实验二培养基的配制和灭菌一、 实验目的1. 了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一般方 法和步骤2. 学习几种常用培养基的配制、分装和灭菌的操作方法.3. 进一步熟练掌握手提式高压蒸汽灭菌锅的使用方法二、 实验器材1.药品及试剂：可溶性淀粉，KNO3, K2HPO4-3H2O , MgSO4-7H2O, FeSO4-7H2O, Imol/LNaOH,琼脂，牛肉膏，蛋白腺，NaCl2•仪器及其它试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻棒、天平、药匙、高压 蒸汽灭菌锅、pH试纸(5.5-9.0)、棉花、牛皮纸、记号 笔、麻绳、纱布、干燥箱、培养皿、涂布棒、吸管(1ml)、 玻璃珠、PII试纸三、 实验内容1.分组配制高氏一号培养基300mlo配方：可溶性淀粉 20g NaCl O.5g KNO3 lgK2HPO4- 3H2O O.5g MgSO4- 7H2O 0.5gFeSO4-7H2O O.Olg 琼脂 15-25g水 1000ml pH 7.4-7.62•配制牛肉膏蛋白月东培养基配方：牛肉膏L5g蛋白腺5g NaCl 2.5g琼脂7.5g水500mlPH 7.4-7.63. 每组制备玻璃珠无菌水（45ml）三角瓶2个。
4. 每组制备无菌水试管（4. 5ml/管）10支5•每组包9cm培养皿24套，6套为一包6•每组包linl吸管5支，玻璃刮铲4个四、方法步骤（一）培养基的制备与分装1 •称量 按培养基配方比例依次准确地称取药品可溶性 淀粉先用少量热水溶化后再加入其他成份，补足所需水 分，混匀后加入琼脂2•熔化在沸水浴锅中加热熔化3. 调 pH 用 lmol/L NaOH 调 pH 至 7. 4-7. 64. 过滤趁热用多层纱布过滤（本实验勿需过滤）5•分装将溶化的固体培养基趁热加至漏斗上，装试管 时，注意管口不要沾上培养基液体分装装量不超过试 管的1/4,固体分装装量不超过试管的1/5,分装三角瓶 的量不超过三角瓶容积的一半，半固体分装装量为试管 的1/3,灭菌后垂直待凝6•加棉塞培养基分装完毕后，在试管口或三角瓶口塞上 棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并 保证有良好的通气性能，然后包扎一层牛皮纸试管应 先捆成一捆后再于棉塞外包扎牛皮纸，贴上标签，注明 培养基名称、日期、组别―）无菌水的制备7.用量筒量取45】nl水于带玻璃珠三角瓶中，塞上棉塞， 包扎牛皮纸8•用5ml吸管取4. 5ml水于试管中，塞上棉塞，包扎牛 皮纸。
三）器皿的准备9.培养皿的包装 每6套一包，用旧报纸包扎（或放在特 制铁皮圆筒里，加盖扣严）10•吸管的包装首先在吸管的上端塞上一小段棉花，用 长纸条包扎、打结11.玻璃涂布棒的包装方法同吸管的包装四）培养基、无菌水、器皿的灭菌12.将培养基、无菌水放入高压蒸汽灭菌锅内，1. 05kg/cm2 压力，121・3°C,20min湿热灭菌如因特殊情况不能及时 灭菌，则应放入冰箱内暂存13•灭菌完毕，将试管培养基冷至50°C左右，将试管棉塞搁在玻棒（或木棍）上，搁成斜面，搁置的斜面长度以 不超过试管总长度的一半为宜14.将灭菌的培养基放入37°C的温室中培养24〜48h,以 检查灭菌是否彻底15•器皿放入干热灭菌箱内，加热灭菌五、思考题1•培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌 后的培养基是无菌的？2•加压蒸汽灭菌的原理是什么？是否只要压力表上的指 针指到所需的压力时就能达到所需灭菌温度？为什么？3.干热灭菌应该注意哪些事项？4•管口、瓶口为什么要用棉塞？能否用木塞或棉皮塞代 替？为什么？。