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葡萄糖消耗或摄取实验的检测方法有如下两种

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葡萄糖消耗或摄取实验的检测方法有如下两种_第1页
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葡萄糖消耗或摄取实验的检测方法有如下两种:1 将细胞在含 12mM 浓度的葡萄糖和 1 uCi/ml 的氚标葡萄糖的培养液中培养 3-360min ,用预 冷的PBS缓冲液漂洗3遍以将反应终止,用细胞裂解液裂解细胞,其中一部分用来测蛋白浓度, 而另一部分用液闪仪检测其闪烁计数(具体操作你可以跟操作的实验员咨询),最终结果表示为 每mg细胞裂解产物的放射比活性:即cpm/mg具体你可以参考文献:Glycogen-targeting Su bunits and Glucokinase Differentially Affect Pathways of Glycogen Metabolism and Their Regulationin Hepatocytes2葡萄糖摄取:含0.2 % BSA的和DMEM培养基(葡萄糖浓度为25mM)并含或不含胰岛素的 培养基继续培养 2 个小时后,收集培养基以葡萄糖氧化酶的方法确定葡萄糖浓度葡萄糖摄取 的确定如下:空白组(含相同的干预液,但不含细胞)葡萄糖浓度值减去实验组细胞葡萄糖值 并通过 MTT 比色法以校正因细胞数量差异而导致的结果差异可以参考文献: Effects of Berb erine on Glucose Metabolism In Vitro个人觉得第一种方法相对比较精确,可以检测代谢后氚标的水的量,从中可以了解肝细胞经胰岛 素刺激后对葡萄糖的吸收,因此可以反映出肝细胞的胰岛素敏感性,国际上很多文献都是用这种 方法。

而第二种只能检测出葡萄糖转运到细胞膜内后培养基中葡萄糖浓度的变化,不能反映出肝细胞内 胰岛素的敏感性,因胰岛素的功能除了促进葡萄糖在膜内外的转运,还有后面在细胞内进一步酵 解,因此国际上用的不多你是做in vivo还是做in vitro?方法其实都可以,基本都是探测 gamma 射线, 2 脱氧葡萄糖在组织内代谢会被阻断,因此停留 在局部组织内,用C14或氚标记后可以进行探测,其实也可以用18F做标记做In Vivo其实就是PET,用18F-FDG不做活体都无所谓,把动物杀了取组织然后测 gamma 计数 ,做个蛋白矫正就可以GLUT可以用免疫印迹,但注意有转位,因此建议除了做总表达量的变化还要做细胞膜GLUT量 的变化。

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