兽医微生物学实验实验一 显微镜的构造和使用 及细菌形态结构的观察进入实验室的注意事项1穿工作服 2书本等物品放入抽屉 3树立无菌观念 4不能抽烟、吃零食 5爱护公物，注意节约一、目的要求1了解显微镜的简单构造和原理 2学习掌握油镜的使用技术 3观察细菌的基本形态二、普通光学显微镜的简单原理1支持部分：镜臂、镜台、镜筒、粗细 调节器 2放大部分：接目镜、接物镜 3照明部分：反光镜、聚光器、滤光镜三、几种显微镜的简单原理1暗视野2电子四、油镜的识别及使用原理 五、使用完毕显微镜及标本片的处理作 业1普通显微镜与油镜使用上有何区别？ 2绘出你所观察到的细菌形态 3你最喜欢哪个细菌，为什么？枯草杆菌，革兰氏染色，G+枯草杆菌，芽胞简易染色金黄色葡萄球菌，革兰氏染色， G+大肠杆菌，革兰氏染色,G-破伤风梭菌，芽胞染色实验二 细菌的抹片制备及染色一、目的要求1掌握细菌抹片的制备方法 2掌握几种常用的染色方法和技 术及无菌操作技术 3巩固显微镜的使用，了解细菌 的染色特性、形态二、材料大肠杆菌：斜面，肉汤 金黄色葡萄球菌：斜面，肉汤 枯草杆菌：斜面三、制片及染色步骤取干净玻片-抹片-干燥-固定-染色- 干燥镜检四、常用的几种染色方法（一）革兰氏染色法1。
草酸铵结晶紫染色1-2’，水洗 2革兰氏碘液媒染1-2’，水洗 395%酒精脱色约30’’-1’，水洗 4沙黄水溶液复染10 ’ ’-30 ’ ’，水洗 5吸干，镜检（二）姬姆萨染色法1甲醇固定3 ’，时间长短均可 2姬姆萨液足量30 ’或数小时至24h， 水洗 3吸干镜检（三）瑞氏染色法抹片干燥无需固定，直接滴加染色 1-3 ’，再加等量中性蒸馏水，轻轻 混匀，续染15 ’，水洗，吸干镜检（四）美兰染色法1固定好抹片加上足量染液2-3 ’ 2吸干镜检作业1说说你的实验结果 2根据实验体会，你认为制备染色标本 时应注意哪些事项？ 3作革兰氏染色涂片为什么不能过于浓 厚？其染色成败关键一步是什么？实验三 培养基的制备一、目的要求1掌握基础培养基制备的原则和要求 2掌握一般培养基的制备过程及pH测定二、实验材料（略）三、制作的一般要求• 须含有细菌生长所需的营养物质• 盛器需无菌，且不含抑菌生长的物质 • pH应符合细菌生长的要求，一般在7.2~7.6• 要过滤，应为透明或半透明状，以便观察细 菌生长变化 • 制好后需高压灭菌四、步骤称取→ 溶解→调pH 过滤→分 灭菌→菌检• 普通肉汤的制备蛋白胨 10g，牛肉膏 5g，NaCl 5gK2HPO4 1g，蒸馏水 1000ml分别称取以上物品，置铝锅内加热溶解。
取5ml肉汤 于试管内用0.1mol/L NaOH校pH至7.4-7.6，根据其用 量计算所配培养基需用的1mol/L NaOH用量，用滤纸 过滤，分装至短试管所需1N NaOH的量培养基量 × 校正时所需0.1mol/L NaOH量 5 × 10• 普通琼脂培养基的制备取已配好的肉汤500 mL于铝锅内，加 入琼脂10g，加热溶解，用纱布、棉花 过滤、分装• 灭菌：将分装好的培养基扎口后置高压 灭菌锅内121℃（15磅）20-30分钟• 菌检：抽取样品，置37 ℃ 24h作 业• 制作培养基时应注意哪几点？ • 为什么肉汤培养基在高压灭菌前pH要略 调高一些？ • 为什么校正pH时，调校少量培养基用 0.1 mol/L NaOH，而调校大量培养基时 用1 mol/L NaOH？• 说说你们组的产量和品质实验四 细菌分离培养及移植一、目的•掌握细菌分离培养的基本要领 和常用方法 •使被检材料适当稀释，以求获 得独立单在菌落二、需氧分离培养法•平板分离培养法 •芽胞需氧分离培养法 •化学药品分离培养法 •实验动物分离培养法三、实验内容•平板划线 •肉汤培养 •斜面移植接种完毕标明细菌、日期、姓 名，置37℃培养24h四、作业•何谓纯培养？分离培养的目的 何在？ •在挑取固体培养物上的细菌作 平板划线时，为什么每次都要 将接种环上剩余的细菌烧掉？ •为什么要把培养皿倒置培养？实验五 药敏试验一、目的要求学会药敏试验的操作方法及观察抑 菌圈的范围二、试验材料菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌 药敏纸片： 卡那霉素，阿米卡星，红霉素，复方新诺 明，呋喃妥因，庆大霉素，链霉素 镊子、酒精灯等三、操作步骤1. 每人取平板接种细菌，致密划线 2. 以无菌镊子将各种药敏纸片分别 是贴于培养基表面 3. 倒置，37℃培养24h，观察结果四、结果判定根据药敏纸片周围有无抑菌圈 及其大小，来判断该菌对各种药物 的敏感程度，分为：高度敏感、中度敏感、 低度敏感、不敏感五、作业1. 什么叫细菌对抗菌药物的敏感度 ？了解它有何实际意义？ 2. 写出你所做的药敏试验结果。
实验六 细菌的生化试验一、目的要求1了解细菌生化试验在细菌学诊 断上的重要意义 2掌握几种生化试验的方法二、实验材料大肠杆菌 产气杆菌 变形杆菌 兔沙门氏菌三、实验内容及操作1糖或醇发酵试验 2靛基质（吲哚）试验 3甲基红（MR）试验 4VP二氏试验 5枸椽酸盐利用试验 6硫化氢试验 7尿素试验 8细菌运动力试验作业1生化反应记录表 2解说你所做的生化反应各种原理 3以上生化反应试验哪几个是分解 糖？哪几个是分解蛋白质？1. 靛基质实验（蛋胨水）取出试管→ 乙醚1ml，振荡→静置 ，待分层后沿管壁加入对二甲基氨 基苯甲醛4~5滴 →阳性者在分界处 出现玫瑰吲哚2. 葡胨水一分为二21 甲基红试验 取出试管→甲基红3~5滴，摇匀→红色 为阳性，黄色为阴性，橙色为可疑 22 VP试验 取出试管→VP甲液0.6ml，再加VP乙 液0.2ml，充分混匀→静置，15分钟后 看结果，红色为阳性，不变为阴性实验七 病毒鸡胚培养（一）一、目的要求掌握鸡胚接种技术和收获病毒方法二、实验材料9-10日龄鸡胚新城疫病毒 灭菌注射器 棉球（酒精、碘酊）三、内容及操作1绒毛尿囊腔接种 选9-10日龄鸡胚，先观察鸡胚发育情况 划出气室，离气室边缘5mm处作一记号消毒打孔：记号处和顶端各打一孔 吸取病料，由注射孔刺入3-5mm，注射 0.1-0.2ml病料拨出针头，石蜡封闭两孔（先下后上）蛋壳注明日期，学号以及病毒名称 置37℃培养，24h内死亡或血管不 清者弃去 以后每日照蛋2次，死胚置4 ℃保存 ，96h不死者将其冻死 6h冷冻后可收获尿囊液检查实验八 病毒鸡胚培养（二）收获尿囊液气室消毒→ 击破气室、卵壳并弃去 →无菌小镊撕支壳膜→再撕去绒尿 膜和羊膜 →无菌吸管吸取尿囊液置 无菌瓶中 →待检测HA及HI试验掌握HA和HI的基本操作技术，了 解其实用价值血球凝集试验（HA）孔号123456789101112病毒稀 释度1：21：41：81：16 1：32 1：64 1：128 1：256 1：5121：1024 1：2048红细胞 对照生理盐 水（μl）505050505050505050505050病毒 （μl）5050505050505050505050-1%鸡 红细胞 （μl）50505050505050505050505037℃ 15~30min判定结 果# # # # # # # ++++++--弃去血球凝集抑制试验（HI）孔号123456789101112病毒稀 释度1：21：41：81：16 1：32 1：64 1：128 1：256 1：5121：1024病毒 对照血清 对照生理盐 水（μl）50505050505050505050--新城疫抗 体(μl)50505050505050505050-504单位病 毒(μl)5050505050505050505050-37℃ 15~30min1%鸡红 细胞(μl)50505050505050505050505037℃ 15~30min判定结 果----+++ # ####-弃去作业• 常用鸡胚接种方法有哪些？ • HA和HI试验中，哪个是特异的抗原抗 体反应？。