糖皮质激素的抗炎作用糖皮质激素的抗炎作用实验目的实验目的学学习习用用蛋蛋清清致致炎炎剂剂致致动动物物实实验验性性急急性性炎炎症症的的方法观察糖皮质激素的抗炎作用观察糖皮质激素的抗炎作用实验原理实验原理异体蛋白进入机体以后,可在短时异体蛋白进入机体以后,可在短时间内引起组织的急性炎症反应,炎间内引起组织的急性炎症反应,炎症部位明显肿胀,体积增大本实症部位明显肿胀,体积增大本实验用蛋清为异种蛋白质,注入大鼠验用蛋清为异种蛋白质,注入大鼠足跖内,可致局部急性炎症反应,足跖内,可致局部急性炎症反应,使局部组织肿胀通过测定炎症部使局部组织肿胀通过测定炎症部位的体积,观察炎症的发生及氢化位的体积,观察炎症的发生及氢化可的松的抗炎作用可的松的抗炎作用 糖皮质激素(糖皮质激素(GCSGCS)是由肾上腺皮质中束状带分泌的一类甾)是由肾上腺皮质中束状带分泌的一类甾体激素,主要为皮质醇,具有调节糖、脂肪、和蛋白质的生体激素,主要为皮质醇,具有调节糖、脂肪、和蛋白质的生物合成和代谢的作用,还具有抑制免疫应答、抗炎、抗毒、物合成和代谢的作用,还具有抑制免疫应答、抗炎、抗毒、抗休克作用抗休克作用 抗抗炎炎作作用用::GCSGCS有有快快速速、、强强大大而而非非特特异异性性的的抗抗炎炎作作用用。
对对各各种种炎炎症症均均有有效效在在炎炎症症初初期期,,GCSGCS抑抑制制毛毛细细血血管管扩扩张张,,减减轻轻渗渗出出和和水水肿肿,,又又抑抑制制白白血血细细胞胞的的浸浸润润和和吞吞噬噬,,而而减减轻轻炎炎症症症症状状在在炎炎症症后后期期,,抑抑制制毛毛细细血血管管和和纤纤维维母母细细胞胞的的增增生生,,延延缓缓肉芽组织的生成而减轻疤痕和粘连等炎症后遗症肉芽组织的生成而减轻疤痕和粘连等炎症后遗症 抗抗炎炎作作用用机机制制::GCSGCS扩扩散散进进入入胞胞浆浆内内,,并并与与GRGR—HspHsp结结合合同同时时HspHsp被被分分离离GCSGCS和和GRGR复复合合物物进进入入细细胞胞核核,,与与靶靶基基因因启启动动子子序序列列的的GREGRE结结合合,,增增加加抗抗炎炎细细胞胞因因子子基基因因转转录录,,与与nGREnGRE结结合合抑制致炎因子的基因转录,而产生抗炎作用抑制致炎因子的基因转录,而产生抗炎作用 图解图解实验对象实验对象大鼠,雌雄各半,体重大鼠,雌雄各半,体重150150克实验器材与试剂实验器材与试剂器器材材::大大鼠鼠后后足足容容积积测测量量器器、、1mL1mL注注射射器器、、50mL50mL小烧杯。
小烧杯试试剂剂::新新鲜鲜蛋蛋清清,,氢氢化化可可的的松松注注射射液液,,生生理盐水实验步骤实验步骤1.1.取取大大鼠鼠2 2只只,,标标记记,,称称重重,,分分别别腹腹腔腔注注射射下下列列药药物物,1,1号号鼠鼠生生理理盐盐水水3mL/kg, 3mL/kg, 2 2号号鼠鼠::氢氢化化可可的的松松溶溶液液15mg/kg 15mg/kg (0.5%(0.5%溶液溶液3mL/kg3mL/kg)2.2.取取带带有有侧侧管管的的大大鼠鼠后后足足容容积积测测量量器器,,将将注注射射器器与与侧侧管管相连,盛入水,使液面与相连,盛入水,使液面与20mL20mL处平齐3.3.将将各各鼠鼠右右踝踝关关节节的的突突起起点点处处用用圆圆珠珠笔笔画画圈圈作作为为测测量量标标志志,,依依次次将将各各鼠鼠右右后后足足放放入入容容积积测测量量器器内内,,使使后后肢肢暴暴露露在在筒筒外外,,浸浸入入的的深深度度以以圆圆圈圈处处与与20ml20ml刻刻度度重重合合为为度度该该足足进进入入液液体体以以后后,,液液面面升升高高,,液液体体自自侧侧管管溢溢出出流流入入注注射射器器中中,,溢溢出出液液体体的的毫毫升升数数即即为为该该鼠鼠右右后后足足的的体体积积。
依依次次测定各鼠右后足的正常体积测定各鼠右后足的正常体积 4.4.各各鼠鼠腹腹腔腔注注射射药药后后15min15min,,从从右右后后足足掌掌心心向向掌掌趾关节方向进针,皮下注射新鲜蛋清趾关节方向进针,皮下注射新鲜蛋清0.1ml0.1ml5.5.注注射射蛋蛋清清后后20min20min、、40min40min、、60min60min、、80min80min,,分分别别测测量量右右后后足足的的体体积积,,记记录录溢溢出出液液体体的的毫毫升升数数各各鼠鼠致致炎炎以以后后的的体体积积减减去去正正常常的的体体积积,,即即为为各各个个时时间间右右后后足足的的肿肿胀胀度度即即::各各个个时时间间点点右右后后足足肿肿胀度胀度 = = 致炎后的容积致炎后的容积 - - 致炎前的容积致炎前的容积6.6.根据公式计算:根据公式计算:右右后后足足肿肿胀胀率率((% %))= =((致致炎炎后后最最大大容容积积 - - 致致炎炎前前的容积)的容积)/ /致炎前的容积致炎前的容积 ×100%×100%计算结果填入下表计算结果填入下表糖皮质激素的抗炎作用注意事项注意事项蛋蛋清清应应实实验验当当天天现现行行配配置置,,置置于于4℃4℃冰冰箱箱保保存。
存注注意意操操作作的的一一致致性性,,测测量量要要有有专专人人负负责责尽尽量减小误差量减小误差思考题思考题结结合合本本次次实实验验结结果果,,讨讨论论氢氢化化可可的的松松的抗炎作用的抗炎作用。