实验十九、纸色谱实验二十、氨基酸的纸 上电泳一、目的与要求:1、了解纸色谱的基本原理2、学习用纸色谱法分离氨基酸的一般操 作3、了解电泳的基本原理,学会纸上电泳 的操作方法4、初步掌握用纸上电泳法分离鉴定氨基 酸 二、基本原理u(一)纸色谱是一种分配色谱滤纸作 为载体,纸纤维上吸附的水为固定相,与 水不相混溶的有机溶剂作为流动相当样品点在滤纸的一端,使流动相从 有样品的一端上行,通过毛细管作用,流 向另一端时,依靠溶质在两相间的分配系 数不同而达到分离极性大的组分在固定 相中分配得多,随流动相移动速度慢,极 性小的在流动相中分配得多,随流动相移 动速度快一些 三、纸色谱实验步骤(观看录像)1、点样;2、展开;3、显色与结果处理——计算出两个物质的 Rf值纸色谱图u(二)在一定的条件下,带电的质点在 电场作用下,向着与其所带电荷相反的电 极移动,这种现象称为电泳不同氨基酸在同一pH值的溶液中,所 带的电荷不同在同一电场中,带不同电 荷的各个氨基酸泳动的方向和速度不相同 ,因此将不同的氨基酸在同溶液中进行电 泳时,由于各个氨基酸移动的方向和距离 都不相同,从而达到分离鉴定的目的四、纸上电泳实验步骤(观看录像)1、点样与润湿;2、电泳;3、显色;4、结果处理——标明正、负极和氨基 酸。
氨基酸的纸上电泳图谱实验注意事项:1、整个实验都不应用手直接接触滤纸(手 汗中有氨基酸);2、纸色谱点样点越小越好(点2次即可),纸上 电泳点样点越小越好(可重复点4-5次);3、点完样后,毛细管应放回原试管中,不 可放错;4、电泳实验中,当全部滤纸都放入电泳槽 后才可以通电;5、电泳结束应先关电源再把滤纸取出 (电压较高,注意安全);6、纸色谱中的显色剂已经加入到展开剂 中,不用另外喷,直接吹干即可显色;7、纸上电泳实验所喷水合茚三酮不能太 多,并且注意茚三酮不可喷到皮肤上。