家兔离体小肠平滑肌生理特性[实验目的] 1.通过观察各种因素对离体小肠平滑肌运动的影响,加深对平滑肌生理特性的了解 2.学习动物离体组织器官灌流的实验方法[实验原理]消化管、血管、子宫、输尿管、输卵管等均由平滑肌组成平滑肌除具有肌肉的一般生 理特性外,还具有自动节律性、较大的伸展性及对化学、温度和牵拉刺激敏感等生理特性在一定时间内,离体的小肠平滑肌在适宜的环境中仍可保持其生理功能本实验将小肠 平滑肌置于模拟内环境中,观察当模拟内环境因素发生变化时,离体小肠平滑肌运动的变化该实验方法不仅在理论上可以证明平滑肌的生理特性,而且还可用来测定微量化学物质 或药物的生物学特性,被称为生物学检定法[器械与材料] 兔(大白鼠或鸭)、恒温平滑肌浴槽、计算机生物信号采集处理系统(或二道生理记录 仪)、张力换能器、哺乳动物手术器械一套、注射器、纱布、棉线、丝线、万能支架、螺旋 夹、双凹夹、温度计、细塑料管(或橡胶管)、长滴管缝针、培养皿、台氏液、肾上腺素(1 : 10000)、乙酰胆碱(1 : 100000)、0.5mg/m 1 阿托品、0.01%磷酸组织胺、Imol/LNaOH、 lmol/LHCI、1%BaC12。
1%CaC12、心得安、阿托品、自己准备可影响消化的药物[方法与步骤]1.恒温平滑肌槽的准备 首先注水于水浴槽,浸漫度务必超过2支加热管然后在药 液管及预液管加适量台氏液,二通开关是用于接通预液管和药液管之间的台氏液,使预液管 预温的台氏液通向药液管恒温仪上的加温旋钮置于所需的温度约40°C(此温度是水浴槽 中加热管旁的水温,与药液管内的温度相差2〜3C),为了药液管内的温度得到准确控制, 须采用外加温度计调整最后打开供氧开关,即可产生空气气泡供氧,微调旋钮调节使气泡 一个接一个不断涌出,不能过快以免液面振动而影响记录肌槽的右侧面有与预液管、药液 管相通的出液管,用弹簧夹控制出液量2. 水浴里的水恒温38C,营养管内充满台氏液要不断供应空气或O2,通过可调节 供气旋钮控制气流速度,使气泡一个一个地进入台氏液中3.用铁锤击兔或大白鼠的头部,昏迷后,立即剖开腹腔,取出十二指肠至结肠间的肠 段,剪成约3—4cm小段,放入室温台氏液内轻轻冲洗,以除去肠的内容物边洗边通入空 气或O2,把肠段夹入另一盛有新鲜台氏液的培养皿内,继续通气备用4. 将肌肉张力换能器(10g)固定于铁架台上,张力换能器输入端与系统的第1通道中 相连,进入计算机生物信号采集处理系统,选择“新建实验”中“张力”模块的生理特性实 验项目并对控制面板参数进行设置。
5. 营养管内的溶液保持37 C,然后取出一小段肠,用缝针将肠的一端穿线结扎(只结 扎半边肠腔)肠的一端结扎线系于带夹的固定支架底端S形小钩上,将支架放入营养管内 并固定于管边缘肠的另一端则连于张力换能器的应力臂上使肠段完全浸浴在台氏液中, 并立即通气让肠段稳定20min,便可以描记其活动曲线6.实验项目(1) 观察、记录38C台氏液中的肠段节律性收缩曲线2) 观察、记录25C台氏液中的肠段节律性收缩曲线3) 待中央标本槽内的台氏液的温度稳定在38C后,加1:10000肾上腺素1〜2滴于中央标本槽中,观察肠段收缩曲线的改变在观察到明显的作用后,用预先准备好的新鲜38°C 台氏液冲洗三次4) 待肠段活动恢复正常后,再加1:10000乙酰胆碱1〜2滴于中央标本槽中,观察肠段 收缩曲线的改变作用出现后同上法冲洗肠段5) 向中央标本槽内加入1 mol・L-1NaOH溶液1〜2滴,观察肠段收缩曲线的改变作 用出现后同上法冲洗肠段6) 向中央标本槽内加入1 mol・L-1HC1溶液1〜2滴,观察肠段收缩曲线的改变待作 用出现后同上法冲洗肠段7) 向中央标本槽内加入1%CaC12溶液2〜3滴或1%BaC12 2—3滴,观察肠段收缩曲线 的改变。
8) 0.01%磷酸组织胺1—2滴,观察肠段收缩曲线的改变待作用出现后同上法冲洗肠 段9) 参照以上方法,这里可以加入自己设计提出的药物,观察肠段收缩曲线的改变10) 在换上新鲜台氏液,肠段恢复节律收缩的基础上,加入乙酰胆碱3滴,使引起明显 效应,再加入0.5mg/m 1阿托品3—4滴,观察加入阿托品后肠段运动的变化进行这项试 验后,需要多次冲洗,肠段才慢慢恢复活动[实验结果]剪贴实验记录曲线,并做好标记、注释分析各种因素对小肠运动的影响,并简要说明 其机制[注意事项]1. 每次加药前,必须在预液管内准备好更换用的38 C台氏液2. 药液管内台氏液的量必需没过肠段,并保持药液管恒温为38 C,以免影响肠平滑肌 的收缩功能以及对药物的反应不稳定3. 各药液加入的量为参考数据,效果不明显可补加,但不可一次过多,以免引起不可 逆反应4. 通气管的气泡逸出速度不可太快,以单个气泡陆续出现为宜否则会影响肠段运动 的曲线记录5. 每项实验效果明显后,立即更换新鲜台氏液,一般应冲洗2—3次,待肠段恢复正常 活动后再进行下一项目。