实验四 槐花米中芸香苷的提取及槲皮素的制备与检识（一）目的要求学习黄酮类化合物的提取、分离和检识，通过实验要求：1．通过芸香苷提取与精制，掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理和操作2．掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮苷、苷元和糖部分的检识方法3．掌握由芸香苷水解制取槲皮素的方法二）主要化学成分的结构及性质槐花米为豆科植物槐 Sophora japonica L.的干燥花蕾，主要含芸香苷（芦丁） ，含量高达 12％～20％，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖；槐花亦含芸香苷，但含量较槐米为少芸香苷(rutoside) 分子式 C27H30O16，分子量 610.51淡黄色针状结晶，mp.177～178℃，难溶于冷水（1∶8000） ，略溶于热水（1∶200） ，溶于热甲醇（1∶7） 、冷甲醇（1∶100） 、热乙醇（1∶30） 、冷乙醇（1∶650） ，难溶于醋酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀碱液中槲皮素(quercetin) 又称槲皮黄素，分子式 C15H10O7，分子量 302.23黄色结晶，mp.314℃（分解） 溶于热乙醇（1∶23） 、冷乙醇（1∶300） ，可溶于甲醇、丙酮、醋酸乙酯、冰醋酸、吡啶等溶剂，不溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿中，几不溶于水。
OOHOHOORHOOH芸香苷 R=－葡萄糖－鼠李糖槲皮素 R=H（三）实验原理由槐花米中提取芸香苷的方法很多，本实验是根据芸香苷在冷水和热水中的溶解度差异的特性进行提取和精制，或根据芸香苷分子中具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大溶解度，以碱水为溶剂煮沸提取，其提取液加酸酸化后则芸香苷游离析出四）实验内容1．芸香苷的提取方法Ⅰ：水提取法见书方法Ⅱ ：碱溶酸沉法见书2．芸香苷的精制见书4．芸香苷、槲皮素及糖的检识取芸香苷、槲皮素少许，分别用 8ml 乙醇溶解，制成试样溶液，按下列方法进行实验，比较苷元和苷的反应情况1）Molish 反应：取试样溶液各 2ml，分置于两支试管中，加 10％α-萘酚乙醇溶液 1ml，振摇后倾斜试管 45°，沿管壁滴加 1ml 浓硫酸，静置，观察并记录两液面交界处颜色变化2）盐酸-镁粉反应：取试样溶液各 2ml，分别置于两支试管中，各加入镁粉少许，再加入盐酸数滴，观察并记录颜色变化3）醋酸镁反应：取两张滤纸条，分别滴加试样溶液后，加 1％醋酸镁甲醇溶液 2 滴，于紫外灯下观察荧光变化，并记录现象4）三氯化铝反应：取两张滤纸条，分别滴加试样溶液后，加 1％三氯化铝乙醇溶液 2 滴，于紫外灯下观察荧光变化，并记录现象。
5）锆-柠檬酸反应：取试样溶液各 2ml，分别置于两支试管中，各加 2％二氯氧锆甲醇溶液 3～4 滴，观察颜色，然后加入 2％柠檬酸甲醇溶液 3～4 滴，观察并记录颜色变化6）纸色谱检识支持剂：新华层析滤纸(中速,20CM×7CM)试 样：自制芸香苷乙醇溶液自制槲皮素乙醇溶液对照品：芸香苷对照品乙醇溶液槲皮素对照品乙醇溶液展开剂：正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5 上层）或 15％醋酸溶液显色剂：1）在可见光下观察斑点颜色，再在紫外灯下观察斑点颜色2）喷雾三氯化铝试剂，置日光下及紫外灯下观察并记录斑点的颜色变化7）薄层色谱检识薄层板：硅胶 G-CMC-Na试 样：自制 1％芸香苷乙醇溶液自制 1％槲皮素乙醇溶液对照品：1％芸香苷对照品乙醇溶液1％槲皮素对照品乙醇溶液展开剂：氯仿-甲醇-甲酸（15∶5∶1）显色剂：喷雾 1％三氯化铁和 1％铁氰化钾水溶液，临用时等体积混合（8）糖的纸色谱检识取糖的供试液做径向纸色谱，和已知糖液作对照，可得到与葡萄糖、鼠李糖相同 Rf值的斑点支持剂：新华层析滤纸（圆形）试 样：糖的供试液对照品：1％葡萄糖对照品水溶液1％鼠李糖对照品水溶液展开剂：正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5 上层）显色剂：喷雾苯胺-邻苯二甲酸试剂，于 105℃加热 10 分钟或红外灯下加热10～15 分钟，显棕色或棕红色斑点。
五）实验说明及注意事项1．在提取前应将槐花米略捣碎，使芸香苷易于被热水溶出2．本实验直接用沸水由槐花米中提取芸香苷，收得率稳定，且操作简便如用碱溶酸沉法提取，加入石灰乳可以达到碱性溶解的目的，又可除去槐花 7米中所含的大量粘液质，但应严格控制其碱性 pH8～9，不可超过 pH10如 pH值过高，加热提取过程中芸香苷可被水解破坏，降低收得率加酸沉淀时，控制 pH3～4,不宜过低，否则芸香苷可生成 yang 盐而溶于水，也降低收得率3．在提取过程中，加入硼砂的目的是使其与芸香苷分子中的邻二酚羟基发生络合，既保护了邻二酚羟基不被氧化破坏，又避免了邻二酚羟基与钙离子络合（芸香苷的钙络合物不溶于水） ，使芸香苷不受损失，提高收得率六）思考题1．黄酮类化合物还有哪些提取方法？芸香苷的提取还可用什么方法？2．酸水解常用什么酸？为什么用硫酸比用盐酸水解后处理更方便？3．本试验中各种色谱的原理是什么？解释化合物结构与 Rf值的关系4．试讨论苷类成分的检识程序。
