生物样品的采集和制备一、植物样品的采集与 制备 二、动物样品的采集与 制备作者生物样品指： 植物的花、茎、叶、根、种子动物的体液：尿、血、唾液、胆汁、胃液、淋巴液、 其他分泌液；毛发、肌肉、组织器官；各种微生物一、植物样品采集l1.1 采样原则l1.2 样品采样与制备l1.3 标签内容 l1.4 植株样品的处理与保存1.1 植物样品采集原则l① 代表性：代表性系指采集代表一定范围污染情况的 植株为样品选择一定数量的能代表大多数情况的植物 株作为样品，采集时，不要选择田埂、地边及离田埂地 边2m范围以内的样品l② 典型性：典型性系指所采集的植株部位要能充分反 映通过监测所要了解的情况采样部位要能反应所要了 解的情况，不能将植株各部位任意混合l③ 适时性：适时性系指在植物不同生长发育阶段，施 药、施肥前后，适时采样监测，以掌握不同时期的污染 状况和对植物生长的影响根据研究需要，在植物不同 生长发育阶段，定期采样，以便了解污染物的影响情况 一）样品采样1.粮食作物由于粮食作物生长的不均一性，一般采用多点取样，避开 田边2米，按梅花形（适用于采样单元面积小的情况）或“S” 形采样法采样。
在采样区内采取10个样点的样品组成一个混 合样采样量根据检测项目而定，籽实样品一般1公斤左右， 装入纸袋或布袋要采集完整植株样品可以稍多些，约2公斤 左右，用塑料纸包扎好 2 水果样品平坦果园采样时，可采用对角线法布点采样，由采样区的 一角向另一角引一对角线，在此线上等距离布设采样点，采 样点多少根据采样区域面积、地形及检测目的确定山地果 园应按不同海拔高度均匀布点，采样点一般不应少于10个 对于树型较大的果树，采样时应在果树的上、中、下、内、 外部及果实着生方位（东南西北）均匀采摘果实将各点采摘的果品进行充分混合，按四分法缩分，根据检 验项目要求，最后分取所需份数，每份1公斤左右，分别装 入袋内，粘贴标签，扎紧袋口水果样品采摘时要注意树 龄、长势、载果数量等3 蔬菜样品蔬菜品种繁多，可大致分成叶菜、根菜、瓜果三类，按 需要确定采样对象菜地采样可按对角线或“S”形法布点，采样点不应少于 10个，采样量根据样本个体大小确定，一般每个点的采样 量不少于1公斤从多个点采集的蔬菜样，按四分法进行缩 分，其中个体大的样本，如大白菜等可采用纵向对称切成4 份或8份，取其2份的方法进行缩分，最后分取3份，每份约 1公斤，分别装入塑料袋，粘贴标签，扎紧袋口。
如需用鲜样进行测定，采样时最好连根带土一起挖出 ，用湿布或塑料袋装，防止萎蔫采集根部样品时，在抖 落泥土或洗净泥土过程中应尽量保持根系的完整市场采样可参照市场水果取样方法进行采样（二）制备鲜样的制备：（1）将样品用清水、去离子水洗净，晾干或拭 干2）将晾干的鲜样切碎、混匀，称取100g于 电动高速组织捣碎机的捣碎杯中，加适量蒸馏水或 去离子水，开动捣碎机捣碎1—2min，制成匀浆对 含水量大的样品，如熟透的西红柿等，捣碎时可以 不加水；对含水量少的样品，可以多加水3）对于含纤维多或较硬的样品，如禾木科植 物的根、茎杆、叶子等，可用不锈钢刀或剪刀切（ 剪）成小片或小块，混匀后在研钵中加石英砂研磨 干样的制备：（1）将洗净的植物鲜样尽快放在干燥通风处风干 （茎杆样品可以劈开）如果遇到阴雨天或潮湿气候 ，可放在40—60℃鼓风干燥箱中烘干，以免发霉腐烂 ，并减少化学和生物变化2）将风干或烘干的样品去除灰尘、杂物、用剪 刀剪碎（或先剪碎再烘干），再用磨碎机磨碎谷类 作物的种子样品如稻谷等，应先脱壳再粉碎3）将粉碎好的样品过筛一般要求通过1mm 筛孔即可，有的分析项目要求通过0.25mm的筛孔制 备好的样品贮存于磨口玻璃广口瓶或聚乙烯广口瓶中 备用。
1.3 标签内容采样序号、采样地点、样品名称、作物品种、土壤名 称（或当地俗称）、成土母质、地形地势、耕作制度、前 茬作物及产量、化肥农药施用情况、灌溉水源、采样点地 理位置简图果树要记载树龄、长势、载果数量等采样种子1.4 植株样品处理与保存粮食籽实样品应及时晒干脱粒，充分混匀后用四分法 缩分至所需量需要洗涤时，注意时间不宜过长并及时 风干为了防止样品变质，虫咬，需要定期进行风干处 理使用不污染样品的工具将籽实粉碎，用0.5毫米筛子 过筛制成待测样品带壳类粮食如稻谷应去壳制成糙米 ，再进行粉碎过筛测定重金属元素含量时，不要使用 能造成污染的器械完整的植株样品先洗干净，根据作物生物学特性差 异，采用能反映特征的植株部位，用不污染待测元素 的工具剪碎样品，充分混匀用四分法缩分至所需的量 ，制成鲜样或于60℃烘箱中烘干后粉碎备用田间（或市场）所采集的新鲜水果、蔬菜、烟叶和 茶叶样品若不能马上进行分析测定，应暂时放入冰箱 保存野外采集木蓝二、动物样品的采集与制备 ㈠生物材料的采集 在实验动物功能评价中，需要采集的生物样品主要是 血液和尿液及组织脏器，它是反映受试物的生物学效 应和物质在体内代谢情况的最为重要的途径。
1．采血 2．采尿 3．骨髓采集大动物骨髓采集与人相近，多采取活体穿刺，穿 刺部位一般是胸骨、肋骨、髂骨、胫骨、股骨，这些 部位具有造血功能小动物，一般处死后，取胸骨或股骨，用注射器吸 取一定量的HanK’S液冲洗出4．组织标本采取和固定①选取原则：一般选取正常与病变组织交界处，如果眼看 不到明显变化，则各试验组标本部位应均匀一致 所选取组织应包括脏器的重要结构或全层，如肾皮质，髓 质和肾盂，选取时切勿挤压，应用手术刀，少用剪②大小：厚约3～5mm，大小为1.5～2cm2③标记：每块标本应用铅笔在纸片上标记好，纱布包扎， 投入定液④固定液：标本选取后应尽早浸入固定液，使组织处于生 前状态 电镜标本取活体，1分钟内须浸入固定液固定液视情况选用：a. 中性福尔马林液：vb. Bouin固定液：vc. 戊二醛固定液：㈡生物材料的处理 1.血液标本选择 ①全血：即抗凝血，主要用于Hb、 RBC、WBC、DC测定一些生 化指标 ②血浆：抗凝血离心分离，除去细胞成分所得主要用于凝血、纤维蛋白测定和分析用一些生化指 标③血清：不加抗凝剂，自然凝固后析出的澄清淡黄色透明液体夏季一般在血凝后30min分离血清。
冬季应置37℃水浴促使血清析出 血清成分接近于组织液的化学组成，适于测定机体各种 生化指标，测定血清中有关物质含量比全血更能反映机 体情况2.常用的抗凝剂 ①EDTA—Na2 ⑤草酸钠②肝素 ⑥草酸钾—草酸铵③枸缘酸钠 ⑦草酸锂④草酸钾㈢生物材料的制备 1．血浆制备： 自然分离：抗凝血置4℃冰箱，12h可使血细胞与血浆充分 分离 离心分离：抗凝血以3000rpm，5-10min. 保存：采血6h内从全血分离出的血浆在-18℃以下可保存12 个月 2．血清制备： 采血后室温下自然凝固后即析出血清 冬季，采血后37℃水浴30min，可加快凝固 或将全血置4℃冰箱3-4h，再以1500～2000rpm 离心15’， 上清液即为血清 血液凝固后用竹签或玻璃针（钝头），沿管壁轻轻剥离血块 ，血清即出，然后置2000～2500rpm ,离心20min轻轻吸 出血清备用 如上清液呈淡红色，甚至红色，表明有溶血，应废弃。
3．血细胞分离制备4．无蛋白血滤液制备 方法： ①使蛋白质脱水沉淀：常用甲醇、乙醇、丙酮等有机试 剂或（NH4）2SO4、Na2SO4，NaCl等中性盐类沉淀 ②有机酸沉淀剂：常用的有苦味酸，钼酸、磷钨酸、水 杨酸及三氯醋酸等PH要稍低于Pr.等电点） ③重金属离子沉淀：如En++、Cd ++ 、Hg ++ 、Fe ++ 、Ca ++ 及Pb ++等PH要稍高于Pr.等电点） 蛋白质沉淀后，离心除去蛋白质 具体常用方法有钨酸法，三氯乙酸法，硫酸锌—氢氧化 钡法 5．组织匀浆制备。