实验四-酶特性实验定稿 说明：本实验由四个小实验组成，其中第一个实验（酶的专一性）必做，其他三个小实验选做（至少做一个） 写实验报告时， 可以只写需要做的实验内容 ！ 实验四 酶的特性实验 一、实验目的 酶是生物催化剂，生物体内化学反应基本上都是在酶的催化下进行的通过本实验了解酶催化的特异性、温度对酶活力的影响、PH 对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义 二、实验内容 本实验由酶的专一性实验、温度对酶活力的影响、PH 对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响 4 个小实验组成 （一）酶的专一性 1、实验原理 本实验以唾液淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶的专一性淀粉和蔗糖无还原性， 唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性二糖的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解用班氏试剂检查糖的还原性班氏试剂为碱性硫酸铜，能氧化具还原性的糖，生成砖红色沉淀氧化亚铜 2、材料、仪器与试剂 (1)材料：新鲜配制的唾液及其稀释液 (2)仪器：恒温水浴；沸水浴；试管及试管架； (3)试剂：2%蔗糖溶液； 溶于 l 0.3% NaCl 的 的 0.5% 淀粉溶液；班氏试剂。
3、实验操作 （1）稀释唾液的制备 ①唾液的获取 用一次性杯取一定量的饮用水，漱口以清洁口腔，然后在嘴中含 10-20ml 饮用水，轻漱2min 左右时间，即可获得唾液的原液，内含唾液淀粉酶 ②不同稀释度唾液的制备 （用大试管） 本实验需制备 1：1、1：5、1：20、1：50、1：200 等五个不同浓度的稀释唾液 举例说明：1:5 指的是稀释了 5 倍的唾液，制备方法为 1 份原液+4 份蒸馏水 1：20 指的是稀释了 20 倍的唾液，制备方法为 1 份 1：5 的稀释液+3 分蒸馏水 （2）唾液淀粉酶最佳稀释度的确定 （严格按表 1 1 添加顺序做实验，用小试管做实验） 表 1 唾液淀粉酶稀释度的确定 管号 1（1：1） 2（1：5） 3（1：20） 4（1：50） 5（1：200） 0.5%淀粉溶液） （滴） 4 4 4 4 4 稀释唾液（ml） 1 1 1 1 1 37℃恒温水浴中保温 5 分钟 班氏试剂（ml） 1 1 1 1 1 沸水浴 2～3 分钟 实验结果 （2）淀粉酶的专一性 表 2 淀粉酶专一性实验 （二）温度对酶活力的影响 1、实验原理 酶的催化作用受温度的影响。
在最适温度下，酶的反应速度最高淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色，糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色，在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水的程度可由水解混合管号 1 2 3 4 5 6 0.5%淀粉溶液 （滴） 4 － 4 － 4 － 2%蔗糖溶液（滴） － 4 － 4 － 4 最佳稀释度唾液（ml） － － 1 1 ―― 煮沸过的最佳稀释度唾液（ml） － － － － 1 1 蒸馏水（ml） 1 1 － － － － 37℃恒温水浴中保温 5 分钟 班氏试剂（ml） 1 1 1 1 1 1 沸水浴 2～3 分钟 实验结果 物遇碘呈现的颜色来判断 2、材料、仪器与试剂 （1）材料：新鲜配制的唾液及其稀释液 （2）仪器：试管及试管架；恒温水浴；冰浴；沸水浴； （3）试剂： 溶于 l 0.3% NaCl 的 的 0.5% 淀粉溶液；KI－I2 碘溶液； 3、实验操作 取 取 4 4 支 支干燥的试管，编号后按下表加入试剂： 表 3 温度对酶活力影响实验加样顺序 管号 1 2 3 0.5%淀粉溶液（ml） 1.5 1.5 1.5 最佳稀释度唾液（ml） 1 1 煮沸过的稀释唾液（ml） 1 实验结果 摇匀后，将 1、3 号试管放入 37℃恒温水浴中，2 号试管放入冰水中。
10 分钟后 1、2、3 管均取出（将 2 号内液体分两半），用 KI－I 2 溶液来检验 1、2、3 号管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度记录并解释结果将 2 号管剩下的一半溶液放入 37℃水浴中继续保温 10 分钟后，再用 KI－I 2 液实验，记录实验结果 （三）PH 对酶活力的影响 1、实验原理 酶的活力受环境 H PH 值的影响极为显著不同酶的最适 PH 不同本实验观察 PH 对唾液淀粉酶活性的影响唾液淀粉酶的最适 PH 约为 6.8 2、材料、仪器与试剂 （1）材料：新配制的 溶于 l 0.3%NaCl 的 的 0.5% 淀粉溶液 （2）仪器：试管及试管架；吸管；滴管；恒温水浴 （3）试剂：PH 为 5.0、5.8、6.8、8.0 的缓冲溶液；KI－I 2 碘溶液；PH 试纸 3、实验操作 表 4 PH 对酶活性的影响实验 PH 5 5．8 6．8 8.0 缓冲液（ml） 3 3 3 3 0.5%淀粉溶液（ml） 1 1 1 1 向第一个试管加入稀释唾液后，置于 37℃的恒温水浴；等待 1min 后 向第二个试管加入稀释唾液，置于 37℃的恒温水浴；依次类推！ 最佳稀释度的唾液（ml） 1 1 1 1 检查淀粉水解程度 待向第四只试管加入唾液 2min 后，每隔 1 分钟从第 3 管中取出 1 滴反应液于白瓷板上，加碘液检查反应进行情况，直至反应液变为淡棕黄色） （颜色有点淡即可）。
即可从第一只试管依次添加碘液，时间间隔也为 1min 碘液(滴) 1～２ 1～２ 1～２ 1～2 现象 为了更好的理解表格内容，下面对实验过程进行说明： 各取缓冲液 3ml，分别注入 4 支带有号码的试管，随后于各个试管中添加 0.5%淀粉溶液 1ml 和最佳稀释度的唾液 1ml向各试管中加入稀释唾液的时间间隔为 1 分钟将各试管中物质混匀，，并依次置于 37℃恒温水浴中保温 待向第 4 管加入唾液 2ml 后，每隔 1 分钟由第 3 管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加 1 小滴 KI－I 2 溶液添加 KI－I 2 溶液，检验淀粉的水解程度待混合变为淡棕黄色 （颜色有点淡即可）后，向所有试管依次添加 1-2 滴 KI－I 2 溶液添加滴 KI－I 2 溶液的时间间隔，从第 1 管起，亦均为 1 分钟观察各试管中物质呈现的颜色，分析 pH 对唾液淀粉酶活性的影响 （四）唾液淀粉酶的活化及抑制 1、实验原理 酶的活性受活化剂或抑制剂的影响，氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为其抑制剂 2、材料、仪器与试剂 （1）材料：0.5%淀粉溶液；最佳稀释度的唾液 （2）仪器：试管及试管架；恒温水浴 （3）试剂：1% NaCl 溶液；1% CuSO 4 溶液；KI－I 2 碘溶液；1%Na 2 SO 4 溶液 3、实验操作 （注意本实验的淀粉溶液为无 l NaCl 的淀粉溶液） 表 4 唾液淀粉酶活化及抑制实验 管号 1 2 3 4 0.5%淀粉溶液（ml） 1.5 1.5 1.5 1.5 最佳稀释度唾液（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 1% NaCl 溶液（ml） 0.5 － － － 1% CuSO 4 溶液（ml） － 0.5 － － 1% Na 2 SO 4 溶液（ml） － － 0.5 － 蒸馏水（ml） － － － 0.5 37℃恒温水浴中保温 10 分钟 KI－I 2 溶液（滴） 2～3 2～3 2～3 2～3 现 象 三、注意事项 各人唾液中淀粉酶活力不同，故本实验需要先做一个唾液淀粉酶稀释度的确定实验，以确定最佳稀释度。
四、思考题 1、何谓酶的最适 pH 和最适温度？ 2、说明底物浓度、酶浓度、温度和 pH 对酶反应速度的影响 3、作为一种生物催化剂，酶有哪些催化特点？ 7。