1脑康灵胶囊抗大鼠脑缺血的研究作者：胡雪勇 眭玉霞 吴芹 余丽梅 黄燮南 孙安盛【摘要 】 目的观察脑康灵胶囊对脑缺血/再灌注损伤的保护作用，并对其机制作初步探讨方法采用大鼠大脑中动脉缺血 2 h/再灌注22 h 模型,神经病学评分，脑梗塞范围及脑组织水含量变化，观察脑康灵胶囊抗脑缺血/再灌注损伤的效应；通过测定大鼠脑组织中一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS） ，超氧化物歧化酶（superoxide disumtase,SOD）活性及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量的变化以探讨药物作用的机制结果脑康灵胶囊可降低大鼠脑缺血/再灌注后神经病学评分及梗塞范围，降低脑组织 MDA，NOS 含量及升高 SOD 活性结论脑康灵胶囊对脑缺血/再灌注损伤有保护作用，其作用机制与抑制 NOS 活性、抗脂质过氧化、提高 SOD 活性有关 【关键词】 脑康灵胶囊 脑缺血/再灌 脑缺血保护Abstract:ObjectiveTo observe the protective effects of Naokangling Capsule on cerebral ischemia/reperfusion injury in rats.MethodsThe rat model of middle cerebral artery 2ischemia 2h/reperfusion 22h was established.The neurological scale, cerebral infracted volume, cerebral water content, activities of NOS and SOD were measured. ResultsThe average neurological scote,cerebral infracted volume,cerebral water content,activity of NOS,content of MDA in Naokangling Capsule group significantly decreased. Meanwhile, the activity of SOD significantly increased compared with control group. ConclusionNaokangling Capsule may protect cerebral ischemia/reperfusion damage, and the mechanism might be related with inhibiting the activity of NOS, lipoperoxidation and increasing the avtivity of SOD.Key words:Naokangling capsule; Ischemia/reperfusion; Cerebral ischemia protection目前的研究表明脑缺血损害的机制包括细胞内钙超载，兴奋性氨基酸的毒性作用，自由基损害与凋亡等。
脑康灵主要成分由中药夏天无和钩藤生物碱等组成，前者为罂粟科植物伏生紫堇 Corydalis decumbens（Thunb.）Pers 的干燥块茎，具有活血祛淤作用；后者为常用中药钩藤 Uncaria rhynchophylla Jackson 的茎叶，有活血通络等功效，主要成分有钩藤碱和异钩藤碱实验采用灌胃给药，3观察脑康灵胶囊对动物脑缺血损伤的影响，为临床脑缺血寻找新型有效的治疗药物１ 材料与仪器1.1 药品与材料脑康灵胶囊由本校药物化学教研室制成，0.3 g/粒，主要成分为夏天无及钩藤总碱等尼莫地平（nimodipine,Nim）系山东新华制药股份公司产品(批号 050625)，MDA，SOD，NOS，蛋白含量测定试剂盒购于南京建成生物工程公司1.2 仪器 BI-2000 图象分析系统，成都泰盟公司；JY92-11超声细胞粉碎机，宁波新芝科器研究所1.3 动物 SD 雄性大鼠，体重 230 ～ 270 g，购于中科院上海实验动物中心（清洁级） 2 方法2.1 制模及给药参照 Nagasave 法［1］制模大鼠苏醒后按 Bederdson 神经病学评分达 3 分［2 ］ ，脑内蛛网膜下腔无出血作为模型成功的标准，选入实验组。
已制模大鼠 126 只，随机分为46 组: 假手术组，生理盐水组，尼莫地平 2 mg/kg 组，脑康灵 20，40,60 mg/kg 组，每组 21 只制模型前灌胃给药 1 ml/100 g 体重，2 次/d ，共 5 次，最后 1 次给药后 30 min 制模,制模后 12 h 再给药 1 次，各组动物于缺血 2 h/再灌注 22 h 后再进行神经病学评分2.2 脑梗塞范围测定实验各组随机取大鼠 7 只断头取脑，冠状切分脑组织成 5 片， TTC 染色测量梗塞面积［3］ 取出后置 10%福尔马林液中避光保存，用 BI-2000 图象分析系统测出截面上梗塞区域占全部面积的百分比2.3 脑含水量测定每组再随机取 7 只大鼠断头取脑，正中矢状切分左右大脑后分别称湿重，100℃烤箱烘烤至恒重（即干重） ，计算脑含水量（%）=（湿重－干重）/湿重×100%2.4 脑组织 NOS，SOD，MDA 含量测定每组剩余 7 只大鼠断头取脑，称重，按 1∶10 加 NS，超声细胞粉碎制成 10%组织匀浆，冷冻离心 20min（0℃ ，15 000 r/min） ，取上清液置-84℃低温冰箱中保存采用黄嘌呤氧化酶法测定 SOD，硫代巴比妥酸法测定 MDA，比色法测定 NOS。
2.5 统计学方法数据的收集和处理实验结果均以±s 表示，两5小样本均数经方差齐性检验，采用 t 检验3 结果3.1 脑康灵胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤神经病学评分、脑梗塞范围及含水量的影响大鼠脑缺血 2 h/再灌注 22 h 后，假手术组大鼠神经病学评分均为 0 分，无脑梗塞；脑康灵胶囊20，40，60 mg/kg 与生理盐水组比较，均可明显降低脑缺血/再灌后神经病学评分，脑缺血范围和脑水含量且呈剂量依赖性结果见表 1表 1 脑康灵胶囊对大鼠神经学评分及脑缺血/再灌脑梗塞区域和脑含水量的影响(略)3.2 脑康灵胶囊对大鼠缺血再灌注脑组织中NOS， SOD，MDA 的影响与假手术组比较，生理盐水组 NOS 活性及 MDA 含量显著升高，SOD 活性降低；脑康灵胶囊给药各组与生理盐水组比较，明显降低 NOS 活性和 MDA 含量，升高 SOD 活性结果见表 2表 2 脑康灵胶囊对 NOS，SOD 活性和 MDA 含量的影响(略 )3 讨论脑缺血损伤机制复杂，相关因素很多，其中细胞内钙超载被认为是主要环节缺血/再灌状态下产生的 OH-，H2O2，NO 等自由基6在局部大量聚集，体内 SOD 活性减低，自由基诱导细胞膜脂质过氧化而使细胞膜受损，最终细胞死亡。
缺血/再灌后脑细胞内钙积聚，Ca2+与钙调蛋白（CaM）结合而激活 NOS，同时脑缺血/再灌后NOS 的表达也增加，导致 NO 的生成增加生理水平的 NO 与学习记忆及神经突触的可塑性有关，而过量的 NO 可产生神经毒性文献报道夏天无总碱及从总碱中提取的有效成分具有舒张脑血管，增强小鼠对低压缺氧的耐受力，尚具有中枢抗胆碱脂酶等作用［4，5］ 大量研究已表明钙通道阻滞剂对脑缺血有保护作用，钩藤生物碱具有抑制 45Ca 转运、舒张血管及对豚鼠心房产生负性变时和变力等钙拮抗剂特征［6］ 我们将两种生物碱制成胶囊，实验采用大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型，结果显示脑康灵胶囊20，40，60 mg/kg 组均能明显降低大鼠脑缺血再灌后神经病学症状及减少脑梗塞范围，降低 NOS 活性和 MDA 含量，并升高 SOD活性表明脑康灵胶囊抗脑缺血损害的作用与减少自由基产生，阻断与 NOS 表达有关的信号传导途径，抑制脂质过氧化有关参考文献】［1］Nagasava H, Kogure K. Correlation between cerebral blood flow and histologic changes in a new rat model of middle cerebral artery occlusion［J ］.Stroke,1989,20(8):1037.7［2］Bederson JB, Pitts LH, Tsuji M, et al. Rat middle cerebral artery occlusion:evaluation of the model and development of a neurolofic exemination［J］.Stroke,1986,17(3):472.［3］张均田. 现代药理实验方法 ,第 1 版［M］.北京：人民卫生出版社，1998：1241.［4］徐丽华，顾振纶，蒋小岗, 等.夏天无总碱中抗胆碱酯酶活性成分的研究［J］.药学学报，2002，37（11 ）:902.［5］李 斌, 吴 芹, 石京山, 等. 普鲁托品对大鼠主动脉血管平滑肌细胞内游离钙浓度和蛋白激酶 C 活性的影响［J］.生理学报，2005,57(2):240.［6］朱 毅，刘国雄，黄燮南,等. 钩藤碱和异钩藤碱对豚鼠心房的负性变时和变力作用［J］.中国药理学与毒理学杂志，1993,7（2）：117.。