培养基配方及配置根据其作用不同，培养基分为： 诱导培养基 增殖培养基 生根培养基 根据其营养水平不同，培养基可分为基本培养基和完全培养基 基本培养基（就是通常称呼的培养基）主要有MS、White、 N6、B5 、改良MS、Heller、Nitsh、SH、 Miller等 完全培养基就是基本培养基的基础上，根据试验的不同需要，附加一些物质，如生长调节物质和其他复杂有机物质等N6培养基特点：• 1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计• 成分简单• KNO3 和 (NH4)2SO4含量高• 广泛应用于小麦、水稻及其它植物的花药培养等 White培养基特点：• 1943年由Ｗhite为培养番茄根尖而设计的1963年又作了改良，称作Ｗhite改良培养基 • 特点：无机盐含量较低• 适用：生根培养B5培养基特点：• 含较低的铵• 双子叶植物 尤其木本植物组培可选择MS培养基特点：无机盐、离子浓度高，硝酸盐含量较高 MS培养基是目前应用最多最普遍的培养基。
无机盐的浓度较高，能保证组织培生长所需的矿物质营养并且因为离子浓度高，在配制、贮存、消毒过程中，即使有些成分略有出入，也不致影响培养基中的离子平衡 培养基配方明细表：培养基成分：一、无 机 盐 ：氮 枝叶生长需要氮素，缺氮老叶先发黄；氮过量，枝叶过度茂盛 磷 缺磷，植株生长缓慢，老叶暗紫色钾 促进花卉生长健壮，增强抗性，茎秆挺拔缺钾，叶尖、叶缘枯焦，叶片呈皱曲状，老叶发黄或火烧状钴 缺钴，叶片失绿而卷曲，整个叶片向上弯曲凋枯 二、有机物碳水化合物：选用种类：蔗糖（或葡萄糖、果糖）等• 蔗糖浓度：2%～3%，胚培养为4%～15%• 大生产时可用白糖 糖在培养基的作用： 1）为细胞提供合成新物质的碳骨架 2）为细胞的呼吸代谢提供底物和能量 3）维持渗透压维生素种类： VB1（盐酸硫胺素）、VB6（盐酸吡哆醇）、 VB3（烟酸）、Vc（抗坏血酸 浓度：0.1－1.0mg/L 作用：VB1 促愈伤组织产生，提高活力VB6 促根生长 Vc 防组织褐变 VB3 与植物代谢和胚的发育有关系 氨基酸：甘氨酸、精氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、 天冬酰胺、丙氨酸等等。
因培养基的种类不同，其种类和浓度不同 肌醇：又称环己六醇，在糖类的转化中起作用天然复合物椰乳：促愈伤组织和细胞培养，用量10－20%，使用注意茎尖大小香蕉泥：用量150－ 200ml/L ，应用在兰花组培马铃薯汁液：用量150－200g/L，使苗壮水解酪蛋白：浓度100－200mg/L，应用在微茎尖培养三、激素自然界中，植物激素是植物新陈代谢中产生的天然化合物，它能以极微小的量影响到植物的细胞分化、生长、发育，影响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰老和休眠、萌发等许多生理生化活动 在培养基中，其各种成分对培养物影响最大的最显著的就是激素激素的种类、浓度、以及配比都会显著的影响愈伤组织的形成、不定根、不定芽的分化，胚状体的形成等 通常，不同植物，或不同品种，甚至同一植物的不同位置对激素的要求有很大的变化，这主要取决于植物的内源激素水平 组织培养中使用的激素有的是天然的，如脱落酸（ABA）等，有的是合成的，如二氯苯氧乙酸（2，4－D）（一）、激素的种类： 1、生长素类： 在自然界中，生长素影响茎和节间的伸长、向性、顶端优势、叶片脱落和生根等现象 在组织培养中的主要作用是：诱导细胞的分裂和根的分化，诱导愈伤组织）组织培养中常用的生长素： 1 二氯苯氧乙酸（2，4－D） 2 萘乙酸（NAA） 3 吲哚乙酸（IAA） 4 吲哚－－3－丁酸（IBA） NAA、IAA、IBA被广泛用于生根，2，4－D有利于愈伤组织的诱导和生长。
IAA容易光解，注意用棕色试剂瓶保存，保存时间不要太久 溶解方法：1M NaOH或95％酒精，以前者为好保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存2、细胞分裂素 自然界中，细胞分裂素影响细胞分裂，顶端优势的变化和茎的分化等 组织培养中，细胞分类素主要促进细胞分裂和由愈伤组织上或器官上分化不定芽细胞分裂素常常与生长素相互配合，用以调节细胞分裂，细胞伸长，细胞分化和器官形成 常用的细胞分裂素有： 6－苄氨基嘌呤（6－BA） 激动素（6-糠氨基嘌呤、 KT） 玉米素（ZT） 噻二唑苯基脲（ thidiazuron、 TDZ ） 溶解方法：1MHCL 保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存3、赤霉素 由日本人黑泽1926年发现自然界中，赤霉素能够打破休眠、促进果实成长等效果虽然已经用于顶端分生组织的培养和维管分化的研究，但在培养基中很少添加，因为它的作用往往是负面的虽然也有赤霉素能刺激不定胚发育成正常小植株的报道，但在使用中仍需慎重，不可轻易添加 赤霉素有20多种，其中在组织培养中最常用的是GA3。
在组织培养中与生长素和细胞分裂素相比，赤霉素不太常用，据报道赤霉素能刺激不定胚正常发育成小植株 溶解方法：95％酒精 保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存 赤霉素易溶于水，但溶于水后不稳定，容易分解 灭菌：高温易分解，要过滤灭菌4、脱落酸 在自然界中，脱落酸能阻碍发育、促进老化、形成休眠芽等作用 经试验表明，脱落酸有利于胚性愈伤组织形成正常不定芽 材料的试管保存，加上脱落酸能抑制生长，使继代培养时间延长 溶解：易溶于NaHCO3溶液、氯仿或丙酮 保存：具有热稳定性，但容易发生光解 配成一定浓度后，冰箱冷藏保存四、培养体支持材料• 1.琼脂• 用量7－10g/L（0.7%-1%）注意：1 若浓度过高，培养基就会变得很硬，营养物质就难于扩散到培养的组织中 2 当进行营养需要研究时，应注意不要使用琼脂，因为市场供应所有琼脂含有杂质，特别是含有Ca,Mg和微量元素• 3.其它 卡拉胶、玻璃纤维、滤纸桥、海绵等五、辅助性物质• 1）.抗生素：1.常用种类：青霉素 链霉素 庆大霉素等• 2.用量：5%－20%• 3.作用：防止由外植体内生菌造成的污染。
• 4 过滤灭菌 • 2.）抗氧化物：常用抗氧化剂及使用：• 半胱氨酸VC（50－200mg/L液洗涤外植体伤口表面）• 3）活性炭：• 1.作用：具吸附作用；茎尖初代培养可防褐化；促进新梢增殖（浓 度 0.1 －0.2%）；促进生根；防止组培苗玻璃化（浓度0.3%）利于胚胎培养 • 2.常用浓度：0.5－10g/L• 3.活性炭的作用 • ①对生长的抑制：其吸附了植物激素• ②对生长的刺激：其吸附了有抑制作用的物质•培养基配制(二)母液配制要求：• 1.母液浓缩倍数：10-100 ，大量元素10；微量元素、铁盐100；有机物50；• 2.选用蒸馏水、重蒸馏水、分析纯或化学纯试剂• 3.防止沉淀• 4.激素母液浓度：1mg/ml,1次配成50或100 ml• 5.激素溶解： IAA、IBA、GA、ZT先溶95%酒精再定容；• NAA先溶于热水或95%酒精再加水；• 2，4-D先溶于1M NaOH再加水；• KT、BA先溶于1M HCl再加水。
MS培养基母液的配制培养基熬制：1.将定容好的培养液取1/3倒入铝锅中，同时加入称好的蔗糖和琼脂，边煮边搅拌，防止糊底2.用旺火煮开，再用文火加热，直至琼脂全部融化3.将容量瓶中剩余的液体一并倒入铝锅中，摇晃使均匀调PH值：• 用0.1MNaOH或HCl调PH值为6.0分装：趁热分装，100ml的三角瓶约装入30－40ml 扎口与灭菌:• 要求封口松紧适宜，系活扣，便于接种操作• 培养基应及时灭菌，防止变质灭菌后，应尽快地转移培养瓶使其冷却，一般应将灭菌后的培养基储藏于30℃以下的室内名，最好储藏在4－10℃的条件下 应当注意的是，某些生长调节物质如IAA、ZT、ABA等以及某些维生素是不稳定的，不能和其他的培养基一起高压灭菌，而要进行过滤灭菌。