果蔬中总糖及还原糖含量的测定一、 实验目的1、 掌握总糖和还原糖含量的测定方法2、 学习分光光度计的原理和操作方法3、了解;®酮法测定可溶性糖含量的原理二、 实验原理 总糖是指样品中的还原单糖及在本实验条件下能水解成还原单糖的蔗糖、 麦芽糖和可部分水解成葡萄糖的淀粉多糖为非还原糖，可用酸将没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖， 再利用还原糖的性质进行测定，这样就可分别求出总糖和还原糖的含量糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糖醛，生成的糖醛或羟甲基糖醛可与 蕙酮反 应生成蓝绿色糖醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比 糖类与蕙酮 反应生成的有色物质，在可见光区的吸收峰为630nm,可在此波长下 进行比色，故可用 丁糖的定量三、 实验器材1、 材料：梨2、 仪器:分光光度计、包温水浴锅、电子分析天平■、高速冷冻离心机、容量瓶（lOOmLX 2）、玻璃漏斗、量筒、研钵、锥形瓶、试管、移液管、 pH 试纸3、 试剂：蕙酮试剂：取2g蕙酮溶丁 lOOOmL体积分数为80%的硫酸中，当日配制使用标准葡萄糖溶液（O・1mg/mL）:称取lOOmg葡萄糖，溶丁蒸僻水并稀释至lOOOmL （可 加几滴甲苯作防腐剂）。
6mol/L HCl 溶液20% NaOH溶液：称取20g NaOH固体，溶丁蒸僻水并稀释至100mL四、 实验操作1、葡萄糖标准曲线的绘制：取 6 支大试管，从 O 5 分别编号，按下表加入各试剂试剂管号012345标准匍缶!糖溶液/ml00.10.20.30.40.5蒸僻水/ml1.00.90.80.70.60.5置冰水浴中5min蕙酮试剂/ml4.04.04.04.04.04.0煮沸10min，冷却后室温放置 lOmin，在620nm处比色A62Onm以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（mg/mL）为横坐标做图得标准曲线2、样品中还原糖的提取和测定称取1g梨，加蒸僻水约3mL,在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用 约12mL 蒸僻水冲洗研钵2〜3次，洗出液也转入三角烧瓶中丁 50C水浴中保 温约30min （使 还原糖浸出），取出置丁离心管内，5000r/min离心lOmin，冷却 后定容至100mL吸取ImL滤液置丁试管中，浸丁冰浴中冷却，再加入4mL B酮试剂，沸水浴中煮 沸lOmin，取出冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同测得的吸光度 值由标准曲线查 算出样品液的糖含量3、样品中总糖的提取、水解和测定称取lg梨，加蒸僻水水约3mL,在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约12mL 蒸僻水冲洗研钵2〜3次，洗出液也转入三角烧瓶中。
再向三角烧瓶中加入6mol/L盐酸 10mL，搅拌均匀后在沸水浴中水解 30min，冷却后用20%NaOH溶液中和至pH呈中性，取出置丁离心管内，5OOOr/min离心lOmin,然后用蒸 僻水定容至 lOOmL吸取1mL滤液置丁试管中，浸丁冰浴中冷却，再加入4mL B酮试剂，沸水浴中煮 沸lOmin，取出冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同测得的吸光度 值由标准曲线查 算出样品液的糖含量六、计算按照下列公式分别计算果蔬中还原糖和总糖的质量分数（w）CIVIW （还原糖）=——XlOO%m、 C2V2W （总糖）=---- KO・9Xl00%m（乘O・9是为了从测定出的总糖水解成的单糖中扣除水解时所消耗的水量 其中： W （还原糖）：还原糖质量分数（%）W （总糖）：总糖质量分数（%）Cl:还原糖的质量浓度（m g/mL）C2:水解后还原糖的质量浓度（m g/mL）Vl:样品中还原糖提取液的体积（mL）V2:样品中总糖提取液的体积（mL） m：样品质量五、实验思考1、 应用蕙酮法测得的可溶性糖包括哪些？2、 干扰可溶性糖测定的主要因素有哪些？怎样避免？3 、了解可溶性糖含量在植物生理研究和实际上有什么意义？。