米曲霉种曲培养条件的优化,XXX 生物工程XXX班 指导老师：XXX（讲师）,一，引言,1.本课题研究的背景,米曲霉具有丰富的酶系,包括蛋白酶，淀粉酶，纤维素酶，酯酶，果胶酶等多种酶，且其稳定性高，被广泛的应用于食品、饲料、酿造等发酵工业 沪酿3042米曲霉是一个优良的菌株，不仅蛋白酶活力高而且酶系较全，从20世纪60年代末期开始，在酱油生产中广泛应用，至今已40多年，无论是传统工艺生产还是速酿工艺生产，都仍十分受欢迎2.本课题研究的意义,酱油酿造过程主要依赖于米曲霉所产生的丰富的蛋白酶、淀粉酶、酯酶等多种酶系,分解原料中的各种成分 生产过程中米曲霉主要作用是制曲和发酵，制曲的目的是使米曲霉在曲料上充分生长发育，并大量产生和积蓄所需要的酶其发酵机理是一个错综复杂的物化学反应过程，其主要是淀粉与蛋白质的分解与合成代谢过程，通过温度和时间,让蛋白酶分解蛋白质为氨基酸,淀粉酶分解淀粉成葡萄糖在这样的一个经济快速发展的时代，人民生活水平的提高,对酱油质量要求越来越高,需求量越来越大,这与蛋白质资源缺乏的矛盾日益突出啤酒生产过程中产生了大量的废料，这些物质大部分没有得到较好的利用，大多停留在原始粗加工上，创利甚微，不但浪费资源，甚至会污染环境。
对啤酒的废料的成分进行分析可知，废啤酒糟中蛋白质含量为45%~50%，还有丰富的B族维生素、有机磷、有机钙、铁等物质因此，从理论上来说啤酒糟完全可以替代全部或部分豆粕作为酿造酱油的原料本课题在指导老师的指导下展开研究，主要切入点是针对酱油酿造菌株-米曲霉蛋白酶活力低的问题,为了提高原料的利用率, 降低生产成本等问题，将研究菌种在不同培养条件下的生长形状，生长速度及其产酶活力情况来选育优良的米曲霉菌种二，实验内容,（1）通过米曲霉的活化，观察菌种的菌丝体形状，颜色等来得到纯化米曲霉； （2）单因子研究影响因素，主要包括不同的pH、温度、培养时间条件下对种曲的蛋白酶活力分布的影响； （3）通过米曲霉的优化证明啤酒下脚料完全有可能全部或部分替代豆粕进行酱油酿造三，实验方法,1.米曲霉的分离纯化 （1）米曲霉的分离纯化（平皿培养） 30℃保温箱内培养2d，选取菌落半径比值大，菌落生长快，孢子多的单一菌落 （2）米曲霉的斜面培养 在恒温箱30℃培养2—3d，直至长满茂盛的黄绿色孢子 （3）米曲霉的二次扩大培养（三角瓶培养） 在30℃保温箱内培养3d左右，瓶内曲料上布满白斑及菌丝，孢子充分长满曲料,2.为确定最佳条件在各条件下测定蛋白水解酶 测定方法：福林-酚试剂法,标准曲线公式：y=0.1005x-0.1237,,2.基本实验方案,,(1).米曲霉在不同曲料pH条件下的酶活力 考虑到米曲霉的生长情况，选择范围为pH为4~11。
配置pH 4.0~11.0八类发酵培养基 (2).培养温度对米曲霉产蛋白酶活力的影响 在自然pH下，于温度分别于37℃、40℃、43℃、46℃，在最佳的时间，测定蛋白酶活力 (3).培养时间对米曲霉蛋白酶活力的影响 在上述培养条件下，取40h，44h，48h三个时间点测定米曲霉的蛋白酶活力，确定最佳培养时间5).米曲霉的替代原料培养 原料配比：（参照组）麸皮80% 面粉20% 水70%,1.在不同初始pH下试验数据与讨论,,四，实验结果与讨论,2.不同温度下进行试验的数据与讨论,由图可看出，蛋白酶酶活力与其所处的温度有密切相关，米曲霉产蛋白酶的最适温度为32℃3.不同培养时间条件下进行试验的数据与讨论,从图可得，米曲霉的蛋白酶的活力和培养时间有密切的关系，在40~44小时之间，蛋白酶活力成直线上升，44小时之后，酶活力下降，在44小时达到最高峰，所以最佳培养时间为44小时4.替代原料的米曲霉酶活试验数据与讨论,从米曲霉的生长表观指标来看，除全部替代组菌种生长明显较差外，其余各实验组菌体均生长良好 从表数据结果可看出，啤酒糟：麸皮=5:5配比组酶活最高5.酱油醅理化指标测定数据,,五，小结,米曲霉菌种是酿造酱油品质优劣的关键，本文通过一系列的研究表明米曲霉的生命活动与其周围的环境条件有密切的相关性。
只有在适宜的外界环境下，才能进行良好的生长繁殖，产生人类所需的各种酶1.结论,本课题的实验研究表明米曲霉产蛋白酶的最佳pH为7，最佳温度32℃，最佳培养时间为48小时，此外，在替代原料实验中，运用对照组和实验组的数据对照，可以看出，啤酒糟：麸皮=5:5与传统工艺培养的酶活基本一致，最后根据酱油醅的理化指标分析，表明了用啤酒废料替代原料的实践可行性2.本试验创新之处,本课题在指导老师带领下，在不影响质量的前提下，考虑价格，研究米曲霉培养条件的同时结合废啤酒糟替代原料为研究方向，用废啤酒糟来替代原料，为生产节约成本，创造更大的经济效益实验表明其成品酱油基本符合国家二级酱油标准，若将这一方法成功推广，将,对部分农副产品延伸产业链，降低酱油酿造成本、提高相关企业以及环境保护具有积极的意义End ! !,谢谢 ！! !,,。