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Origami2(DE3)大肠杆菌菌株使用说明

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Origami2(DE3)±肠杆菌菌株编号名称北京华越洋生物NRR00900Origami2(DE3)大肠杆菌菌株基本信息:名称:Origami2(DE3)大肠杆菌菌株规格:300ul甘油菌储存温度:-80°C基因组:A(ara-leu)7697 AlacX74 AphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL F'[lac+ laclq pro] (DE3) gor522::Tnl0trxB (StrR, TetR) 简介:Origami 2系列菌株是K-12菌株衍生而来,在thioredoxin reductase (trxB)和glutathione reductase (gor)基因上同时含有突变,这使得该菌株 能够更加高效的在细胞质内生成二硫键,有助于含二硫键蛋白的活性蛋白 形成与Origami系列菌株相比,Origami 2系列菌株是卡那敏感的,这使 得该菌株能够适用于大多数的蛋白表达质粒Gor基因突变使得该菌株和 原来的0rigami(DE3)®株一样具有四环素抗性DE3是溶源性的ADE3,所 以在lacUV5启动子下携带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。

该菌株适用于 pET系列载体,及其他T7启动子系列载体Origami 2 (DE3)同时还是亮氨酸生长缺陷型宿主菌,可用于相关的克 隆以及蛋白表达Origami 2 (DE3)可使用LB培养基在379有氧的条件下培养,然后用 30%甘油-80°C保藏菌种,429热激可将质粒转入该菌株,此菌株在IPTG 的诱导下可进行蛋白表达操作说明:1, 本品包含一份甘油菌,使用本甘油菌时可以不用完全融解,在甘油菌表 面滩取少量涂板或进行液体培养即可也可以完全融解后使用,但随着冻融次数 的增加,细菌的活力会逐渐下降2, 为保证菌种纯正,避免其它细菌污染,尽量先划平板,然后再挑单克隆 菌落进行后续操作冷冻管开封:用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖菌株复溶:无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖,吸収lml左右复溶液,加入到冷冻 管中轻轻振荡,使冻干菌株溶解呈悬浮状菌株复壮:用无菌吸管吸取菌悬液,转移到复溶液滴瓶中做好标识,在适宜温度下培 养细菌在30-35°C培养箱中培养24-48h,真菌在23-28°C培养箱中培养24-72h (必耍时,可适当延长培养时间)菌株传代:将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中(尽星 增大接种量:如用无菌吸管吸取N50M新鲜培养物至固体培养基,边移动边缓 慢释放),适宜温度下培养,用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。

注意事项:1、 菌种活化前,将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中,长吋间室温下放 置会导致菌种衰退;2、 冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行;3、 一些菌种经过冷冻干燥保存后,延迟期较长,部分需连续两次继代培养才能 正常生长;4、 苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基,敬谙正确选择,不清楚时来 电询问:5、 某些厌氧菌的培养,开封到接种完成,均需以无氧气体充填,以保持厌氧 状态;培养过程中亦要保持厌氧状态;6、 某些菌种,如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要5-10%C02促 进生长;7、 如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况,应停止使用对应产品8、 部分菌种有致病性、扩散性,请专业人员在专业环境下有保护性操作保藏条件:・2(TC保存(复溶液于2-8°C保存)保藏时间:2-10年,应根据菌种状况及时转接。

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