1 实验一脑垂体的摘取与保存一、实验目的1．掌握各种常见催产剂物理特性2．掌握脑垂体的摘取方法二、实验材料1．实验材料：各种催产剂、鲤2．实验器材：解剖刀、解剖剪、镊子等3．实验试剂：无水酒精一）知识回顾常见催产剂种类的介绍1．鱼类脑垂体（PG ）脑垂体分泌促性腺激素它直接作用于鱼类性腺，具有诱导鱼类排卵的作用；同时也具有促进性腺发育、促进雌雄鱼性激素产生等作用新鲜的脑垂体，经过丙酮或乙醇中脱水脱脂、阴干，放在干燥器中密封保存使用时，按每千克鱼体3~4mg剂量注入亲鱼体2．绒毛膜促性腺激素（HCG ）HCG 是从怀孕2~4 个月的孕妇尿中提取的一种促性腺激素，它直接作用于鱼类性腺，具有诱导鱼类排卵的作用；同时也具有促进性腺发育、促进雌雄鱼性激素产生等作用HCG为白色或黄色粉末，一般分装在安培瓶中，易溶于水，遇热和受潮易变质应避光、低温、干燥保存它以国际单位（ IU）计量 HCG 适用于鲢、鳙的催产，使用剂量不宜太大，一般每千克亲鱼用800~1 000 IU ，否则亲鱼容易产生抗体，影响以后的催产效果，对亲鱼本身的生长也有一定的危害3．促黄体素释放激素类似物（LRH-A）该激素是人工合成的化学制剂，它是一种高效催产剂。
它作用于亲鱼的脑垂体，由脑垂体根据自身的发育情况合成和释放适量的促性腺激素来作用于性腺其对草鱼催产效果较明显，用量为每千克亲鱼10~40 μgLRH-A2对促性腺激素释放的活性比LRH-A高 10 多倍；LRH-A3是一种比LRH-A效果更好的促排卵素，尤其适用子鲢、 鳙亲鱼的催产， 而且其使用剂量可为LRH-A的 1/10 4．高效催产合剂由利血平（ RES ）或地欧酮（DOM ）与 LRH-A组成，能显著增强LRH-A刺激鱼类 PG促性腺激素的分泌5．A、B型混合催产剂A型催产剂是由HCG 和适量的 LRH-A2混合而成，主要用于催产鲢；B型催产剂是由HCG 和适量 LRH-A3组成，用于催产鳙效果较好二）脑垂体的摘取与保存方法1、脑垂体的摘取的时间用于取脑垂体的鱼通常是达到性成熟的新鲜鲤、鲫摘取的时间最好是在冬季和春季鲤鱼产卵之前，此时垂体中促性腺激素的含量最高位置：间脑下面的碟骨鞍里2、脑垂体的摘取方法方法一：用刀剖开鱼两眼上缘的颅顶骨，除去脂肪，露出鱼脑，在其前下方可见一小白点即为脑垂体，用镊子将垂体轻轻挑出，垂体应完好无损方法二：从鳃盖的侧面摘取，即先将鱼的鳃盖掀起，用自制摘取刀（将一段8 号铁丝一端锤扁略弯曲成铲形）剥去鳃后，插入蝶骨缝内，将蝶骨挑起，便可露出乳白色的垂体，用摘取刀轻轻挑出完整无损的垂体。
此法取垂体操作容易，速度快，特别是不会损伤鱼体外形，不至影响其商品价值，故生产单位多用此法3、脑垂体的保存方法将摘取的垂体除去血污和脂肪等组织，放入体积为垂体20 倍的丙酮或无水酒精中，脱脂，脱水，浸泡8~12 h 后换一次丙酮，连续处理2~3 次将垂体取出，放在干净的白纸上，经20~30 min 晾干后立即装入干燥、清洁的小瓶中，用蜡封口存放在阴凉处2 也可在换过一次丙酮后，连同浸液一起密封保存，封存好的垂体可保存2~3 年四、作业实验报告五、思考题催产剂的催产原理如何实验二亲鱼雌雄的鉴别一、实验目的掌握通过亲鱼外部形态鉴别家鱼、鲤的雌雄二、实验材料家鱼、鲤的雌雄亲鱼三、实验内容与步骤鲤、家鱼雌雄鉴别的依据主要是从性腺快速发育期亲鱼的外观特征和副性征来判断如：在鱼类繁殖季节，鉴别雌雄最简单的方法是观察亲鱼的体形，成熟较好的雌鱼腹部明显比雄鱼膨大；雄鱼腹部小，可挤出白色的精液还有“追星”非生殖季节主要依据胸鳍的形状和长短来鉴别雌雄，一般而言， 雄鱼的胸鳍狭长，雌鱼胸鳍相对较短而且呈扇形雌雄个体大小、个体外观差异雄鱼鳃盖和胸鳍上的珠星鲤雄鱼特征：1、生殖季节：体狭长，头较大，腹部狭小而硬，成熟后能挤出精液，胸、腹鳍和鳃盖有“追星”，手摸有粗糙感，生殖孔略凹下。
2、非生殖季节：体狭长，头较大，无“追星”，肛门略向内陷，肛门前区无平行褶皱雌鱼特征：1、生殖季节：背高体宽，头较小，腹部膨大而柔软，胸鳍没有或很少有“追星”，肛门和生殖孔略红肿、凸出2、非生殖季节：背高体宽，头较小，腹部大而柔软，无“追星”，肛门略为凸出，生殖孔周围有辐射褶，肛门前区有平行纵褶鲢雄鱼特征：3 1、胸鳍前面几根鳍条的内侧，特别在第一鳍条上明显地生有一排骨质的细小栉齿，用手顺鳍条抚摸，有粗糙刺手感觉，这些栉齿生长后不会消失2、腹部较小，性成熟时轻压腹部有乳白色精液从生殖孔流出雌鱼特征：1、胸鳍光滑，但个别鱼的胸鳍中下部内侧有些栉齿2、性成熟时，腹部大而柔软，泄殖孔稍突出，有时微带红润鳙雄鱼特征：1、胸鳍在前面几根鳍条上缘各生有向后倾斜的刀刃状的突起，用手横向抚摸有割手感觉2、腹部较小，性成熟时轻压腹部有乳白色精液从生殖孔流出雌鱼特征：1、胸鳍光滑，无割手感觉2、性成熟时，腹部膨大、柔软，泄殖孔常稍突出，有时稍带红润草鱼雄鱼特征：1、胸鳍鳍条粗厚，特别是第I~II鳍条较长，自然张开呈尖刀形，胸鳍较长，贴近鱼体时可覆盖7 个以上的大鳞片2、在生殖季节性腺发育良好时，胸鳍内侧及鳃盖上出现追星，用手抚摸有粗糙感觉性成熟时轻压腹部有精液从生殖孔流出。
雌鱼特征：1、胸鳍鳍条较薄，其中第I~IV 鳍条较长，自然张开略呈扇形，胸鳍较短，贴近鱼体时只覆盖6 个大鳞片2、一般无追星，或在胸鳍上有少量追星3、性成熟时，胸鳍比雄鱼膨大而柔软，但比鲢鳙雌鱼的胸鳍稍小青鱼雄鱼特征：基本同草鱼，在生殖季节性腺发育良好时除胸鳍内侧及鳃盖上出现追星外，头部也明显出现追星雌鱼特征：胸鳍光滑，无追星四、作业实验报告五、思考题亲鱼雌雄副性征形成的机理实验三鱼类性腺成熟度划分及繁殖力测定一 实验目的：1. 认识鱼类性腺成熟分期的特征和标准判断掌握2. 掌握鱼类个体生殖力的测定与计算方法3. 掌握精子活力的测定方法二 实验材料和用品1. 实验材料：鲤鱼、鲫鱼等常见鱼类2. 实验用品：解剖盘，解剖刀，解剖剪，尖头摄，药用天平，解剖镜，显微镜，目微尺，培养皿，4% 福尔马林溶液三 实验内容：1. 根据性腺大小、颜色、血管分布状况、卵细胞性状等标准，目测性腺成熟度的分期等级I 期：性腺呈透明细线状，紧贴于鳔下两侧的体腔膜上，肉眼无法区别雌雄Ⅱ期：卵巢为扁带状，淡红色，表面有分枝状的细长血管，卵相互紧依，肉跟看不清卵粒，用放放大镜可见卵粒，4 精巢呈线状或细带状，半透明或不透明，血管不显著。
Ⅲ期：卵巢椭圆形，黄橙色，前部宽大，表表有血管分布，肉跟可见卵粒；邻粒开始沉积卵黄，精巢圆杆状，粉红色，压挤精巢或剪开精巢无精液流出Ⅳ期：卵巢增大，橘黄色，占据大部腹腔，卵巢膜具弹性，血管发达，卵粒大而饱满，充满卵黄到Ⅳ期末，肉眼可见卵核精巢呈乳白色，早期阶段无精液流出；晚期能挤出少量白色精液V期：卵粒流动；提起鱼钵；卵屈生殖孔滞出提起雄鱼或轻压腹部，糟液从生殖孔涌出Ⅵ期：当年生殖过的性腺，卵巢体积大大缩小，松软，表面充血，外观呈紫红色，残留少量卵精巢体积显著缩小，呈淡红色2. 卵的计数与繁殖力的计算个体生殖力： 一尾成熟♀鱼， 在一个生殖季节中卵巢所含成熟卵的总数（即产卵前夕所含卵总数）包括第 3、第 4 时相卵母细胞分批产卵鱼类要在第一次产卵前计数解剖取出整个卵巢称重，取出0.3~0.5克样品，用 5% 福尔马林固定，计数或者取出整个卵巢，用5% 福尔马林固定， 80% 乙醇脱水，称重，取样计数测量鱼的体长（L/cm) 、体重 (W/g) 、卵巢重 (Q/g) 性成熟系数G =100×Q/W 肥满度 K = 100 ×W/L3绝对生殖力F =n 克样品卵粒数×Q/n（粒）相对生殖力 :Fl =F / L Fw =F / W 3. 精子活力的测定用牙签取一滴精液载玻片上，加水激活精子，显微镜下观察精子运动情况并计时（从精子遇水被激活开始计时一直到 90% 精子停止运动） 。
计时三次求平均值比较不同鱼类精子活力的差异四、实验报告1 计算鲫鱼的性成熟系数、肥满度，绝对生殖力与相对生殖力；2 分析 F 、Fl 、Fw 与 L 、W 、Q 、G 、K之间的相关关系；3. 鱼类精子活力的比较分析实验四催产剂的注射一、实验目的1、掌握催产剂用量和次数的应用技巧2、掌握催产剂注射的操作方法二、实验材料1、实验材料：亲鱼2、实验器材：注射器、烧杯三、实验内容与步骤（一）催产剂种类、注射次数、催产剂量的确定应根据亲鱼性腺成熟情况、催产时间、催产剂的种类和质量等具体情况灵活掌握一般在催产的早期和晚期，剂量可适当高些；催产中期可适当低些在温度较低或亲鱼成熟较差时，催产剂的剂量可适当偏高，反之可适当降低注射催产剂的次数应根据亲鱼的种类、催产剂的种类、催产季节及亲鱼的成熟程度等来决定生产上通常采用一次注射或二次注射的方法催产剂有单一使用的，也有混合使用的注射的剂量和混合比例以经济而有效地达到促使亲鱼顺利产卵和排精，又不损伤亲鱼为标准二）注射方法注射催产剂时，一人拿稳鱼夹，使鱼侧卧并露出注射部位，另一人进行注射注射针头一般以7 号为宜，注射器可用 5m1或 l0ml 钢筒亲鱼注射部位有以下3 种：1、胸腔注射：即在胸鳍基部注射，注射时把亲鱼上半部托出水面，在胸鳍基部无鳞的凹入部，将针头朝向前方5 与体轴成45-60 度角度刺人，刺入鱼体的深度为1.5-2.0cm ， （针头插人不宜过深，防止刺伤鱼的心脏），徐徐注人催产药物。
2、肌肉注射：注射部位在背鳍下方，侧线以上的鱼体两侧肌肉，注射时用针挑起鳞片，顺着鳞片向前刺人肌肉1-2cm 深处进行注射三）注射时间催产时，最好控制亲鱼在早晨或上午产卵一般采用一次注射法时，应选择在下午4：00~6：00 注射，这样次日早晨能顺利产卵；若采取二次注射法，则第一针在上午7：00~9：00 注射，第二针在下午6：00~8： 00 注射，亲鱼次日早晨产卵四）效应时间亲鱼注射完最后一针催产剂后到开始发情所需的时间叫效应时间四、作业实验报告五、思考题不同注射方法催产结果的比较6 实验五：亲鱼的催产与繁殖一、实验目的掌握鱼类催产的基本方法和常见养殖鱼类繁殖过程二、实验材料与用品实验材料：鲤鱼、鲫鱼、罗非鱼实验用品：毛巾、取卵器、烧杯、量筒、注射器、注射水、鱼类催产药物、酒精三、实验方法1. 检查亲鱼性腺发育的成熟度把亲鱼腹部向上翻，用毛巾盖住亲鱼眼睛，肉眼检查雌性亲鱼的腹部膨胀情况，再用取卵器从雌性亲鱼的生殖孔插入腹部两侧取出一小点卵子放在酒精中检查如果卵子成圆形并用取卵器搅动后就散开，则卵子成熟度高如果用取卵器搅动后卵子不分开，则卵子成熟度不够雄鱼则用手指沿腹部两侧从胸部往肛门方向用力挤压，如果有白色精液流出且在水中能快速分散，则为成熟雄鱼。
如果没有精液流出或者流出极少，且在水中不易扩散，则雄鱼成熟度不足2. 挑选成熟的雌雄鱼进行催产通常雌雄鱼的比例为1：1.5 －2，把成熟的亲鱼运至产卵池的网箱中备产3. 催产剂的配置用注射水配置催产剂，药品包括绒毛膜促性腺激素（HCG ） 、促黄体素释放激素及类似物（LPH-A） 、脑垂体、地欧酮（ DOM ） 按照不同的品种和不同的成熟度配置催产剂4. 鲤鱼、鲫鱼催产剂种类及注射量（按每千克体重计算）：LRH-A10ug或者 HCG1400 －2000IU，每尾鱼0.5 －1 毫升5. 药剂注射通常在胸鳍基部无鳞片处注射，注射深度以不伤内脏为宜，一般为同边注射均采用一次注射，雄性亲鱼注射量为雌性亲鱼注射量的一般6. 水流冲击雌性亲鱼注射后要在产卵池里注水，使产卵池里的水流速每秒1－ 1.2 米自然受精和人工受精a. 自然受精：雌性亲鱼注射第二针后4 小时鱼类开始发情，注意观察，若发现雌雄鱼追逐比较激烈，且身体浮上水面并紧贴一起剧烈颤动，则开启集卵管的开关，让卵子留入孵化池b. 人工受精：在雌雄鱼追逐比较激烈，但身体没有浮出水面紧贴在一起之。