第十二章(3) 水果作物的组织培养• 本章内容提要：• 一、草莓微茎尖培养 • 二、葡萄的组织培养 • 三、无花果的组织培养本章目的和要求：（1）掌握草莓微茎尖培养的大致过程，了解鉴定草莓无毒病苗的方法； （2）掌握葡萄的组织培养过程 （3）掌握无花果的组织培养第一节 草莓的组织培养一、形态特性和生物学特性 草莓为重要的浆果植物，栽培分布很广，其总 产量在浆果类中仅次于葡萄，居世界第二位 草莓果实柔软多汁，含丰富的糖、酸、矿物质 ，维生素等草莓可鲜食，也可加工成果酱， 果酒等其颜色鲜艳，是良好的配餐食品1. 形态特性 •草莓属多年生草本植物，植株矮小，呈半平卧丛 状生长，须根系，在土壤中分布较浅 •草莓的茎呈短缩状，分地上和地下部分，地上短 缩茎节间极短，节密集，其上密集轮生叶片，叶腋 部位着生腋芽 •匍匐茎是草莓的特殊地上茎，是其营养繁殖器官 ，茎细，节间长，一般座果后期发生2. 生物学特性• 草莓根系在土壤温度达到2℃时开始活动，在10℃ 时开始形成新根，根系生长的最适温度为15~20℃， 秋季温度降低到7~8℃时生长减弱 • 春季气温达5℃时植株开始萌芽，茎叶开始生长 草莓的根系分布较浅，加上植株矮小，叶片较大，因 此蒸发量大。
• 在整个生长季节，叶片几乎都在不断地进行老叶死 亡、新叶发生的过程，叶片更新频繁二、草莓脱毒苗的培养1.热处理脱毒 将草莓植株在40~41℃温度下处理4~6周，然后取微 茎尖培养 2.微茎尖脱毒 (1)初代培养 ： • 外植体消毒：匍匐茎上的顶芽，用自来水流水冲 洗2～4h，剥去外层叶片，在无菌条件下，用0.5% 次氯酸钠溶液表面消毒5min，并不停地搅动 • 于超静工作台上剥取茎尖并接种•培养基：MS + BA 0.25 + NAA 0.25 或 MS + BA 0.5 + NAA 0.2中•培养条件：22～25℃，光照16～18h，3000lx经2～3个月 的培养，可生长分化出芽丛•注意！在低温和短日照下，茎尖有可能进入休眠，所以较高 的温度和充足的光照时间必须保证2) 继代培养 培养基：MS + BA 0.5 + NAA 0.01 可将芽丛小块分成单株，再转入前述的分化培养基中， 又会重复上述过程，达到扩大繁殖的目的3) 生根培养 生根培养基：1/2MS+IBA0.14)驯化、移栽： • 用镊子把草莓苗从试管瓶中取出，洗掉根系附带 琼脂培养基事先备好8×8cm或6×6cm的塑料营养 钵，内装等量的腐殖土和河砂。
• 栽前压实，浇透水，用竹签在钵中央打一小孔， 将试管苗插入其中，压实苗基部周围基质，栽后轻 浇薄水，以利幼苗基部和基质密合 • 要“深栽浅埋”，即根要深栽、根茎略高于地面 3．花药培养脱毒 花药培养操作简单，因经愈伤组织途径，再分化得 到的即为无病毒苗，所以可免去病毒鉴定工作1）取材与外植体消毒 • 预处理：单核期的花蕾，置于洁净培养皿中，内 放一层滤纸，滴蒸馏水数滴保湿，放入3～4℃冰箱 中低温保存3～4d • 外植体消毒：经预处理的花蕾先在70%酒精中浸 泡半分钟，取出放入新配制的饱和漂白粉上清液中 消毒10min，用无菌水冲洗3次 • 在超净工作台上剥取花药，立即接种培养基: MS + 2,4–D 0.4 + IAA 2.0 培养条件：24～26℃,光照10h/d，1500lx, 20d后 可产生乳白色的愈伤组织2） 植株分化 • 将诱导出的花药愈伤组织转移到1/2MS基本培养基 ，添加GA0.5，BA0.5和三十烷醇4 • 愈伤组织经培养后很快转绿，以后微带淡紫红色 ，15d后在表面分化出半球形小突起，转为绿色 • 20d后分化出幼叶、幼茎，并有不少突起物，以后 陆续分化出新梢。
四、草莓无病毒苗的鉴定草莓花药培养得到的为无病毒苗，而用生长 点培养得到的植株，则必须经过病毒鉴定，确定 其不带病毒，才可以大量繁殖，用于生产 1、草莓病毒的种类草莓病毒主要有四种：斑驳病毒，皱叶病毒， 脉结病毒和轻型黄边病毒2、草莓病毒的鉴定方法因草莓的病毒通过汁液接种不感染，所以通常采 用小叶嫁接法来进行鉴定1.从被鉴定株采集新叶，除去两边的小叶，中央的小叶 带1～1.5cm的叶柄，把它削成楔形作接穗 2.指示植物则除去中间的小叶，在叶柄的中央用刀切入 1～1.5cm，再插入接穗，用线把接合部位包扎好为 了防止干燥，在接合部位涂上少量的凡士林 3.在2周内，可罩上塑料袋，置于半见光的场所 4.约经2周时间，撤去塑料袋 5.若带有病毒，嫁接后1～2个月，在新展开的叶、匍匐 茎或老叶上会出现病症步骤：指示植物待鉴定植物嫁接后的植物指示植物接穗五、草莓无病毒苗的繁殖和利用1. 防止蚜虫的危害 • •无病毒苗的繁殖重要的是要防止无病毒苗再度污染 • 草莓病毒主要是蚜虫传播的，故要搞好防蚜虫工作 • 草莓病毒通过蚜虫吸吮汁液而得到传播，短时间即 可完成 • 防治时可使用马拉松乳剂，氧化乐果乳剂等接触杀 虫剂，防治期5～6月，9～10月，特别是9～10月一次 ，可防止蚜虫的越冬。
2．繁殖程序及措施• 繁殖程序可分五步：脱病毒鉴定生产出无毒苗、原种种苗培养、原种种 苗繁殖、良种种苗繁殖、生产用苗繁殖和栽培苗繁殖 • 前四步在隔离室中进行，后一步在露地进行 • 为提高无病毒母株的繁殖株数可采用赤霉素处理和 摘蕾的方法，在5月上旬和6月上旬分两次进行 • 摘蕾可减轻母株的营养负担，促进匍匐茎的大量发 生，田间地每一株可繁殖150~200株第二节 葡萄的组织培养组培苗一、形态特征和生物学特性• 果品中，葡萄产量及栽培面积在全世界一直居于 首位其果实除作为鲜果食用外，主要用于酿酒 ，还可制成葡萄汁、葡萄干和罐头等加工品• 形态特性：葡萄属落叶木质藤本植物，葡萄原 产于温带地区 • 生物学习性：深根性作物，根系垂直分布、发 达，根系抗寒力很弱，大部分欧洲种葡萄的根系 在－5～－7℃时即受冻，某些美洲种能忍受 －11～－12℃左右的低温二、葡萄的组织培养1.选材、外植体消毒及接种 葡萄新梢顶端取1～2㎝的茎尖，除去幼叶后在5%次 氯酸钠溶液中浸泡2～3min，消毒灭菌，以后用无菌 水冲洗3次，再在0.1%升汞溶液中浸泡约2min，再用 无菌水冲洗4次在无菌条件下分离出约2㎜长的茎 尖，接种到培养基上。
2.培养基：MS ＋ BA 1~2 ＋ NAA 0.01 ＋ LH 100 ＋蔗糖2% ＋ 琼脂0.6% 3.茎尖的分化 葡萄1～2㎜茎尖接种后成活率较高，接种成活的茎尖 1个月左右开始分化幼叶和侧芽，2个月左右，由于侧 芽的不断增生，形成芽丛由于不同品种对BA和NAA的反应不同，故生长有明显 区别，如：巨峰、大粒白香蕉、赤霞珠等品种，由于 顶端优势强，侧芽生长势弱，故增殖率低，但成苗率 高；白羽、贵人香等大多数品种侧芽分生能力强，可 在幼茎上多次分枝，故成苗率低4.茎尖苗的生长 • 在茎尖分化培养中产生的成苗率低和成苗困难，密 集生长的芽丛，可将分化培养基中的BA浓度减低至 0.5，• 同时添加GA30.2，则经1个月的培养，就可长成2～ 3㎝高的幼茎• 此外黑暗处理对幼茎的伸成，提高成苗率，也有明 显的效果5、生根与移栽 • 切取2～3cm的茎尖苗，接种到MS + IAA 0.4 + NAA 0.05 培养基中，进行生根培养• 1～2周后幼苗开始生根，1个月形成完整的根系， 同时具备5～6片新叶• 移栽时洗去根上的培养基，栽到蛭石基质内，使 根系具有良好的通气条件，盖上塑料薄膜，经7～ 10d锻炼适应后可去掉，移栽成活率在90%左右。
提高葡萄试管苗移栽成活率要注意：1、幼苗生长要健壮；2、要保持空气湿度；3、根际通气良好；4、要尽量减少杂菌污染；5、浇灌的溶液浓度不能过高第三节 无花果的组织培养新疆无花果无花果树一 、特性和生物学习性 1、形态特征：无花果为桑科、无花果属的落小乔木，是 一种亚热带果树花单性，隐于囊状总花花托内，果实由总花托 和其他花器官组成，呈扁圆状或卵形，成熟后顶端开裂，肉质柔 软，味甜具有观赏和药用兼备的价值2、生物学特性：用无性繁殖法繁殖的无花果，通常于 栽植后2~3年开始结果6~7年进入盛果期以后树冠不断扩大 ，产量逐渐增长，经济年限可延续40~70年生长势很强幼树 的新梢或徒长枝年生长量可达到2m以上无花果不耐寒，冬季 温度达-12℃时新梢顶端就开始受冻死亡无花果能耐较高的温 度而不致受害 二．无花果的茎段培养• 外植体消毒：将采来的健壮的嫩茎削去大叶片， 留下带腋芽的茎段，切成3～4cm长的小段，用流水 冲洗3h ,以清除表面污染物，然后放入75%酒精中， 再用0.1%氯化汞消毒7～10分钟，最后用无菌水冲洗 4～5次，在无菌条件下将茎段横切成长约1 cm接种 • 培养基：MS+BA0.5～1.0长芽中。
• 培养：8天后外植体接触培养基的一端切口周围长 出嫩绿色、质地紧密的愈伤组织，同时腋芽展开， 愈伤组织和腋芽的诱导率均为100% 丛生芽增殖培养基：MS + BA 1～2 + NAA 0.1～0.2 腋芽萌生成绿色簇生状，每个腋芽上可生出15~28个 芽丛，逐渐长成苗丛当一部分芽长高至2～3cm时，切取单苗转移到生根培 养基上MS+NAA0.2上，11天左右开始生根20d左右长成具有根系的完整植株，这时可取出移栽 ，成活率达98%培养条件：温度 23~31℃，光照时间 12~14h/d，光 照强度为1700~2400LX左右作业：• 1、以葡萄为例，论述葡萄脱毒苗培养的过 程。