一海洋微生物代谢产物抗肿瘤活性成分研究一海洋微生物代谢产物抗肿瘤活性成分研究摘要海洋微生物生存环境特殊，其次级代谢产物化学结构新颖、种类繁多，是新活性先导化合物的重要来源为了寻找抗肿瘤活性先导化合物，本论文采用活性追踪的方法开展了海洋微生物抗肿瘤活性代谢产物的研究工作内容包括:海洋微生物抗肿瘤活性菌株的分级组合筛选;活性菌株复筛和发酵条件考察:抗肿瘤活性成分的追踪分离;化合物单体的结构解析;单体化合物抗肿瘤活性的初步评价采用海虾生物致死法和 t s F T 2 1 0细胞的流式细胞术筛选模型，以细胞周期抑制和细胞凋亡诱导以及坏死性细胞毒为活性指标，对采自 青岛近海由实验室分离保藏的1 6 4 株海洋微生物，进行了抗肿瘤活性的分级组合筛选经海虾生物致死法一级初筛， 得到活性菌株6 0 株 ( L C 5 n I 吕p s e u r o t i n A2 0b i s - N - n o r g l i o v i c t i n2 1T r y p t o q u i v a l i n e J2 2d i d e h y d r o b i s d e t h i o b i s ( m e t h y l t h i o )- g l i o t o x i n2 3f u mi q u i n a z o l i n e s G2 4f u m i q u i n a z o l i n e s A5一摘要一2 5f u mi q u i n a z o l i n e s C2 6f u mi q u i n a z o l i n e s F2 7( 一 ) 一 ( 1 R , 4 R ) 一 1 , 4 - ( 2 , 3 )- i n d o l m e t h a n e 小m e t h y l- 2 , 4 - d i h y d r o - l H - p y r a z i n o[ 2 , 1 - b ] q u i n a z o l i n e - 3 , 6 - d i o n e· 6一海洋微生物代谢产物抗肿瘤活性成分研究一S t u d i e s o n t h e A n t i t u mo r C o n s t i t u e n t s P r o d u c e d b yMa r i n e Mi c r o o r g a n i s msAb s t r a c tMa r i n e m i c r o o r g a n i s ms c o n t i n u e t o b e a n i m p o rt a n t s o u r c e o f b i o a c t i v es e c o n d a r y m e t a b o l i t e s . A s t u d y w a s c a r r i e d o u t t o i n v e s t i g a t e t h e p o t e n t i a la n t i - t u m o r c o m p o u n d s d e r i v e d f r o m m a r i n e m i c r o o r g a n i s ms . T h i s d i s s e r t a t i o nd e s c r i b e s t h e d i s c o v e r y o f s e v e r a l a n t i t u m o r l e a d c o m p o u n d s p r o d u c e d b y m a r i n em i c r o o r g a n i s m s . S t u d i e s i n c l u d e s c r e e n i n g o f m i c r o b i a l s t r a i n s , s e l e c t i n g a i m e ds t r a i n s , f e r me n t a t i o n s t u d i e s , b i o a s s a y - g u i d e d f r a c t i o n a t i o n , s t r u c t u r a l e l u c i d a t i o na n d p r e l i m i n a r y e v a l u a t i o n f o r a n t i - t u m o r a c t i v i t i e s o f p u r ec o m p o u n d sT h i s d i s s e rt a t i o n i s o r g a n i z e d i n s i x c h a p t e r sC h a p te r一 磅t 体 洁， 朴 on e i s a ni n t r o d u c t i o n a n d o v e r v i e w o f t h e c u r r e n t s t u d i e s i n t h e f i e l d . T h e d i s c o v e r y o fa n t i t u m o r c o m p o u n d s p r o d u c e d b y m a r i n e m i c r o o r g a n i s m s , a c t i n o m y c e t e s a n d f u n g i , a r e r e v i e w e d in C h a p te r O n e 3I n C h a p t e r T w o , t h e r e s u lt s f r o m 。
s tu d y o fg r a d a t e d - c o m b i n a t o r i a l s c r e e n i n g f o r t h e a n t i t u m o r - a c t i v e m i c r o b i a l s t r a i n s i sp r e s e n t e d . T h e s t u d y w a s c a r r i e d o u t b y t h e g r a d a t e d c o m b i n a t i o n o f a 9 6 - w e l lp l a t e l e t h a l i t y b i o a s s a y u s i n g b r i n e s h r i m p a n d a fl o w c y t o m e t r i c b i o a s s a y u s i n g m o u s e ts F T 2 1 0 c e lls . 卜 t ， first ste p , ， 16 4 stra in s o f m a rin e -d e riv e d m ic ro b e s,i s o l a t e d f r o m t h e m a r i n e s a m p l e s c o l l e c t e d a t t h e n e a r s h o r e a l o n e t h e Q i n g d a o ' s c o a s tl i n e a n d a r o u n d J i a o z h o u B a y , w e r e f i r s t s c r e e n e d b y B r i n e S h r i m p L e t h a l i t y a s s a y t oo b t a i n 6 0 s t r a i n s w h i c h s h o w e d l e t h i f e r o u s a c t i v i t y o n b r i n e s h r i m p , a n d p o s s e s s e d3 6 . 6 % o f t o t a l 1 6 4 s t r a i n s t e s t e d . F o r t h e s e c o n d s t e p , t h e 6 0 s t r a i n s w e r e s u b j e c t e d t ot h e fl o w c y t o m e t r i c s e c o n d s c r e e n i n g u s i n g m o u s e t s F T 2 1 0 c e l l s a n d t o t a l 2 7 s t r a i n sw e r e f o u n d t o h a v e a n t i t u m o r a c t i v i t i e s o n t h e t s F T 2 1 0 c e l l s , w h i c h p o s s e s s e d 4 5 . 0 % o f th e 6 0 stra in s a n d 1 6 .5 % o f to ta l 1 6 4 stra in s, re sp e ctiv e ly . 〕 字 4 7C 4 1 Z 一 枝 ·C h a p t e r T h r e e d e s c r i b e s t h e r e s u l t s o f t h i r d s c r e e n i n g ( s t a b i l i t y - t e s t s f o r t h eb i o a c t i v e c o m p o n e n t s ) a n d f e r m e n t a t i o n s t u d i e s p e r f o r m e d o n t h e a i m e d s t r a i n s .7_-Ab s tra c t -T h e me t a b o l i t e s o f 3 s t r a i n s i n c l u d i n g 2 a c t i n o my c e t e ( H1 0 0 2 a n d 0 0 7 ) a n d 1f u n g a l ( H I - 0 4 ) s t r a i n s s h o w e d b e t t e r s t a b i l i t y i n s t a b i l i t y - t e s t s . T h e r e f o r e , t h e s et h r e e w e l l t e s t e d s t r a i n s w e r e c h o s e n a s t h e a i me d s t r a i n s t o i n v e s t i g a t e t h e i rb i o a c t i v e m e t a b o l i t e s i n t h i s s t u d y . T h e t i me c o u r s e e x p e r i me n t s f o r t h ef e r m e n t a t i o n o f t h e s e t h r e e p r o d u c i n g s t r a i n s w e r e t h e n c a r r i e d o u t , f o l l o w e d b ys o l v e n t e x t r a c t i o n t e s t s f o r t h e a c t i v e 。