TaKaRaExTaq®使用说明书TaKaRaCode：DRR001A•包装量：250U•制品说明本制品是应用LAPCR原理研制的具有3'”5'Exonuclease活性(Proofreading活性)的耐热性DNA聚合酶在普通PCR条件下，与TaqDNAPolymerase相比，具有扩增效率高、错配率低的优良性能使用本制品扩增得到的PCR产物3'端附有一个“A”碱基，因此可直接克隆于T-Vector中•制品内容TaKaRaExTaq(5U/yl)50卩110xExTaqBuffer(Mg2+Plus)1mldNTPMixture(各2.5mM)800yl6xLoadingBuffer*1ml*①电泳时，请按每5ylPCR反应液中加入1yl本制品的比例添加混合后进行电泳②6xLoadingBuffer详细说明请见TaKaRa商品目录•保存：-20°C•活性定义用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74C,30分钟内，摄入10nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)•纯度1) 10U的本酶和0.6yg的入DNA-HindIII在74C下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
2) 10U的本酶和0.6yg的SupercoiledpBR322DNA在74C下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化3) 10U的本酶和0.6yg的入DNA在74C下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化•用途1) PCR法扩增DNA2) DNA序列测定•PCR反应性能1) 以入DNA为模板，可以很好地扩增20kbp的DNA片段2) 以人基因组DNA为模板，可很好地扩增17.5kbp(B-Globingene)的DNA片段•应用例以入DNA为模板进行PCR扩增反应1.按下列组份配制PCR反应液TaKaRaExTaq(5U/yl)0.25yl10xExTaqBuffer(Mg2+Plus)5yldNTPMixture(各2.5mM)4yl模板DNA(入DNA)*2.5ng引物1(20yM)1yl引物2(20yM)1yl灭菌蒸馏水upto50yl*【50ylPCR反应体系中模彳反DNA推荐使用量】人基因组DNA0.1yg-1yg大肠杆菌基因组DNA10ng〜100ng入DNA0.5ng〜5ng质粒DNA0.1ng〜10ng2.PCR反应条件以入DNA为模板，扩增1kbp、20kbp的DNA片段的PCR反应条件如下：【1kbp】94C30sec.55C30sec.30Cycles72C1min.【20kbp】94°C1min.98°C10sec.30Cycles68C15min.72C10min.注）PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。
在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件（温度、时间等）3.结果M12M1%Agarosegel5卩1电泳结果M:入-HindIIIdigestDNAMarker*1:1kbpPCR产物2:20kbpPCR产物*(TaKaRaCodeNo.D3403A)•注意事项PCR的反应液请在冰中配制，然后置于PCR反应仪上进行PCR反应这种冷启动法（CoolStartMethod）可增强PCR扩增的特异性，减少PCR过程中的非特异性反应，能得到良好的PCR结果V2010.04。