实验七 枯草杆菌蛋白酶活力的测定学时数：4学时一、 目的：学习测定蛋白酶活力的方法，掌握 72型分光光度计的原理和使用方法二、 原理：酚试剂又名Folin试剂，是磷钨酸和磷钼酸的混合物， 它在碱性条件下极不稳定， 可被酚类化合物还原产生蓝色(钼蓝与钨蓝的混合物) 酪蛋白经蛋白酶作用后产生的酪氨酸可与酚试剂反应，所生成的蓝色化合物可用分光光度计法测定三、 器材：试管、吸管、漏斗、恒温水浴、 722型分光光度计等四、 试剂：标准酪氨酸溶液五、步骤：(100ug/mL),碳酸钠溶液(0.55mol/L ),酚试剂，酶液，10%的三氯乙酸1绘制标准曲线取试管7支，编号，按下表加入试剂 单位：(m L)编号1234567标准酪氨酸溶液(100ug/mL)00.10.20.30.40.50.6蒸馏水10.90.80.70.60.50.4碳酸钠溶液(0.55 mol/L )5555555酚试剂1111111摇匀，置30C恒温水溶中显色 15min用分光光度计在 A680min 处测定680nm的光吸引值以光吸引值为纵坐标，以酪氨酸的浓度为横坐标，绘制标准曲线2、酶活力测定取酶液1 mL,在30C预热5min，吸取0.5%酪蛋白溶液2 mL置于试管中，在 30C水浴中预 热5min后加入的酶液0.5mL，立即计时，反应8min后，由水浴取出，立即加入 10%三氯乙 酸溶液3mL放置15min,用滤纸过滤。
同时另作一对照管，即取酶液0.5mL先加入3mL10%的三氯乙酸溶液摇匀，然后再加入0.5% 酪蛋白溶液2 mL, 30C保温8min，放置15min，过滤取3支试管，编号，分别加入样品滤液、对照滤液和水各 1 mL,然后各加入0.55 mol/L的碳酸钠溶5 mL混匀后再各加入酚试剂 1 mL，立即混匀，在30C显色15分钟以加入的一 管作空白，在680nm处测对照及样品的 OD值NstCO溶液酚试剂30 C放置15mi nA>8011ml----5ml1ml2--1ml--5ml1ml3----1ml5ml1ml3 、计算酶活1 克枯草杆菌蛋白酶在 30C, pH7.5的条件下所具有的活力单位为:（A样-A 对）.KV/t 'N六、结果：。