细心整理大肠杆菌保存和造就1菌种保存菌种保存通常接受甘油低温保存法1.1根本原理：在-70℃或液氮中冻存，细菌内酶活性均己停顿，即代谢处于完全停顿状态，故可以长期保存在0℃—-70℃温度范围内，水晶呈针状，极易招致细菌紧要损伤用电镜视察，可见细菌核膜上有大量针尖样小孔因此，为了幸免0℃—-70℃冰晶形成和细菌膜两侧离子平衡破坏，须要加爱惜剂甘油可降低冰点，在缓慢冻结条件下，能使细菌内水分在冻结前透出细菌外贮存在-70℃以下低温中能削减冰晶形成，甘油对细菌无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细菌1.2运用浓度范围为15%-50%，一般常用30%在保存瓶中按1：1参与60%甘油和菌液，混匀后液氮速冻，然后放入-70度超低温冰箱贮存2菌种复苏 复苏菌种时，用接种环或牙签挑取少许冻结菌种到平皿上，37℃造就8-12小时即可甘油菌从冰箱取出访用时应置于低温或 0℃冰浴中，用完尽快放回，接种时挑取外表已溶化局部即可，不行全溶，因反复冻融会导致细胞壁裂开切记：接种过程中不得使保存瓶中菌液溶化3大肠杆菌造就3.1造就基配制：造就基从形态上分为液体与固体造就基依据有无抗生素和其他选择性药物分为平凡与选择造就基，常用LB造就基。
3.1.1 LB〔Luria-Bertain)液体造就基配制 蛋白胨 1.0% 酵母提取物 0.5% 氯化钠 1.0%称重后搅拌使之完全溶解，用5M NaOH调pH至7.0，高压灭菌20min含琼脂固体造就基配制〔1〕平凡造就基:固体造就基是在液体造就基中加 1.5%琼脂制成，先配液体造就基，然后参与 1.5%琼脂，高压灭菌20min，取出后再无菌状态下铺平板〔2〕选择性造就基:将消毒好固体造就基置室温下冷却50℃时加抗生素，摇匀后倒入灭菌皿中厚度2-3mm, 室温固化 (抗生素用三蒸水溶解后，用无菌滤头过滤到无菌瓶中, 氨苄青霉素终浓度 50μl/ml)然后4℃保存备用3.2 液体细菌造就小量造就:(1) 取灭菌 16 或 18mm 口径造就管，加 3-5mlLB 造就基，再加 50mg/ml 氨苄青霉素 3-5ul〔宿主菌不加抗生素〕(2) 无菌牙签挑取单菌落，送入造就液中，或取菌液 5-10ul，转入造就液中，封好管口(3) 37℃摇床造就 100-200r/min 至生长饱和，约 6-12 小时大量造就: 取500ml 造就瓶内装造就基 100-200ml，及相应抗生素。
以 0.5-1%浓度接种菌液，37 度摇床造就100-200r/min至OD值0.6-0.83.3 固体细菌造就: 用于单一菌落选择，转化后抗性菌落筛选方法：接受划痕接种法用接种环从菌种中沾取少量菌液，划线。