3-1柱的构造1、堵棒〔或导管〕2、接头3、 接头4、密封圈5、螺帽6、柱 密封圈 7、柱管 8、柱填料 9 10、过滤片3-2柱的分类:根据所有的担体材料分为三种:a. 硅胶型:机械强度高,易制成 小颗粒,理论塔板数高b. 聚全物型:在广泛的PH值范 围内稳定c. 羟基磷灰石型:对蛋白质等生 物高分子样品有特殊的选择性根据别离方式分类:a.硅胶型1〕正相:SIL - -磷脂、NH—糖、维生素E,—甾类激素2〕反相:ODS〔C18〕、〔C8 TMS Phenyl〕低分子量化全物3〕离子交换:WAX〔弱碱阴离子交换〕--核苷酸、蛋白质WCX〔弱酸阳离子交换〕--蛋白质SAX〔强碱阴离子交换〕—核苷酸SCX〔强酸阳离子交换〕 儿茶酚胶4〕凝胶过滤:Diol --蛋白质 GF --蛋白质b.聚合物型:1〕反相:ODP--50--肽, 蛋白质,低分化合物2〕离子交换:ISC--氨基酸, 胍类化合物,ISA --糖,IC--无机 离子,PA--蛋白质,ES--蛋白质3〕配位交换:SCR〔磺化聚苯 乙烯〕—糖4〕离子排阻:SCR-101H 102H --有机酸5〕凝胶过滤:ION --多糖GS --水溶性分子6〕凝胶渗透色谱〔GPC〕:GPD —合成分子、橡胶。
-可修编-7〕羟基磷灰石型:HPC--蛋 白质、核苷酸按尺寸分类:1. 制备:30mm 50mm内径,半制备:20mm内径2. 分析标准型柱:4_8mm内径快速色谱柱:3mm内径、5cm长、4.6mm内径小孔径柱:2.5mm内 径,微孔径柱1mm内径3-3柱的技术指标*耐压:不小于40Mpa渗透性:反相--流动相甲醇1ml/min,压力 3Mpa正相--正乙烷1ml/min,压力 3Mpa.*柱效:理论塔板极数>3x103对称柱:葸峰不对称因子AS在 0.8~2.0范围内外观:光洁、标牌、尺寸、填充 剂、流动相方向、日期等ODS柱ODS〔C18〕色谱柱是将十八烷基 键合在担体的外表,然后填充的柱, 在HPLC中应用广在HPLC中反相 色谱的引用占70%,其中极大局部使 用的是ODS〔C18〕本公司所附的柱 也是ODS〔C18〕柱,内径4.6mm, 长度150mm一般反相色谱系统,流动相为极性溶 剂,如水、甲醇、乙腈,非极性固定 相,如十八烷基反相系统简单,重 复性好,柱子能长期稳 定工作,能 完成别离、分析任务的60-80%,所以 分析工作者使用得最多的是反相柱 柱的使用和维护由于柱的质量直接影响到样品 组分得别离情况,组分的定性,定量 分析,所以在操作时必须十分注意。
通常柱子损坏表现为:柱压升 高,柱效下降,保存值改变,峰形崎 变等以反相为列,它要求填料处于甲醇或 乙睛中,不使柱子枯槁,并注意以下 事项:*勿使柱子受较强振动*较长时间不用时,应在柱中充 满甲醇,并把两头封死,尽量不使枯 槁当用水和甲醇〔或乙腈〕混合 液体溶剂时,工作完毕后必须用纯甲 醇冲洗30分钟至1个小时,使柱子 处于甲醇中,因水 易繁殖微生物,使柱子堵塞,并降低柱效当使用KH2PO4等缓冲液时, 盐的浓度宜低,否那么盐容易析出, 柱效降低,柱压升高,使用后 必须用水冲洗〔绝不能用甲醇冲洗〕 使缓冲液全部溶于水排出,然后再用 甲醇冲洗硅基固定相不宜在PH>8时使 用,此时容易产生絮状物析出,堵塞 柱子当流动相呈酸性时,使用后必 须用水冲洗,因酸使柱效降低,后再 用甲醇冲洗流动相最好经过过滤处理样品最好也经过过滤处理样品有时能复盖填料得活性 点,使柱压升高,保存时间下降,防 止方法是样品经过过滤样品组分的不可逆吸附,使柱 压升高,柱效降低〔通常易被吸附的 有蛋白质、糖〕防止方法是加保护柱 和溶剂反冲, 最常用的是四氢 呋喃当流动相从A换到B时,A、B 不相溶,必须选择一能同A、B互溶 剂C,先换成C再把C换成B,最常 用的中间液是异丙醇。
由于长期使用,在较大的压力 下,担体破裂而流失在柱前端形成一 段空隙,使柱效下降,峰形畸变维 护方法:卸下 接头,用甲醇把 填料调成糊状,填入柱内,同时将过 滤片用超声波清洗机清洗一次各种柱特点Hypersil Silica作为大多数键合相的基质Hypersil Silica(Hypersil硅胶)在使用过程中极 具耐久性及重现性.未经键合的硅胶 (SiO2,Silica )色谱柱对于非极性和中 性有机物的正相色谱分析非常有效HypersilODS(C18)HypersilODS(C18)是硅胶基质上键 合了 C18为官能团的色谱柱填料,是 典型的高效液相色谱柱用填料,适合于分析非极性和中性样品, 包括酸性,中性及亲脂性化合物HypersilMOS 和 MOS2(C8)HypersilMOS 和 MOS-2(C8)在硅胶 的外表键合单层C8烷基链,所得的色 谱填料效率高、重现性好,其中MOS-2 对硅胶外表作了二次衍生反响即封 尾(End-capping)o MOS 和 MOS-2 的 选择性与ODS相似,但保存时间短,这 有利于实现快速分析,尤其是对强疏 水性分析物HypersilPhenyl(C6H5)Hypersil Phenyl(C6H5)色谱填料 适用于反相色谱,对芳香族和中性化 合物的分析具有独特的选择性,其保 存行为与HypersilMOS相似,但选择 性相反,尤其是对芳香烃和稠环 烃.Hypersil Phe-nyl-2是进展过封尾处理的填料.HypersilSAS(CI)Hypersil SAS(C1)是采用短烷基链 (C1)为官能团的硅胶键合固定相,因 而在Hypersil烷基键合相中保存时间 最短.HypersilSAS对极性分析物和多 官能团化合物具有独特选择性,已成 功地应用于离子对色谱的别离。
HypersilCPS()HypersilCPS()为氰丙基官能团硅 胶键合填料,该色谱柱可应用于正相 和反相色谱.Hypersil,CPS-2为封尾 固定相.正相色谱模式 时,HypersilCPS色谱柱与HypersilSilica 和 HypersilAPS 的选择 性相反,并且平衡速度快,不会被少量 的水钝化;反相色谱模式时,氰基柱的 选择性可补偿烷基I键合相和低疏水 性HypersilAPS2(NH2)Hypersil APS-2(NH2)是可以进展 多种色谱模式的氨丙基官能团硅胶 色谱填料,在弱阴离子交换、正相及 反相色谱中均表现出很好的色谱性 能用Hypersil APS-2作弱离子交换 分析阴离子和有机酸时,可以使用普 通缓冲液和有机改性剂,而正相色谱 模式时,Hypersil APS-2 与硅胶(SiO2Silica)色谱柱的选择性相反.HypersilAPS-2柱尤其适于糖类 样品的反相色谱分析Hypersil SAXHypersil SAX是高度稳定的强阴离 子交换的硅胶为基质材料的色谱填 料,专门为使用含水和低pH值流动 相时设计,适合分析小分子的有机酸Hypersil SCXHypersil SCX是可靠的强阳离子交 换的硅胶为基质材料的色谱填料,适 合分析小分子的有机碱。
象其它的 Hypersil 固定相一样,Hypersil SAX 和Hypersil SCX也进展了严格的质量监控以确保具有良好的重现性Hypersil 100为了分析保存时间较长的物质, Hypersil公司专门设计并生产了 Hypersil 100,其特征是扩大了硅胶外 表积和孔容.随着硅胶外表积的增大, 色谱柱的别离能力也随之增大,同时 使保存时间相近的谱峰得到别离,尤 其是对高浓度的样品・Hypersil100选 择性与Hypersil BDS相似的技术,但 更加适合于分析保存时间更长的样 品.Hypersil 100键合固定相含碳量 高、稳定、耐用,采用均匀的窄孔球型 填料,具有效率高、重现性好、操作压 力低及柱寿命长等优点Hypersil 100 色谱柱是分析许多化合物的理想选 择,包括有机酸、维生素和碱性化合 物;同时Hypersil 100填料也适合摩 尔质量达5000道尔顿的肽和多肽的 分析Hypersil 100担体范围广泛,包 括硅胶、C18、C8、C4、氨基、氰基 和苯基对于制备性别离,Hypersil 100可直接放大到HyperPrep HSHypersilGreenENVHypersil Green ENV色谱柱专门用于 分析工业和农业残留的极性污染物。
即使在分析物浓度很低的条件下,Hypersil Green ENV对苯酚、邻苯 二甲酸酯及除草剂都有极好的选择 性和重现性Hypersil Green PAHHypersil Green PAH 色谱柱采用高碳量填料专门用来PAH污染物的别 离填料的粒度有3和5um两种,设 计多种柱型以优化别离速度、别离度 和灵敏度使用Hypersil Green PAH色谱 柱对EPA 610 MIX在4分钟内可达完 全别离Hypersil Green CarbamateHypersil Green Carbamate 色谱柱 专门用于氨基甲酸类农药混合物的 别离,可采用等度或梯度洗脱,采取柱 前衍生化方法,并用荧光检测器检测 可提高柱的灵敏性。