如果您需要使用本文档，请点击下载按钮下载!表达载体一、原核细胞表达载体1. pBAD载体: 特点; 该表达质粒含有araBAD(arabinose)操纵子的PBAD启动子和编码该启动子的正负调控子基因araC，具有紧密调控功能和高水平表达外源蛋白质的原核细胞表达载体请注意: 1. 当要扦入其他信号肽片段，改建此载体时，请不要利用该载体上的Nde1 EcoR1 BamH1 Kpn1和 Pst1位点，以免造成重组困难，因为前述内切酶在此载体上均有二个位点，最好使用只有一个酶切位点的Sac1和Hind111位点同时记住，如在不含任何信号肽的PBAD表达质粒扦入信号肽，其非编码N-末端要包含核糖体结合位点(RBS)核苷酸序列2 在使用含Omp A分泌信号肽的PBAD表达质粒时，请应用Omp A分泌信号肽上的Sac1以及载体Hind111酶切位点，这些在载体序列上都是单个酶切位点如果您需要使用本文档，请点击下载按钮下载!本公司目前有含Omp A分泌信号肽和不含任何信号肽的二种PBAD表达质粒， 其多克隆位点区域图谱如下: (a)、含Omp A分泌信号肽的PBAD表达质粒多克隆区域 SDPBAD….TACCCGTTTTTTTCC….GCTAGCAGGAGGAAACG ATG AAA AAG ACA GCT ATC GCG ATT GCA GTG GCA CTG GCT GGT A M A E L TTC GCT ACC GTA GCC ATG GCC GAG CTC GGTACCCGGGGATCCTCTAGAGTCGCCTGCAGGCATCCAAGCTT Nco1 Sac1 Kpn1 Smal1 BamH1 Pst1 Hind111(b)、不含分泌信号肽的PBAD表达质粒多克隆区域 EcoR1 Kpn1 BamH1 Pst1PBAD….TACCCGTTTTTTTGG….GCTAGCGAATTCGAGCTCGGTACCCGGGGATCCTCTAGAGTCGCCTGCAGGCATCCAAGCTT Nde1 Sac1 Smal 1 Hind111下图显示本公司应用pBAD表达载体完成的实验结果: pBAD载体驱动大分子蛋白质在原核细胞Origami(DE3)内高效表达2. pCAl-n & pCAl-pelB载体 特点: 该原核细胞表达载体是来源于以T7 RNA聚合酶为基础的pET载体，含有T7/LacO启动子、编码钙调素结合多肽标鉴和凝血酶切点的核苷酸序列。
因此，该表达载体在E.coli BL21(DE3)或BL21(DE3)pLysS宿主菌中能高水平表达外源蛋白质、且这种表达的外源蛋白质因带有钙调素结合多肽和凝血酶切点，故该蛋白产物易于纯化和产业化如果您需要使用本文档，请点击下载按钮下载!此外，本公司利用分泌信号肽PelB，构建成新型的的原核细胞表达载体Pcal-PelB此载体表达的蛋白产物能在分泌肽PelB的指引下进入细胞周质a). Pcal-n M K R R W K K N F I A V S A A N R F K K I S S S G A L L V PCATATG AAG GGACGATGGAAAAAACAATTTCATAGCCGTCTCAGCAGCCAACCCGCTTTAAGAAAATCTCATCCTCCGGGGCACTTCTGGTTCC Nde1 R G S P G I L D S M G R L E L K L R S AGCGTGGATCCCCGGGAATTCTAGACTCCATGGGTCGACTCGAGCTCAAGCTTAGATCCGCCBamH1 Sma1 EcoR1 Nco1 Sal1 Xho1 Sac1 Hnd111(b). Pcal-PelB:Nde1 actggagact catATG AAA TAC CTA TTG CCT ACG GCA GCC GCT GGA TTG TTA TTA CTC GCG GCC CAG GGC M K Y L L P T A A A G L L L L A A Q P Nco1 Msc1 BamH1 EcoR1 Sal1GCC ATG GCC aaggatcctaagtaagtagaattctgagtaggtaagtcgacaatcgcgtctagagccc cgacgcgctggg A M A * * * * * *3. pPOW3.0 表达载体如果您需要使用本文档，请点击下载按钮下载!特点: 该原核表达质粒含有噬菌体的重叠λPRPL热诱导启动子和编码热敏感抑制子的C1857基因，可使宿主细胞在合成蛋白前获得高密度的宿主细菌，进行高水平目的蛋白表达，并对蛋白合成提供紧密控制。
PelB分泌信号肽能指引合成的外源蛋白通过胞浆膜进入胞质特别提示: 在进行重组质粒时，最好在N-未端用Nco1或Msc1位点，C-末端则可用BamH1、EcoR1位点进行拼接图示为启动子、PelB分泌信号肽和多克隆位点区域 Xho1λPRPL 启动子ggggtgtgtgatacgaaacgaagcattggcgcctcgagtaatttaccaacactactacgttttaactgaaacaa RBS Nde1 actggagact catATG AAA TAC CTA TTG CCT ACG GCA GCC GCT GGA TTG TTA TTA CTC GCG M K Y L L P T A A A G L L L L A Nco1 Msc1 BamH1 EcoR1 Sal1GCC CAG GGC GCC ATG GCC aaggatcctaagtaagtagaattctgagtaggtaagtcgacaatcgcgtctagagccc A Q P A M A * * * * * *说明: RBS 为核糖体结合位点; * 为终止密码子 如果您需要使用本文档，请点击下载按钮下载!二、真核细胞表达载体1. pCMVp-NEO-BAN载体特点: 该真核细胞表达载体分子量为6600碱基对，主要由CMVp启动子、兔β-球蛋白基因内含子、聚腺嘌呤、氨青霉素抗性基因和抗neo基因以及pBR322骨架构成， 在大多数真核细胞内都能高水平稳定地表达外源目的基因。
更重要的是，由于该真核细胞表达载体中抗neo基因存在，转染细胞后，用G418筛选，可建立稳定的、高表达目的基因的细胞株扦入外源基因的克隆位点包括Sal1、BamH1和EcoR1位点注意在此载体中有二个EcoR1位点存在2. pEGFP, 增强型绦色荧光蛋白表达载体(Enhanced Fluorecent Protein Vector)如果您需要使用本文档，请点击下载按钮下载!特点: pEGFP表达载体中含有绿色荧光蛋白，在PCMV启动子驱动下，在真核细胞中高水平表达载体骨架中的SV40 origin使该载体在任何表达SV40 T 抗原的真核细胞内进行复制Neo抗性盒由SV40早期启动子、Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因以及HSV-TK基因的聚腺嘌呤信号组成，能应用G418筛选稳定转染的真核细胞株此外， 载体中的pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制， 而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达用途: 该表达载体EGFP上游有Nde1、Eco47111和Age1克隆位点，将外源基因扦入这些位点，将合成外源基因和EGFP的融合基因。
借此可确定外源基因在细胞内的表达和/或组织中的定位亦可用于检测克隆的启动子活性(取代CMV启动子,Acet1-Nhe1)Excitation maximum = 488 nm; Emission maximum = 507图示为启动子分泌信号肽和多克隆位点区域： Ase1.pCMV…ccg cta gcg cta ccg gtc gcc acc atg- .EGFP…BamH1…SV40 poly A+Nhe1 Age13. pEGFT-Actin, 增强型绿色荧光蛋白/人肌动蛋白表达载体如果您需要使用本文档，请点击下载按钮下载!特点: pEGFP-Actin表达载体中含有绿色荧光蛋白和人胞浆β-肌动蛋白基因，在PCMV启动子驱动下，在真核细胞中高水平表达载体骨架中的SV40 origin使该载体在任何表达SV40 T 抗原的真核细胞内进行复制Neo抗性盒由SV40早期启动子、Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因以及HSV-TK基因的聚腺嘌呤信号组成，能应用G418筛选稳定转染的真核细胞株此外， 载体中的pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制， 而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达。
用途: pEGFP-Actin载体在真核细胞表达EGFP-Actin融合蛋白，该蛋白能整合到胞内正在生的肌动蛋白，因而在活细胞和固定细胞中观察到细胞内含肌动蛋白的亚细胞结构Excitation maximum = 488 nm; Emission maximum = 507图示为启动子和多克隆位点区域：pCMV….Nhe1….Age1….。