44文件编号：LAB－OP－MY020第 页，共 页 版本：A/0生效日期：2008-02-01XXXXXX 医院检验科免疫室分析项目作业指导书 Elecsys E 170/E 411乙白介素6(IL6)1. 分析原理采用竞争法原理，整个过程18分钟完成 第1 步：35ml 标本与生物素化的抗雌二醇抗体混匀，形成复合物，其数量取决于标本中待测物的浓度 第2 步：加入链霉亲和素包被的微粒和钌（Ru）标记的雌二醇衍生物游离的、未结合生物素化抗体即与此衍生物结合，并且通过生物素、链酶亲和素之间的球上让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上 第3 步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定检测结果由机器自动从标准曲线上查出此曲线由仪器通过2 点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得2：标本采集和准备：必须选择以下的标本进行测定血清：使用标准取样试管或含分离胶的试管采集血浆：肝素、EDTA-K3 、枸橼酸钠或氟化钠/草酸钾抗凝均可标本在2－8 度可稳定2 天，-20 度可稳定6 个月。
只能冻融一次含沉淀的标本使用前需离心标本和质控品禁用叠氮钠防腐标本、定标液和质控品在测定前的温度应与室温平衡；放入仪器后应在2 小时内测定以避免蒸发的影响3：试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂试剂：M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1 瓶，6.5ml 链霉亲和素包被的微粒浓度0.72mg/ml，生物素结合能力：470ng 生物素/mg 粒子含防腐剂R1：生物素化的白介素6抗体（灰盖），1 瓶，9ml 生物素化的白介素6抗体浓度0.9ug/ml 、磷酸盐缓冲液95mmol/l，pH7.3含防腐剂R2：Ru(bpy)3 2+ 标记的白介素6抗体（黑盖），1 瓶，8ml Ru(bpy)3 2+ 标记的白介素6抗体浓度2.75ng/ml；磷酸盐 缓冲液95mmol/l，pH7.3 含防腐剂校准品： 每批白介素6试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息应用CalSet 定标液定标质控品： Elecsys白介素6质控品1 和2 以及其它合适的质控品 各浓度区域的质控至少每24 小时或每一次定标后测定一次质控间隔期应适用于各 实验室的具体要求。
检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施其他所需材料： 货号：05109442 190，100 人份的Elecsys 白介素6试剂盒包含： M 链霉亲和素包被的微粒 R1 生物素化的白介素6抗体 R2 三联吡啶钌标记的白介素6抗体 需要的材料（未提供）： Elecsys 白介素6 定标液（CalSet II）货号05109469190 Elecsys白介素6质控品（PreciControl Universal）货号05109477190, Elecsys 标本稀释液货号03028542 E601 或E411分析仪 E411 分析仪需要 Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号11662988 Elecsys 测量池清洗液（CleanCell）货号11662970 Elecsys 添加剂液（SysWash）货号11930346 Elecsys 系统清洗液支架（Adapter for SysClean)）货号11933159 Elecsys 1010 反应杯（Assay Cup)货号11706829 Elecsys 2010 反应杯（Assay Cup)货号11706802 Elecsys 2010 吸样头（Assay Tip)货号11706799 E601 分析仪需要 Elecsys 系统缓冲液（ProCell M）货号12135019 Elecsys 测量池清洗液（CleanCell M）货号12135027 Elecsys 系统缓冲液/测量池清洗液预热杯（PC/CC-Cup）货号03023141 探针冲洗液，12x70ml,用于最终保养及完成试剂吸样后冲洗，货号03005712 前清洗液，5x600ml Elecsys 反应杯/吸样头盒(AssayCups/AssayTips Combimagazine M) 货号12102137 Elecsys 废物盒(wasteliner)货号03023150 Elecsys 系统清洗液支架(SysClean Adapter M))货号03027651 各种分析仪均适用的材料 Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号11298500 Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号11662988 Elecsys测量池清洗液（CleanCell）货号11662970 Elecsys 添加剂液（SysWash）货号11930346 Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号112985002. 仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Cobas E601/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：每批白介素6试剂盒必须用新鲜试剂和白介素6 Cal 1,Cal 2定标一次。
另外，以下情况需要再次定标： 一个月（同一批号试剂） 7天（放置仪器上的同一试剂盒）各种分析仪均适用的情况：根据要求进行标定：如质控结果超出范围时；根据规定进行多次标定3. 操作步骤（以Cobas E601为例）5.1 校准操作步骤：在编缉各项目的参数时，已经在Application—Calib菜单中定义好了定标类型和几点定标因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可3.2进入Calibration—Status菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK键）或两点定标（TWO POINT键）、跨距定标（SPAN键）、多点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在Calibration—Calibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始定标 在Calibration—Status菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线5.2 样本检测程序： 单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。
批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本4. 质量控制用白介素6质控品1和2质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次质控间隔期应适用于各实验室的具体要求检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施5. 计算方法 对每一个标本，仪器会自动计算白介素6含量，单位是pg/ml 6. 参考范围< 7 pg/ml7. 分析性能1.5~5000 pg/ml结果若低于检测限，仪器将报告结果< 1.5 pg/ml结果若高于测定范围，仪器将报告结果>5000 pg/ml8. 干扰因素该方法不受黄疸（胆红素<25mg/dl）、溶血（血红蛋白< 0.621 mmol/L or < 1.0 g/dL),）、脂血（脂质<1500mg/dl）和生物素<30ng/ml 等干扰。
9. 结果解释高于检测范围的标本可用雌二醇/孕酮稀释液稀释建议1:5 稀释稀释后的标本雌二醇含量必须高于500pg/ml 或1835pmol/l 如用手工稀释，结果应乘上稀释倍数如果是机器自动稀释，机器会自动计算结果10. 临床意义白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6)是由多种细胞分泌的细胞因子，包括T淋巴细胞、B淋巴细胞、成纤维细胞及内皮细胞等；IL-6对机体的免疫系统、造血系统、消化系统、神经内分泌系统等均有广泛的生物学功能作为细胞因子，IL-6虽具有重要的生物学功能，但因其天然状态下的含量甚微，其临床与基础的应用和研究受到极大的限制因此，利用基因重组技术和基因工程方法制备具有高纯度、高比活的重组人白细胞介素-6，无论对其生物学特性的深入研究，还是作为一种多肽类药物在临床上应用均具有重要意义 在确定发酵的培基、pH值及其它发酵条件下，连续进行了3批发酵（30L）培养，菌体收获量湿重为26.4g/L发酵液，SDS-PAGE电泳分析表明：IL-6的表达量为40.3%，每升发酵液中约含有10g重组蛋白采用SP-FF强离子交换柱所获得的重组IL-6蛋白的纯度为98.5%，比活为5x10*8U/mg，回收率为50%，经分子量测定、氨基酸序列测定、Western Blot及生物学活性等结果分析，证实所获得的纯品为重组IL-6蛋白。
鉴于IL-6的重要生物学功能，国外一些公司已将其作为升血小板药物进行开发，目前已进入临床II期多年，但一直未能通过FDA的认可，可能的原因是IL-6的半衰期非常短，很快从循环中被清除，在循环中很难维持有效浓度，因此，临床上常应用大剂量的IL-6蛋白，以期达到预期的疗效，但由此可引起3方面的副作用：1.重组IL-6本身的副作用；2.由于应用剂量的加大，产品的杂质相应增多，进而引起相应的副作用；3.大剂量重组IL-6的应用，严重破坏了机体的免疫平衡，而这种平衡很大程度上是依靠细胞因子网络来实现的，免疫网络一旦失衡将引起机体的免疫功能紊乱，产生相应的临床症状因此，延长重组IL-6蛋白的半衰期、降低重组IL-6的用量是目前迫切解决的问题 为了延长重组IL-6的半衰期及体内的生物利用度，此研究利用聚乙二醇（PEG）对重组IL-6蛋白进行了修饰，修饰后的重组IL-6蛋白经动物实验表明，其在血浆中可检查的时间由原来的3分钟延长到40小时，其促血小板作用显著高于未经修饰的IL-6蛋白13．参考文献编写： 审核： 批准：批准日期： 年 月 日。