2022执业药师《药物分析》章节复习:第六章其次节 薄层色谱法 一、根本原理 吸附剂对不同组分A和B具有不同吸附力量，绽开剂也对A和B有不同溶解、解吸力量，当绽开剂不断绽开，A、B在吸附剂和绽开剂之间连续不断吸附解吸，产生差速迁移得到分别 二、固定相 1.硅胶：含水量越高，活性越低，吸附力越弱在105～110℃加热30min，使其活化硅胶G、硅胶H、硅胶GF254、硅胶HF254的含义 2.氧化铝：碱性、中性和酸性三种活性与含水量有关 3.聚酰胺：可与酚羟基、羧基、氨基酸形成氢键，选择性高 三、操作方法 1.制备：1份固定相与3份水混和涂布，110℃烘30分钟 2.点样与绽开：点样一般为直径2～4mm圆点，距底2.0cm;绽开距离一般为10～15cm 3.检视：荧光板在紫外光下检视;一般薄层板用物理方法或显色剂显色 4.系统适用性试验 比移值：Rf=l/l0，为组分迁移距离与绽开剂迁移距离之比 比移值的范围是0.3～0.5，可用范围是0.2～0.8。
影响比移值因素：①被分别物质的构造和性质极性较强的组分Rf较小②薄层板性质吸附剂活性越强，Rf较小③绽开剂性质极性越强绽开剂Rf值增大④绽开剂蒸气饱和程度 3.分别度：R=2d/(W1+W2)，两相邻斑点中心距离与两斑点平均宽度的比值 四、应用 1.鉴别：比拟供试品与对比品溶液的比移值 2.杂质检查：杂质对比品比拟法;自身稀释对比法 第三节 高效液相色谱法 一、根本原理 1.根本概念 色谱峰参数：峰高或峰面积(用于定量)，峰位(保存值表示，用于定性)，峰宽(用于衡量柱效) 保存值：保存时间、死时间、调整保存时间 峰宽：标准差、半峰宽、峰宽 2.塔板理论：把组分在两相间的连续转移过程，分解为间歇的在单个塔板中的安排平衡过程 理论塔板数 n=5.54(tR/Wh/2)2 色谱柱的理论塔板数越多，柱效越高;同样长度中塔板高度越小，柱效越高 3.速率理论：主要说明使色谱峰扩张而降低柱效的因素 范氏方程 H=A+B/μ+Cμ A为涡流集中项采纳适当粒度、匀称的填料并填充匀称可减小涡流集中 B为纵向集中系数。
流淌相为液体，柱温为室温，B/μ可忽视不计 C为传质阻抗系数在能完全掩盖载体外表的前提下，应适当削减固定液用量 二、高效液相色谱仪 1.高压输液泵 2.色谱柱：分析型和制备型 3.进样阀 4.检测器 (1)选择性检测器：与待测物浓度、构造有关 ①紫外检测器：灵敏度、重复性及线性范围较好，适用于具有共轭构造的化合物的检测 ②光二极管阵列检测器：检测原理一样，可同时记录待测物汲取光谱，用于光谱鉴定和纯度检查 ③荧光检测器：灵敏，用于在流淌相条件下具有荧光或经衍生转化为具有荧光的化合物的检测 ④电化学检测器：灵敏度高，仅用于在流淌相条件下发生氧化-复原反响的化合物 ⑤质谱检测器：高灵敏度、高选择性、分析范围广;不适用于小分子化合物，主要用于大分子物质如蛋白质、多肽的检测 (2)通用性检测器：质量型检测器 ①示差折光检测器：仅对少数物质如糖类灵敏度较高，受环境温度影响大，实际应用少 ②蒸发光散射检测器：适用于UV检测困难的物质的分析，响应值与浓度通常不呈线性关系 三、吸附色谱法 1.原理：被分别组分与流淌相对吸附剂吸附力量的差异 2.常用固定相和流淌相 固定相：硅胶、氧化铝、高分子多孔微 流淌相：烷烃加极性调整剂;极性越强，洗脱力量越强 四、安排色谱法 1.原理：被分别组分溶入互不相溶的固定相与流淌相，到达平衡后浓度之比(安排系数)的差异 正相安排色谱：流淌相极性小于固定相极性。
极性小的组分先流出，极性大的组分后流出用于分别极性及中等极性物质 反相安排色谱：流淌相极性大于固定相极性极性大的组分先流出，极性小的组分后流出应用广泛，用于分别非极性至中等极性物质 离子对反相色谱：在流淌相中参加有机离子对试剂，用于有机酸、碱、盐的分别 离子抑制色谱：调整流淌相pH，抑制组分的解离 2.常用固定相和流淌相 (1)固定相：化学键合相 非极性：十八烷基硅烷键合硅胶 极性：氨基和氰基硅烷键合相 (2)流淌相 正相色谱：烷烃加极性调整剂 反相色谱：甲醇-水、乙腈-水 五、色谱系统适用性试验 固定相种类、流淌相组成、检测器类型不得转变，其余可适当转变以到达色谱系统适用性试验要求 1.理论塔板数：不得低于各品种项下规定的最小理论塔板数 2.分别度：除另有规定外，分别度应大于1.5 3.重复性：取各品种项下对比品2连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差不大于2.0% 4.拖尾因子：除另有规定外，拖尾因子应在0.95～1.05之间 六、应用 1.鉴别：利用保存值进展鉴别。
2.检查 (1) 内标法加校正因子测定供试品中某个杂质含量 (2) 外标法测定供试品中某个杂质含量 (3) 加校正因子的主成分自身对比法 (4) 不加校正因子的主成分自身对比法 (5) 面积归一化法：一般不用于微量杂质检查 3.含量测定：外标法，内标法 内标物要求：①原样品中不含有的组分;②保存时间与待测组分相近，但能完全分别;③纯度符合要求 第四节 气相色谱法 一、根本原理 以气体为流淌相的色谱法，具有分别效能高、灵敏度高、样品用量少、分析速度快等优点，不适用于难挥发和热稳定性差的物质分析 分类：吸附色谱和安排色谱;气-固色谱和气-液色谱;填充柱色谱和毛细管色谱 二、气相色谱仪 1.气源：FID常用载气多为氮气或氦气;TCD多用氦气或氢气为载气;ECD多用氮气或氩气 2.进样方式：溶液直接进样;顶空进样 3.色谱柱和柱温箱：填充柱和毛细管柱 4.检测器 火焰离子化检测器FID：灵敏度高、响应快、线性范围宽，最常用 氮磷检测器NPD：适用于含氮、磷元素的药物 火焰光度检测器FPD：适用于含磷、硫元素的药物 电子捕获检测器ECD：主要用于含卤素的药物 质谱检测器MS：高灵敏度、高专属性，可用于构造确证 热导检测器TCD：构造简洁、测定范围广、样品不破坏，但灵敏度较低。
三、常用固定液与载体 1.固定液 烃类：标准非极性固定液 硅氧烷类：通用型固定液 醇类：氢键型固定液 2.载体：化学惰性的多孔微粒，常用硅藻土 3.毛细管色谱柱 开管型：涂壁毛细管柱、载体涂层毛细管柱 填充型 四、色谱系统适用性试验 检测器种类、固定液品种及特别指定的色谱材料不得转变 五、应用 标准溶液参加法：配制杂质对比品溶液，周密参加到供试品中，测定杂质含量，再扣除参加对比品溶液量 采纳顶空进样时，该法可消退基质效应的影响该法与其他方法结果不全都时以本法结果为准 第五节 电泳法 一、根本原理 电泳迁移速度 ν=μE 在一样电场强度下，两组分分别程度取决于二者淌度之差电泳分别后各组分的相对位置由组分的电泳泳动和缓冲液电渗共同打算 影响电泳分别的条件包括： 1.缓冲液的pH值和离子强度：pH直接影响组分的荷电状况，是电泳分别的最重要条件离子强度太小则缓冲容量缺乏，区带易集中;太大则组分移动慢，发热严峻 2.电场强度：电场强度越大分别越完全，大于20V/cm时发热严峻。
3.样品浓度：通常以1%为宜太浓拖尾，太稀测定构造周密度差 二、各类电泳法 1.纸电泳法 2.醋酸纤维素电泳法 3.琼酯糖凝胶电泳法 4.聚丙烯酰胺凝胶电泳法 5.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法 三、毛细管电泳法 以弹性石英毛细管为分别通道，以高压直流电场为驱动力，依照样品中各组分之间淌度和安排行为的差异而实现分别的方法 1.毛细管区带电泳 2.毛细管凝胶电泳 3.毛细管等速电泳 4.毛细管等电聚焦电泳 5.胶束电动毛细管色谱 6.毛细管电色谱 。