抗体、蛋白、多肽、ELISA、Western、生物芯片、荧光定量 PCR--BioTNT 科研好助手 ：400-880-1880 021—51692391 ： 0086 21 51692391 Email: biotnt@ 主页： 鼠尾直接 PCR 试剂盒(快速基因型鉴定) 产品组分 储存方法 Buffer L 4℃保存，其余组分-20℃保存保质期一年 实验方法 1. 组织消化 按小鼠数量配制组织消化液，试剂比例如下： 单样本 Protease Plus 2 µL Buffer L 100 µL 组织消化液现用现配，充分混匀后使用 1.2. 向每个含有样本的 EP 管中加入 100 μL 新鲜组织消化液，55℃水 浴/金属浴中消化 30 min组织消化时，务必将组织完全浸没于消化 液中消化完成后，组织外观上仍然完整，但足量的基因组 DNA 已 经释放，不影响后续的 PCR 实验 1.3. 将样本置于 95℃水浴/金属浴中孵育 5 min 以灭活消化液中的蛋白 酶12000 rpm 离心 5 分钟，取上清作为 PCR 模板。
消化后的上清可 于-20℃保存三个月 Add protease mixture to the tissue tub Tissue Digestion 2. PCR 扩增 2.1. PCR 反应体系： 反应体系的配制最好于低温环境下（如冰浴）完成，以保证 PCR 扩增 效率和扩增特异性 Incubate at 55° C for 30 minutes to release genomic DNA Protease Inactivation After digestion, incubate at 95° C for 5 minutes to inactivate the proteases PCR After centrifuge, the supernatant of digested solution can be used as the template for PCR PCR 产物的 3’端带有碱基 A，可直接克隆至 T 载体，用于 DNA 测序 产品组分 B40013 (200 rxns) B40015 (500 rxns) Buffer L (mL) 20 50 Protease Plus (mL) 0.4 1 2 x M-PCR OPTI™ Mix (mL) 2 5 PCR 反应组分 20 μL 反应体系 (μL) 50 μL 反应体系 (μL) ddH2O 7 18 正向引物 (10 µM) 0.5 1 反向引物 (10 µM) 0.5 1 模板（消化产物） 2 5 2 x M-PCR OPTI™ Mix 10 25 Temperature (° C) Time Cycles 94 5 min 1 94 20 sec 35-40 50-65 30 sec 72 X min (2 kb /min) 72 5 min 1 12 -- 1 抗体、蛋白、多肽、ELISA、Western、生物芯片、荧光定量 PCR--BioTNT 科研好助手 ：400-880-1880 021—51692391 ： 0086 21 51692391 Email: biotnt@ 主页： 3. 琼脂糖凝胶电泳 试剂 2 x M-PCR OPTITM Mix 中含有溴酚蓝染料，PCR 产物可直接点 样进行琼脂糖凝胶电泳。
常见问题及对策 常见问题 可能原因 对策 PCR 反应条件设置不当 优化 PCR 反应条件 样本组与阳性对照组 均无扩增条带 PCR 引物质量问题 重新设计 PCR 引物 不当储存或长期储存引 起试剂活性丧失 使用新鲜的试剂 样本组无扩增条带而 组织消化不够充分 延长 55℃消化时间 至 60 min 阳性对照组正常 蛋白酶未被完全灭活 消化产物在 95-100℃ 孵 育 5 min PCR 退火温度太低，循 增加 PCR 退火温度，降 环数、引物浓度或模板 低 PCR 循环数、引物浓 浓度太高 度或模板浓度 存在非特异性扩增条 PCR 引物错配 重新设计 PCR 引物 带 配制 PCR 反应体系时温 PCR 反应体系的配制在 度太高或配制完成后放 低温下进行，配制完成 置时间太久 后尽快进行 PCR 扩增反 应 。