液相色谱讲座--六通阀HPLC 六通阀进样器的使用及保养六通阀进样器是高效液相色谱系统中最理想的进样器,它是由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)组成 美国Rheodyne公司的六通阀进样器最为通用,各大HPLC仪器制造商均以此产品作为仪器的进样器工作原理:1、 手柄装载(Load)位置时,样品经微量进样针从进样孔注射进定量环,定量环充满后,多余样品从放空 孔排出;2、 将手柄转动至进样(I nject)位置时,阀与液相流路接通,由泵输送的流动相冲洗定量环,推动样品进入 液相分析柱进行分析 虽然六通阀进样器具有结构简单、使用方便、寿命长、日常无需维修等特点,但正 确的使用和维护将能增加使用寿命,保护周边设,同时增加分析准确度如使用得当的话,六通阀进样器 一般可连续进样 3 万次而无需维修以下浅谈有关六通阀进样器的使用及保养事宜(仅供参考):1、 手柄处于Load和Inject之间时,由于暂时堵住了流路,流路中压力骤增,再转到进样位,过高的压力 在柱头上引起损坏,所以应尽快转动阀,不能停留在中途在HPLC系统中使用的注射器针头有别于气相 色谱,是平头注射器一方面,针头外侧紧贴进样器密封管内侧,密封性能好,不漏液,不引入空气;另 一方面,也防止了针头刺坏密封组件及定子。
2、 六通阀进样器的进样方式有部分装液法和完全装液法两种使用部分装液法进样时,进样量最多为定 量环体积的75%,20uL的定量环最多进样15uL的样品,并且要求每次进样体积准确、相同;使用完全装 液法进样时,进样量最少为定量环体积的3至5倍,即20uL的定量环最少进样60至100uL的样品,这样 才能完全置换样品定量环内残留的溶液,达到所要求的精密度及重现性推荐采用100uL的平头进样针配 合 20uL 满环进样3、 可根据进样体积的需要自已制作定量环,一般不要求精确计算定量环的体积,譬如,一根名义上10uL 的定量环,实际是9uL还是10uL并不重要,因为被测样品和校正样品的进样体积保持一致,在计算结果 时误差都被抵消了4、 进样样品要求无微粒和能阻死针头及进样阀的物质,样品溶液均要用0.45u的滤膜过滤防止微粒阻 塞进样阀和减少对进样阀的磨损为防止缓冲盐和其它残留物质留在进样系统中,每次结束后应冲洗进样 器,通常用不含盐的稀释剂、水或不含盐的流动相冲洗,在进样阀的Load和Inject位置反复冲洗,再用无 纤维纸擦净注射器针头的外侧并且不定期的断开色谱柱做全阀冲洗另外一种清洗方法是:采用进样阀 附件中的特殊清洗头(乳白色,聚四氟乙烯材料的),配合1mL以上的医用注射器,用纯水和甲醇清洗定 量管,清除定量管、排放孔及排放管道中残留的样品中的缓冲盐和有机物。
5、 如果进样样品无法去除微粒,则在进样时使用针式过滤器,此时可改用医用的1mL —次性注射器, 配合进样阀附件中的特殊针头使用此种办法最为经济合算,因为医用的一次性注射器价格低廉需要注 意的是,针式过滤器有水性的和油性的区分,不要用错。