蛋白质浓度的测定一．实验原理 考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性考马斯亮蓝 G250 的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm当他与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色, 其最大吸收峰改变为595nm考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋 白质定量测定的高敏感性在一定范围内，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋 白质含量呈线性关系故可用于蛋白质浓度的测定二．实验设备与试剂 设备：普通离心机， 721 型分光光度计 试剂：标准蛋白液（100ug/ml）三．实验材料新鲜绿豆芽四．实验内容1. 标准曲线的制备取9 支干净的试管，按表进行编号并加入试剂试剂1 （空白）23456789标准蛋白液/mL00.10.20.30.40.50.60.81.00.9%Nacl/mL1.00.90.80.70.60.50.40.20考马斯亮蓝染液/mL4.04.04.04.04.04.04.04.04.0蛋白质含量/（ug/mL）0102030405060801002. 样品蛋白的测定（ 1 ） 样品蛋白液制备准 确称取 2g 新鲜绿豆芽胚轴的 部分， 研磨成匀浆， 离心分离（4000r/min,10min）。
取上清液用 0.9%nacl 定容到 10ml 2） 含量测定另取两只干净的试管，加入样品液0.1ml，0.9mlnacl和考马斯亮蓝染液4.0ml, 混匀室温静置3min，与波长595nm处比色，读取吸光度五．实验结果1. 标准曲线结果如表所示，并以吸光度为纵坐标，个标准液含量为横坐标做标准曲线试管号1234567899蛋白质含量010203040506080100A5950.0000.0690.0890.2260.3390.4000.4700.5700.7302. 样品蛋白含量的测定样品蛋白的比色结果如表，根据直线方程求出每支试管中蛋白质含量试管号1011A5950.1860.179蛋白质含量25.1524.17根据公式求出样品绿豆芽蛋白质含量样品蛋白的体积 蛋白质含量（ug/g鲜重）= 测定时取样的体积称取样品的重量 六．结果与讨论结果：绿豆芽蛋白质含量=1233.0ug/g讨论：1. 试液为混合均与就取样2. 量取溶液时读数有误差3. 读取 A 值时有读数误差4. 比色杯中的误差。