdductionsofDMHAwithAMP.ADPandATPweredetectedasthemostintensivepeaksandthusselectedasquantitativeions.Externalcalibrationmethodwithlinearrangesfrom0.1to20pmol/LforAMP,2to20pmo)/LforADPand2.5to20pmol/LforATPwasusedforthequantification.ThemethodwasappliedtodeterminelevelsofAMP,ADPandATPinextractsofculturedC6gliomacellsthatwerepre-treatedwithvariousconcentrationsofZn.Theresultsindi catedthattheadditionofZninarangeof40to120ptg/mLdidnotaffecttheenergystatusofthecells.Keywords：massspectrometry；analysisofnucleotide；HPLC-MSc妃cu赋〈eccceecccc€-g«-ccccccccceec«cccgycecccm€€-6«c€€C€gc(上接第76页)MatrixEffectsintheDeterminationofBitespiramycininHumanPlasmaandUrineWithLC-MS/MSTANGYun~biao,WUYi.WANGYing-wu,SHIXiang-guo,HULi*ang,GUJing-ka「(ResearchCenterforDrugMetabolism.JilinUniversity^Changchun130021,China)Abstract:ThematrixeffectswerestudiedinthedeterminationofbitespiramycininhumanplasmaandurinewithLC-MS/MS.Theresultsdemonstratedthatdifferentsamplesprepationmethodscouldgivedissimilareffectscausedbymatrix.Keywords:massspectrometry；studyonmatrixeffect?LC-MS/MSjdeterminationofbitespi ramycin；humanplasmaandurine。