医学微生物学实验EXPERIMENTS OF MEDICAL MICROBIOLOGY•实验室规则实验室规则 The Rules of Microbial Lab•分组分组 Grouping 实验一实验一 细菌形态与结构的检查细菌形态与结构的检查examination of bacterial morphology and structure •掌掌握握细细菌菌的的三三种种基基本本形形态态和和特特殊殊结结构构 Master bacterial morphology and special structures•掌掌握握细细菌菌学学标标本本片片的的制制作作和和革革兰兰染染色色法法 Master the preparation of bacterial sample slides and Gram staining•掌握油镜的使用与保护掌握油镜的使用与保护 Master the use of oil lens•了了解解墨墨汁汁涂涂片片法法和和悬悬滴滴法法 Know the principle of negative staining and hanging-drop 细菌基本形态观察细菌基本形态观察 Observe bacterial morphology1.1.球球菌菌 coccus：：外外观观呈呈球球形形或或近近似似球球形形（（葡葡萄萄球菌球菌staphylococcus））2.2.杆菌杆菌 bacillus：呈杆状，长短、粗细和大小不：呈杆状，长短、粗细和大小不一（一（肠道杆菌肠道杆菌enterobacteria）） 3.3.螺形菌螺形菌spiral bacteria：：Ø弧菌弧菌 vibrio 菌体略带弯曲，呈逗点状或括弧菌体略带弯曲，呈逗点状或括弧形（形（霍乱弧菌霍乱弧菌Vibrio cholera））Ø螺菌螺菌 spirilum 菌体有多个弯曲（菌体有多个弯曲（幽门螺杆菌幽门螺杆菌 Helicobacter pylori）） Basic shapes•Spherical: coccus•Rod: bacillus•Curved or spiral: spiral bacterium 葡萄球菌葡萄球菌staphylococcus 肠道杆菌肠道杆菌EnterobacteriaEnterobacteria 霍乱弧菌霍乱弧菌VibrioVibrio cholera cholera 幽门螺杆菌幽门螺杆菌 Helicobacter pylori 细菌特殊结构观察细菌特殊结构观察Observe bacterial special structures•荚膜荚膜 capsule：与细菌致病力有关（：与细菌致病力有关（产气产气荚膜梭菌荚膜梭菌 C. perfringens））•鞭毛鞭毛 flagellum：细菌的运动器官（：细菌的运动器官（破伤破伤风梭菌风梭菌 C. tetani））•芽胞芽胞 spore：判断微生物的灭菌指标（：判断微生物的灭菌指标（破破伤风梭菌伤风梭菌 C. tetani））•菌毛菌毛 pilus：与细菌致病力和遗传物质的：与细菌致病力和遗传物质的传递有关传递有关------电镜观察电镜观察 荚膜荚膜 capsule 鞭毛鞭毛 flagullum 芽胞芽胞 sporespore 芽胞芽胞 sporespore •细菌染色标本检查法细菌染色标本检查法a.a.单染法单染法 Simple staining：： 如：美兰染色如：美兰染色Methylthioninium Chloride stainingb.b.鉴别染色法鉴别染色法 Differential staining 如：革兰染色如：革兰染色Gram stain、、 抗酸染色抗酸染色Acid-fast stainc.c.特殊染色法特殊染色法 Special staining 如：鞭毛染色如：鞭毛染色Flagella stain、、芽胞染色芽胞染色 Spore stain d.d.墨汁墨汁负染色法染色法 Negative stain •细菌不染色菌不染色标本本检查法法a.a.悬滴法悬滴法 H Hanging drop methodb.b.压滴法压滴法 Pressure drop method 细菌形态检查法细菌形态检查法 Gram stainingAcid-fast stainingNegative staining真菌fungusCapsule staining 悬滴法悬滴法1．取凹玻片一张，在凹窝四周涂凡士林（或水）少许。
．取凹玻片一张，在凹窝四周涂凡士林（或水）少许2．取一接种环细菌液体培养物放在盖玻片中央．取一接种环细菌液体培养物放在盖玻片中央3．将凹玻片反转，使凹窝对准盖玻片中心，液滴即悬垂于凹．将凹玻片反转，使凹窝对准盖玻片中心，液滴即悬垂于凹窝中央4．先用低倍镜找到悬滴的边缘，再换用高倍镜检查镜检时．先用低倍镜找到悬滴的边缘，再换用高倍镜检查镜检时光线宜稍弱，也可用暗视野显微镜观察光线宜稍弱，也可用暗视野显微镜观察5．结果观察细菌的运动性（有鞭毛细菌有位置移动，无鞭毛．结果观察细菌的运动性（有鞭毛细菌有位置移动，无鞭毛细菌只有原位颤动细菌只有原位颤动 标本片的制作标本片的制作Preparation of bacterial specimen 涂片涂片smear → → 干燥干燥 dry → → 固定固定 Fixation •涂片要薄而均匀涂片要薄而均匀•干燥时标本面朝上干燥时标本面朝上•固定需在酒精灯火焰上来回固定需在酒精灯火焰上来回2～～3次，杀死细菌、次，杀死细菌、粘附牢固、蛋白质变性易于着色如遇多种标本，粘附牢固、蛋白质变性易于着色如遇多种标本，可用蜡笔在玻片上划为数格，并于玻片的背面，可用蜡笔在玻片上划为数格，并于玻片的背面，标明标本的编号。
标明标本的编号 革兰染色法（革兰染色法（Gram stainGram stain）） •初初染染：：在在已已固固定定的的标标本本片片上上滴滴加加结结晶晶紫紫染染液液（（Crystal violet）），，染染1 1minmin，，水水洗洗，，并并将将玻玻片片上上积积水水轻轻甩净轻轻甩净•媒媒染染：：滴滴加加碘碘液液（（Gram's iodine solution））媒媒染染1 1minmin，，水洗，并将玻片上积水轻轻甩净水洗，并将玻片上积水轻轻甩净•脱脱色色：：加加9595％％酒酒精精（（ethanol））数数滴滴，，轻轻轻轻晃晃动动玻玻片片30sec30sec，，直直到到流流下下的的酒酒精精无无色色或或稍稍呈呈淡淡紫紫色色为为止止水洗，并将玻片上积水轻轻甩净水洗，并将玻片上积水轻轻甩净•复复染染：：加加稀稀释释石石炭炭酸酸复复红红染染液液（（basic fuchsin solution）复染）复染3030secsec，，水洗 镜镜 检检•待待标标本本片片自自干干，，或或用用吸吸水水纸纸吸吸干干（（勿勿撕撕）），，加加一一滴滴香柏油，油镜检查，注意观察菌体的形态及染色性香柏油，油镜检查，注意观察菌体的形态及染色性•紫色者为革兰阳性菌（紫色者为革兰阳性菌（G G+ +菌）菌）•红色为革兰阴性菌（红色为革兰阴性菌（G G- -菌）菌）实验完毕后，请把玻片放在污物盆中实验完毕后，请把玻片放在污物盆中! ! 革兰染色的革兰染色的原理原理•等电点等电点•胞壁结构成分胞壁结构成分Structure of a Gram-Negative Cell Wall Structure of a Gram-Positive Cell Wall 革兰染色的意义革兰染色的意义•鉴别细菌：分成鉴别细菌：分成G+和和G-菌两大类菌两大类•指导临床用药指导临床用药•细菌与致病性的关系细菌与致病性的关系 。