单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,医学实验室认可技术要求,PCR,专业的关键控制点,沈佐君,shenzuojun163,医学实验室认可技术要求PCR专业的关键控制点沈佐君,临床基因扩增检验实验室管理暂行办法,（卫医发,201910,号）,医疗机构临床实验室管理办法,（卫医发,201973,号）,医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法（卫办医政发,2019,194,号）,临床基因扩增检验实验室基本设置标准,临床基因扩增检验实验室工作导则,ISO15189,准则（,CL02,）,CNAS-GL26,医学实验室质量和能力认可准则在基因扩增检验领域的指南,CNAS,医学实验室质量和能力认可准则在基因扩增检验领域的应用说明,参考依据,临床基因扩增检验实验室管理暂行办法（卫医发20191,概 述,基因体外扩增检验通常称为,PCR,检验；,该检验项目是目前我国临床检验项目中唯一一项需要通过卫生部或省级临床检验中心现场技术验收合格方可开展临床检验的技术准入项目概 述基因体外扩增检验通常称为PCR检验；,概 述,对实验室的要求：,实验室验收合格证书,人员上岗证书,实验室的布局,仪器设备要求,质量手册、管理程序文件、操作程序文件、作业指导书、记录表格等,概 述对实验室的要求：,1,范围,本文件规定了,CNAS,对医学实验室基因扩增检验领域的认可要求，包括病原体,核酸扩增,检验和病理学检查等领域涉及的,人体,基因扩增检验。
2,规范性引用文件,下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括修改单）适用于本文件GB/T 20468-2019,临床实验室定量测定室内质量控制指南,卫办医政发,2019,194,号医疗机构临床基因扩增管理办法,CNAS-RL02,能力验证规则,1 范围,4,管理要求,4.1.1,从事基于组织,/,细胞形态学基础项目检测的医学实验室，应具有病理学诊断资质4 管理要求4.1.1 从事基于组织/细胞形态学基础项目,5,技术要求,5.1,人员,5.1.2,基因扩增实验室（以下简称实验室）操作人员应经过有资质的培训机构培训合格取得上岗证后方可上岗5.1.4,实验室负责人至少应具有以下资格：中级职称，医学相关专业背景，二年以上基因扩增工作经验5.1.11,实验室应制定员工能力评审的内容和方法，每年评审员工的工作能力；至少每半年评审新员工工作能力，并保存胜任的证据当职责变更时，应有政策规定对员工进行再培训和再评审没有通过评审的人员应经再培训和再评审，合格后才可继续上岗，并记录5.1.13,实验室应提供工作人员对患者隐私及结果保密的声明及签字。
5 技术要求5.1 人员,5.1,人 员,操作人员考核的主要内容：,1.,标本接收与处理：流程和标本是否合格的要点,2.,试剂耗材质检：为何要质检、如何做,3.,核酸提取：原理和操作技术要领,4.,防污染：措施和意识,5.,质量控制：程序和实际运行情况、失控的分析处理,6.,结果分析与判断：结果审核、报告发放,5.1 人 员操作人员考核的主要内容：,5.1,人 员,在现场评审时要求安排人员比对：,临床基因扩增检验的操作主要是标本处理中的核酸提取步骤，,这其中所涉及,的又主要是加样器的使用，尽管操作简单，,但由于均为微量操作，最后扩增放大，因此要获得稳定可靠的测定结果，操作人员需要一定的专业技术知识和经验,5.1 人 员在现场评审时要求安排人员比对：,5.1,人 员,在现场安排实验时应考虑到的问题：,标本数量：一般,5,个；,标本要求：一份阴性，其余,4,份一般要尽可能涵盖高、中、低、临界等浓度差，了解线性范围5.1 人 员 在现场安排实验时应考虑到的问题：,5.2,设施和环境条件,(3-1),5.2.1,实验室原则上分四个分隔开的工作区域：,试剂贮存和准备区；,标本制备区；,扩增区；,扩增产物分析区。
如使用自动分析仪（扩增产物闭管检测），（,c,）和（,d,）区可合并上述每个区域应有充分空间以保证：,样本处置符合分析前、后样本分区放置；,仪器放置符合维修和操作要求；,标本制备区放置生物安全柜、离心机和冰箱等仪器设备；,打印检验报告时交叉污染的控制5.2 设施和环境条件(3-1)5.2.1实验室原则上分四个,5.2,设施和环境条件,(3-2),5.2.2,实验室应实施安全风险评估，应针对各工作区制定针对性的防护措施及合适的警告5.2.4,实验室各分区应配置固定和移动紫外线灯，波长为,254nm,，照射时离实验台的高度为,60,90cm,标本处理区应配置二级生物安全柜5.2.5,实验室应依据所用分析设备和实验过程对环境温、湿度的要求，制定实验室温、湿度控制的目标，有效地实施控制，并提供温、湿度监控记录实验室应依据用途（如：,RNA,检测用水），制定适,宜的水质标准（如：应除,RNase,），并定期检测5.2 设施和环境条件(3-2)5.2.2 实验室应实施安全,5.2,设施和环境条件,(3-3),5.2.6,基因扩增检验各工作区域应有明确的标记，不同工作区域内的设备、物品不能混用进入各工作区域应按照单一方向进行，即试剂贮存和准备区,标本制备区,扩增区,扩增产物分析区。
不同的工作区域宜使用不同的工作服（如不同的颜色）工作人员离开各工作区域时，不能将工作服带出5.2.7,实验室应有限制进入的标志和措施5.2.9,实验室应有足够的、温度适宜的储存空间（如冰箱），用以保存临床样品和试剂，设置目标温度和允许范围，并记录实验室应有温度失控时的处理措施，并记录5.2.10,实验室应有经过培训的内务管理人员（如保洁人员），实验室应有地面、台面的维护、清洁和消毒计划及相关的记录危险物品的存放及处置应遵守相关法规，并应有相关的使用记录5.2 设施和环境条件(3-3)5.2.6 基因扩增检验各工,5.3,实验室设备,(3-1),5.3.1,实验室应制定设备、试剂和耗材的采购、验收等管理程序，应有根据工作量保证实验持续进行的试剂,/,耗材订购计划，以及试剂,/,耗材最低贮存量要求基因扩增实验室如从事,RNA,的检测，应具有高速冷冻离心机在使用,PCR-ELISA,方法检测扩增产物时，应配置洗板机并使用洗板机洗板一次性的加样器吸头应带有滤芯5.3.2,强检设备按国家相关要求执行，应进行外部校准的设备，可按制造商校准程序进行对分析设备校准的基本项目至少应包括：加样系统、检测系统、温控系统。
应内部校准的辅助设备，实验室应制定内部校准程序应定期对,PCR,仪、加样器、温度计和恒温设备进行校准5.3 实验室设备(3-1)5.3.1 实验室应制定设备、试,校准与检定,校准：,在规定条件下，为确定测量仪器或测量系统所指示的量值，或实物量具或参考物质所代表的量值，与对应的由标准所复现的量值之间关系的一组操作检定：,查明和确认计量器具是否符合法定要求的程序，它包括检查、加标记和（或）出具检定证书校准与检定校准：在规定条件下，为确定测量仪器或测量系统,5.3,实验室设备,(3-2),5.3.4,实验室应保存与检验质量有关的设备管理记录实验室应提供对试剂和耗材检查、接收或拒绝、贮存和使用的记录，包括批号、效期、实验室接收日期、接收人和使用日期等试剂耗材的质检记录至少包括：,外观检查：肉眼可看出的，如包装完整性；,性能检测：通过实验才能判断的，如耗材的抑制物、试剂批间的差异（应涵盖低浓度和高浓度，如安排过去检测过的临界阳性的患者标本加上病理定性检查的部分）对于试剂性能质检记录，应能反映该批试剂：,1,）核酸提取效率，,2,）核酸扩增效率商品试剂记录包括：使用效期和启用日期自配试剂记录包括：试剂名称或成分；规格；储存要求；制备或复融的日期；有效期；配制人。
5.3 实验室设备(3-2)5.3.4 实验室应保存与检验质,试剂质检,强调采用,患者,标本进行试剂质检的意义：,PCR,实验时两个关键步骤,：（,1,）,从标本中提取核酸；（,2,）提取核酸的扩增商品化的质控品和标准曲线的结果良好，并非能反映提取试剂的质量试剂质检 强调采用患者标本进行试剂质检的意义：,样品序号,结果,1,（老试剂）,结果,2,（新试剂）,偏差,判定标准,结论,对数值,对数值,偏倚,%,偏倚,%,符合,/不符合,1,0,0,0%,7.5%,符合,2,3.02,3.12,+3.3%,7.5%,符合,3,4.58,4.32,5.7%,7.5%,符合,4,6.24,5.96,4.5%,7.5%,符合,5,8.56,8.87,+3.6%,7.5%,符合,样品序号结果1（老试剂）结果2（新试剂）偏差判定标准结论对数,5.3,实验室设备,(3-3),5.3.6 PCR,扩增仪应配备稳压电源5.3.7,设备故障修复后，实验室应对该设备性能进行验证,，必要时需进行校准,实验室应首先分析故障原因，如果设备故障影响了方法学性能，可通过以下合适的方式进行相关的检测、验证（适用于定量项目）：,可校准的项目结果超出允许范围时，实施校准；,质控品检测结果应在质控范围内；,与其他仪器的检测结果比较，偏差符合附录,A,的要求；,使用留样再测结果进行判别，偏差符合附录,A,的要求,。
特别注意的是：,评价故障对之前检验结果的影响,5.3 实验室设备(3-3)5.3.6 PCR扩增仪应配备,基因扩增检验项目分析性能标准,A.1,应不低于国家标准、行业标准、地方法规要求A.2,自建检测系统分析性能标准：以能力验证,/,室间质评评价界限作为允许总误差（,TEa,），重复性精密度,1/4TEa,；中间精密度,1/3TEa,A.3,设备故障修复后，分析系统比对：,5,份样本，覆盖测量范围，包括医学决定水平，至少,4,份样本测量结果偏倚,1/2TEa,A.4,实验室内分析系统定期比对：样本数,n20,，浓度应覆盖测量范围，包括医学决定水平，计算回归方程，计算在医学决定性水平下的系统误差（偏倚,%,），应,1/2TEa,A.5,留样再测判断标准：按照项目稳定性要求选取最长期限样本，,5,个样本，覆盖测量范围，考虑医学决定水平，至少,4,个样本测量结果偏倚,1/2TEa,A.6,没有标准和室间质评要求时，实验室间结果比对合格标准可依据制造商声明的性能标准而制定基因扩增检验项目分析性能标准,附录,A:,基因扩增检验项目分析性能标准,A.1,应不低于国家标准、行业标准、地方法规要求A.2,自建检测系统不精密度要求：以能力验证,/,室间质评评价界限（靶值,0.4,对数值）作为允许总误差（,TEa,），重复性精密度,3/5TEa,；中间精密度,4/5TEa,。
A.3,设备故障修复后，分析系统比对：,5,份样本，覆盖测量范围，至少,4,份样本测量结果偏倚,7.5%,A.4,实验室内分析系统定期比对：样本数,n20,，浓度应覆盖测量范围，计算回归方程，计算系统误差应,7.5%,A.5,留样再测判断标准：按照项目稳定性要求选取最长期限样本，,5,个样本，覆盖测量范围，至少,4,个样本测量结果偏倚,7.5%,A.6,没有标准和室间质评要求时，实验室间结果比对合格标准可依据制造商声明的性能标准而制定附录A:基因扩增检验项目分析性能标准,1X10,3,取对数,3,；,3,0.4,；,0.4/3,13.33%,；,1X10,8,取对数,8,；,8,0.4,；,0.4/8,5%,1X103,项目,CLIA,88,基于生物学变异,合适性能,(%),最佳性能,(%),最低性能,(%),钾,T,0.5mmol/L,5.8,2.9,8.7,钠,T,4mmol/L,0.9,0.4,1.3,氯,T,5%,1.5,0.7,2.2,钙,T,0.25mmol/L,2.4,1.2,3.6,磷,T,20%,10.。