实验八 饲料中总磷的测定（钒钼黄比色法）一、实验目的通过饲料样品中磷的测定，使学生掌握用钒钼黄比色法测定饲料样品中总磷含量的原理 和方法二、实验原理将试样中有机物破坏，使其中的磷变为游离状态，在酸性溶液中，磷与钒钼酸铵生成黄色的磷-钒-钼酸复合体【（NH ） PO・NHVO・16MoO】，其颜色深浅与磷的含量成正比，4 3 4 4 3 3在波长 420nm 下进行比色测定，即可求出样品中的磷含量此法测得为总含磷量，其中包 括动物难以吸收的植酸磷化学反应式如下：HPO + NH VO + 16（NH）2MoO + 29HNO = （NH ） PO ・ NH VO ・ I6M0O +29NHN0 + 16HO3 4 4 3 4 4 3 4 3 4 4 3 3 4 3 2三、仪器设备1 、样品粉碎机或研钵；2、 分样筛：孔径0.45mm （40目）；3、 分析天平：感量 0.0001g；4、 分光光度计：有10mm比色池，可在420nm下测吸光度；5、 高温炉：电加热，可控制温度在550±20°C；6、 坩埚：瓷质；7、 容量瓶：50ml、100ml 或 1000ml；8、 容量瓶或具塞比色管： 50ml；9、 移液管： 10ml；10 、洗耳球；11 、洗瓶。
四、试剂1、 钒钼酸按显色剂：称取偏钒酸铵（分析纯）1.25g,加硝酸250ml另取钼酸铵（分 析纯）25g,加蒸馏水400ml使之溶解，在冷却条件下将后者倒入前者，并加蒸馏水稀释至 1000ml ，摇匀备用2、 磷标准溶液：将磷酸二氢钾（分析纯）105C烘干lh,干燥器冷却30min后，准确称取0.2195g溶于少量蒸馏水，无损的转入1000ml容量瓶，加浓硝酸3ml，然后以蒸馏水 稀释至刻度，摇匀备用此溶液每ml含磷50Mgo五、测定方法与步骤1、试样的分解（同钙的测定，直接利用其试样分解液）2、标准曲线的绘制准确移取磷标准溶液（50p g/ml）O, 1.0, 2.0, 4.0, 6.0, &0, 10.0, 12.0, 15.0ml 于50ml容量瓶中，各加入钒钼酸铵显色剂10ml用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10min 以上以0ml溶液为参比，用10mm比色池，在420nm波长下，用分光光度计测各溶液的吸 光度以磷含量为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线3、样品的测定 准确移取试样分解液2〜5ml （含磷量50—500》g）于50ml容量瓶中， 加入钒钼酸铵显色试剂10ml，按上述的方法显色和比色测定，测得试样分解液的吸光度。
用标准曲线查得或用回归公式算得试样分解液的含磷量六、 结果计算P（%）= a x 心6 x 100v'm x —v式中：m 一样品重（g）；（注：同灰分测定）v —试样分解液总体积（ml）；（一般为50ml）v'—比色测定时移取试样分解液体积（m1）；a—由标准曲线查得试样分解液含磷量（|J g）；10-6—从》 g 转化为 g 的系数每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果含磷量在0.5%以上时，允 许相对偏差3%；含钙量0.5%以下时，允许相对偏差10%七、 注意事项1、 测磷时不宜浓度过大，过大时应稀释后再测2、 待测液加入显色剂后需要静置10min以上，但不宜过久（最好30min以内）3、 比色结束后应立即取出比色杯，并洗净，用擦镜纸擦干4、 标准曲线的绘制，可采用Excel制作，见下图，含磷量可根据回归公式求出磷标准曲线图897.75x + 0.5272R2 = 0.999890OOOOOOOOOOOOOOOOOO 87654321 )g々量磷含5、植酸磷的测定方法（三氯乙酸法）见有关参考资料思考题1、试样分解液若呈色时（如测骨粉类动物性饲料时，会呈淡黄）是否影响测定结果如何消除？2、总磷、植酸磷、非植酸磷的关系？。