Word文档直接镜检微生物一、试验目的 了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，把握显微镜下直接计数的技能 二、试验原理 测定微生物细胞数量的方法许多，通常采纳的有显微直接计数法和平板计数法 显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培育悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易辨别菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采纳血球计数板，一般细菌则采纳彼得罗夫霍泽（PetrofHausser）细菌计数板两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观看而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区，计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成 计数区边长为1mm，则计数区的面积为lmm三、试验器材 1．活材料：酿酒酵母斜面或培育液。
2．器材：显微镜、血球计数板、盖玻片（22mm22mm）、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸 四、试验方法 1.视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释到10-2），以每小格的菌数可数为度 2.取干净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片 3.将酵母菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力布满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液也可以将菌悬液直接滴加在计数区上，不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的上升然后加盖盖玻片（勿使产生气泡） 4.静置片刻，将血球计数板置载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观看并计数由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观看时应减弱光照的强度 5.计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数假如是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方非常，还需数中央1个大方格的菌数（即80个小格）如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以削减误差。
6.对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算每个样品重复计数2-3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），求出每一个小格中细胞平均数（N），按公式计算出每ml（g）菌悬液所含酵母菌细胞数量 7.测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗洁净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。