单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,单击此处编辑母版标题样式,,,,*,/22,Department of Microbiology,,and,,Immunology 6-June-2014,,,,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,单击此处编辑母版标题样式,,,,,,,22,/22,Department of Microbiology,,and,,Immunology 6-June-2014,,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,单击此处编辑母版标题样式,,,微生物学硕士论文答辩,免疫学实验,微生物学与免疫学教研室,内容提要,E,花环实验,淋巴细胞转化实验,,,,2,大吞噬实验,,,,3,,,,小吞噬实验,4,E花环试验,,人外周血,T,淋巴细胞,上能与绵羊红细胞结合的受体，称为,E,受体，即,CD2,分子或,LFA-2,（淋巴细胞功能相关抗原,-2,） ；在一定的试验条件下，绵羊红细胞能与该受体结合形成以,T,细胞为中心，四周绕以绵羊红细胞的玫瑰花团，故称,E,花环形成试验T,,T,,B,,,,,,,,,SRBC,CD2,固定、染色,,固定：,取出孵育后的细胞，滴加,0.8%,戊二醛,200,μ,l,（等体积），轻轻悬浮混匀，,4℃,孵育放置,20-30,min,。
涂片：,向上述细胞悬液中加,50,μ,l,美兰染液，,混匀，,静置,5min,，取一滴于载玻片上，加盖玻片,镜检,,镜检：,淋巴细胞呈蓝色，,SRBC,呈红色围绕淋巴细胞形成花环，凡表面粘附有,3,个或,3,个以上,SRBC,者为花环形成细胞（即,E,阳性细胞）,,计数,200,个淋巴细胞，算出花环形成百分率，并推测其,T,淋巴细胞百分率正常值为：,50,～,80%,注意：,计数及摇匀细胞时动作应轻柔，避免打散已形成的花环,结果,,E花环分类,,Ea-RFC(,效应,T,细胞,),：正常值为,15~35%,activated rosette formation cells,A-RFC,）E-RFC(,总和,),：正常值为,60~80%,意义：,,①,,,E-,受体为,T,细胞所特有，是鉴定,T,细胞的重要标志之一，还用于,T,细胞的分离②,,用于检测患者外周血中,T,细胞的比例及数目，间接反映患者细胞免疫功能视频动画,内容提要,,淋巴细胞转化实验,,,,2,E,花环实验,,,,1,大吞噬实验,,,,3,,,,小吞噬实验,4,淋巴细胞转化试验,,★,植物血凝素（,PHA,）、刀豆蛋白,A,（,ConA,）选择性刺激,T,细胞,增殖,；,,,,★,脂多糖（,LPS,）、葡萄球菌,A,蛋白（,SPA,）可刺激,B,细胞,增殖；,,T,细胞、,B,细胞表面具有抗原识别受体和有丝分裂原受体,,美洲商陆,淋巴细胞转化试验,,,原理,,当,T,淋巴细胞在体外培养时，加入,PHA,或,ConA,刺激，,T,淋巴细胞可转化为淋巴母细胞，同时伴有,DNA,、,RNA,及蛋白质合成的增加，最终导致细胞分裂。
根据其转化率可测定,T,淋巴细胞的功能，从而反映机体的细胞免疫功能DNA,合成,分化,淋巴母细胞,刺激物,细胞变大,细胞浆扩大,空泡,核仁明显,核染色质疏松,T,淋巴细胞,未转化细胞,过渡态细胞,淋巴母细胞,转化淋巴细胞的判断标准,细胞类别,,形态特征,,转化的淋巴细胞,,未转化的淋巴细胞,,,淋巴母细胞,过渡型细胞,,胞体大小（直径）,,10,～,20µm,或更大,12,～,16µm,6,～,8µm,,,,,胞 核,位 置,多偏于一侧，少数位于中央,中央或稍偏,多位于中央,,染 色 质,疏松，呈粒状,较疏松,致密团聚,,核 仁,清晰，可见,1,～,3,个,有或无,无,,有丝分裂,有时可见,无,无,,,,,胞 浆,量,丰富，核之一侧较宽广,稍宽,较少，常呈一窄环,,嗜碱性,++++,+++,～,++,++,～,+,,空 泡,常可见,有或无,无,,伪 足,常可见,有或无,无,内容提要,大吞噬实验,,,,3,淋巴细胞转化实验,,,,2,E,花环实验,,,,1,,,,小吞噬实验,4,原理,,巨噬细胞对颗粒性抗原有强大的吞噬能力常用细胞型抗原如鸡红细胞、白色念珠菌、酵母细胞等与巨噬细胞孵育，检测巨噬细胞的吞噬能力。
原理,,16,大吞噬试验,,鸡红细胞,大吞噬细胞,对鸡红细胞消化程度分级：,,Ⅰ,级：未消化，鸡红细胞核清晰，着色正常Ⅱ,级：轻度消化，鸡红细胞核模糊，核肿胀，着色淡Ⅲ,级：完全消化，鸡红细胞核溶解，染色极淡结果计算,,可观察鸡红细胞的消化程度，以判断巨噬细胞胞内杀伤功能吞噬百分比＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数,/,所计数的巨噬细胞总数（吞噬的＋未吞噬的）,×100%,,吞噬指数＝,100,个巨噬细胞吞噬的鸡红细胞总数,/,100,个巨噬细胞,临床意义,,参考值：正常人吞噬百分比为,60%,～,65%,，吞噬指数,1%,左右,,临床意义：可作为机体抗肿瘤能力的判断指标恶性肿瘤病人吞噬百分比为,34%,～,38%,吞噬指数为,0.6%,左右有人报告，食道癌、胃癌、肠癌、乳腺癌以及其它恶性肿瘤患者的吞噬百分比都在,45%,以下，吞噬指数也降低不少患者在术后有不同程度的回升，提示本试验也可作为判断肿瘤疗效及预后的一个参考指标内容提要,,,,3,,,,2,,,,1,,,,4,E,花环实验,淋巴细胞转化实验,大吞噬实验,小吞噬实验,原理,,血液中的中性粒细胞通称小吞噬细胞有强大的吞噬和消化异物的功能，构成机体天然抵抗力。
在机体固有免疫和适应性免疫中发挥重要的作用对中性粒细胞的检测包括运动功能、吞噬功能和杀伤功能的测定对于感染等疾病有重要的辅助诊断意义结果,,油镜下见中性粒细胞核深染且分叶，胞浆淡红色，细菌呈紫色。