实验十邻二氮菲分光光度法测足铁一、 实验目的1. 了解分光光度计的结构和使用方法；2. 掌握用吸光光度法测定铁的原理和方法二、 实验原理在可见光区进行吸光光度测量，如果被测组分本身很浅，或者无色，那么就要用显色剂与其反应， 生成有色化合物，然后进行测量用光度法测定铁，显色剂种类较多，邻二氮菲光度法测铁，由于灵敏度较高，稳定性较好，干扰 容易消除，因而目前普遍采用的一种测定方法在pH为2〜9的溶液中，邻二氮菲与Fe2+反应生成稳定的橙红色络合物:Fe2+ + 3Fe在pH=2〜9范围内，该反应能够迅速完成，生成的红色配位离子在510nm波长附近有一吸收峰，摩尔吸收系数为1.1X104,反应十分灵敏，Fe2+浓度与吸光度符合光吸收定律，适合于微量铁的测定实验中，采用pH=4.5-5的缓冲溶液保持标准系列溶液及样品溶液的酸度；采用盐酸羟胺还原标 准储备液及样品溶液中的Fe3+并防止测定过程中Fe2+被空气氧化三、试剂和仪器试剂：1.00x10-3ug/mL的铁标液、1mol/L的NaAc溶液、100g/L的盐酸羟胺溶液、1mol/L的NaAc 溶液仪器：50mL容量瓶、2.00mL、10mL、25.00mL吸量管、通用滴定管、玻璃比色皿、分光光度计四、实验过程1、吸收曲线的绘制用吸量管吸取10mL 1.00x10-3ug/mL的铁标准溶液于50mL容量瓶中，加入1ml 100g/L的盐酸羟 胺溶液，摇匀，再加入2mL 1.5g/L邻二氮菲溶液、5mL 1mol/L的NaAc溶液，以蒸馏水稀释至刻度， 摇匀。
放置十分钟在可见光分光光度计上，用1cm的比色皿，以蒸馏水为参比溶液，从450nm至 550nm每改变10 nm测定一次吸光度绘制A〜久吸收曲线找出最大吸收波长2、标准曲线的绘制标准溶液及样品溶液的配制:编号0123456（补血盐）10 Ag/mL 标准铁溶液0.00ml2.00ml4.00ml6.00ml8.00ml10.00ml5.00mL100g/L盐酸羟 胺溶液1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml1.5g/L 邻二氮 菲 溶液2.00ml2.00ml2.00ml2.00ml2.00ml2.00ml2.00mlNaAC缓冲溶液5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml说明以上溶液均用移液管移取至50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度并摇匀放置 10min.在选定最大吸收波长处，用1cm比色皿，以0号溶液作为参比溶液，分别测定1至5号溶液的吸 光度，绘制标准曲线并在最大吸收波长处测定未知样品的吸光度，根据吸光度找出相应的铁含量 五、实验数据和结果表1吸收曲线的绘制（蒸馏水作参比）波长久/nm吸光度/A4500.0654600.0714700.0774800.0794900.0815000.0845020.0855040.0865060.0875080.0875100.0875120.0875140.0865160.0855180.0835200.0805300.0645400.0435500.026A图1吸收曲线表1吸收曲线的绘制（试剂空白作参比）波长A /nm吸光度/A4500.0634600.0684700.0744800.0764900.0785000.0815020.0825040.0835060.0835080.0845100.0845120.0835140.0825160.0815180.0805200.0765300.0605400.0405500.023图2吸收曲线从吸收曲线图1可以看出邻二氮菲-亚铁配合物在波长510nm处吸光度最大，因此测定铁时宜用波长为510nm。
表2标准曲线的绘制及铁含量测定编号12345补血盐铁的浓度/M g・mL-10.40.81.21.62.01.575吸光度/A0.0790.1620.2450.3220.4040.317图3标准曲线从该曲线的线性方程可以算出未知液中铁的含量为1.575m g mL-1,0.5002g补血盐含铁量为78.75M g,即补血盐中铁的质量分数为0.016%六实验指导要点1. 比色皿在换装不同浓度的溶液时，必须用待测的溶液润洗至少三次2. 比色皿放入分光光度计样品室钱，必须用吸收纸将表面擦拭干净3. 在换用不同波长测吸光度时必须重新调节透射比为100%4. 主要试剂使用说明100 g • L-1盐酸羟胺溶液：保证将溶液中的三价铁离子全部还原成二价的铁离子1.5 g・L-i邻二氮菲溶液：进行显色，在pH2〜9的溶液中，邻二氮菲和Fe2+可以生成一种稳定的橙红 色络合物Fe(phen) ；+，然后用分光光度法测量溶液中铁的含量1 mol • L-1乙酸钠溶液：一是缓冲溶液的作用，保证溶液在合适的酸度范围内，使二价铁粒子不被氧 化成三价二是保证邻二氮菲可以和Fe2+生成稳定的橙红色络合物。