糖苷酶实验指导α-糖苷酶抑制剂抑制活性测定 实验原理： 食物中的淀粉经口腔唾液、胰淀粉酶消化成含少数葡萄糖分子的低聚糖以及双糖与三糖，进入小肠经α- 葡萄糖苷酶作用下分解为单个葡萄糖，为小肠吸收在生理状态下，小肠上，中、下三段均存在 α- 葡萄糖苷酶，在服用α- 葡萄糖苷酶抑制剂后上段可被抑制, 而糖的吸收仅在中、下段，故吸收面积减少，吸收时间后延，从而对降低餐后高血糖有益, 在长期使用后亦可降低空腹血糖, 估计与提高胰岛素敏感性有关 对硝基苯-α-D-葡萄糖苷经α-葡萄糖苷酶水解可产生对硝基苯酚，其在405nm呈特异性吸收，因此可以通过检测对硝基苯酚的生成量检测α-葡萄糖苷酶的活性 仪器与试剂 缓冲液：0.1M的磷酸钠缓冲液--每100ml中1mol/l磷酸氢二钠4.6 ml，1mol/l磷酸二氢钠5.4 ml 酵母α-葡萄糖苷酶：将100U/ml酶原液用0.1M的磷酸钠缓冲液稀释为1U/ml的酶溶液，冷冻备用 底物pNPG配制：2mM的pNPG溶解于0.1M的磷酸钠缓冲液中 阿卡波糖抑制剂配制：200μg/ml溶于0.1M的磷酸钠缓冲液中 实验内容 1. 分组：空白对照组、阴性对照组、阳性对照组、阳性对照组空白、待测样品大、中、小剂量组、待测样品组空白 空白对照： 170μl缓冲液+30μl 2mM的pNPG 阴性对照组：10μl酶溶液+160μl缓冲液+30μl 2mM的pNPG 阳性对照：10μl酶溶液+60μl缓冲液+100μl阿卡波糖抑制剂+30μl 2mM的pNPG 阳性对照空白：10μl酶溶液+90μl缓冲液+100μl阿卡波糖抑制剂 待测样品组：10μl酶溶液+60μl缓冲液+100μl待测样品+30μl 2mM的pNPG 待测样品空白：10μl酶溶液+90μl缓冲液+100μl待测样品 2. 实验步骤 96孔酶标板上依次加入除底物外的所有反应液，37℃温浴10分钟，然后迅速加入底物,并测定反应初始吸光值；之后，用塑料膜密封酶标板，37℃保温，每隔15分钟测定一次吸光值，以吸光值对时间做反应曲线。
注： 除阳性对照空白和待测样品空白，其他每个样品做3个平行 每班分成4组，每组做一块酶标板 。