大黄中大黄素的提取、分离和鉴定制药1班 戚康如2008302201116一、 实验目的1、 熟悉并掌握大黄中大黄素的提取、分离和鉴定等实验操作2、 掌握醌类化合物利用碱梯度萃取法进行分离的原理二、 实验原理将大黄粉经过酸水解后，其含有酸性的醌类化合物以游离的形式析出，再用乙醚进行回 流提取，得到较纯净的大黄素类混合物醌类化合物多具有酚羟基，故具有一定的酸性在碱性水溶液中成盐溶解，加酸酸化后 游离又可重新沉淀析出根据醌类化合物酸性强弱的差别，可用碱梯度萃取法进行这类化合 物的分离以游离蒽醌类衍生物为例，酸性强弱按下列顺序排列：含-COOH＞含2个以上& -OH＞含一个& -OH＞含一个a -OH故可从有机溶剂中依次用5%碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶 液、1%氢氧化钠溶液、5%氢氧化钠溶液进行梯度萃取，达到分离的目的本次实验对大黄中大黄素的分离就是利用上述的原理，根据大黄素、芦荟大黄素、大黄 酸及大黄酚和大黄素甲醚混合物的酸性强弱差别来进行的三、 实验步骤1、 总羟基蒽醍苷元的提取经酸水解得到的滤饼经干燥后，取7g置索氏提取器中，加入乙醚150ml，回流提取2小时， 得乙醚提取液乙醚提取液经薄层色谱检查有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚和 大黄酚。
薄层板为硅胶CMC-Na板，展开剂为石油醚（沸程60〜90°C）-乙酸乙酯（7:3），近 水平或直立展开，在可见光下可看到四个斑点，RfQ0.9的黄色斑点为大黄酚和大黄素甲醚混 合物，在此条件下分不开，其余三个斑点，依Rf值由大到小分别为大黄素（橙色斑点）、芦 荟大黄素（黄色斑点）、大黄酸（黄色斑点）2、 pH梯度萃取分离（1） 大黄酸的分离和提纯：将上述乙醚提取液以5%碳酸氢钠溶液振荡提取，水层呈紫红色 分出水层，再重复提取数次，直至不显红色为止（共约60ml，分3~4次提取）合并水层提 取液，用盐酸酸化至pH3左右，即得黄色沉淀过滤，先用水洗沉淀数次，再以少量冰冷的 丙酮洗，以除去有色杂质干燥后以冰醋酸或毗啶结品2~3次，得黄色针状结品2） 大黄素的分离和提纯：碳酸氢钠溶液提取后的乙醚层再以5%碳酸钠溶液振荡提取数次 （共约120ml，分3~4次提取）水层呈红色，合并水层提取液，加盐酸至酸性（pH6左右），得黄色沉淀，过滤，用水洗沉淀，以冰冷丙酮洗，在冰醋酸或毗啶中结品数次，得橙色大针 状结品3） 芦荟大黄素的分离和提纯：碳酸钠溶液提取后的乙醚层，再经0.25%氢氧化钠溶液振 荡提取数次（约100ml，分3~4次提取），水层呈红色，合并水层提取液，加盐酸至酸性（pH6 左右），得橙色沉淀。
过滤后用水洗沉淀，干燥后在冰醋酸或乙酸乙酯中结品数次，得橙色长 针状结品（4）大黄酚和大黄素甲醚的分离和提纯：上述芦荟大黄素分离后的乙醚液用5%氢氧化钠溶 液振荡提取数次，直至无色合并深红色的水层溶液，加盐酸至酸性，得黄色沉淀过滤， 水洗，干燥后得大黄酚和大黄素甲醚混合物四、实验结果乙醚提取液经薄层色谱检查得到的现象如右图：在可见光下观察到四个斑点，由左到右各斑点的颜色分别为黄色、橙色、黄色、黄色，计算其Rf值：5.0 / 5.5=0.913.1 / 5.5=0.562.5 / 5.5=0.450.4 / 5.5=0.07分析实验结果发现该薄层色谱检查结果与实验步骤中所描述的理论现象一致，实验操作正确无误，实验数据可信五、实验总结本次实验主要涉及到药物化学实验操作，索氏提取器的操作、萃取分离及薄层色谱 鉴定等操作通过实验，充分理解了实验前预习的重要性，要尽可能避免意外的发生， 如实验中有些组因回流提取时温度设置过高导致乙醚液沸腾冲出我们也应该熟悉并掌握各种实验仪器或实验步骤的正确操作在这次实验中，遇到 的问题主要是萃取时液体不分层，导致无法分离例如在振荡分液漏斗时要注意沿着同 一方向，避免乳化现象的发生；若液体难分层，则不应剧烈振荡；若乳化现象已经发生， 可用吹风机吹以使其消失，或加入氯化钠使其分层明显。
总之，善于思考是实验成功的关键，从实践中发现理论理解缺陷，将实验与理论结 合，才能在实验中学习到更多的东西。