※实验六 酵母 RNA 的分离及组分鉴定【实验目的】了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法实验原理】酵母核酸种 RNA 含量较多 RNA 可溶于碱性溶液， 在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀由此即得到 RNA 的粗制品核糖核酸含有核糖、 嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在鉴定依据： 磷酸与定磷试剂反应产生蓝色物质 核糖与苔黑酚作用产生绿色物质 嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤碱银化合物沉淀实验器材】150 ml 锥形瓶、水浴、量筒、漏斗及抽虑瓶 、吸管 7、滴管 8、试管及试管架 9、烧杯 、离心机、漏斗【试剂和材料】1、 0.04 mol/L 氢氧化钠溶液；2、酸性乙醇溶液：将 0.3 毫升浓盐酸加入 30 毫升乙醇中；3、 95%乙醇；4、乙醚；5、 1.5 mol/L 硫酸溶液；6、浓氨水；7、 0.1 mol/L 硝酸银溶液；8、三氯化铁浓盐酸溶液： 将 2 ml 10% 三氯化铁溶液 （用 FeCl3·6H 2O 配制）加入到 400ml 浓盐酸中；9、苔黑酚（地衣酚）乙醇溶液：溶解 6 g 苔黑酚于 100 ml 95% 乙醇中（可在冰箱中保存一个月）；10、定磷试剂：（ 1） 17% 水中（ 2） 2.5% 钼酸铵溶液：将硫酸溶液：将 19 ml 浓硫酸（比重 1.84）缓缓加入到 83 ml2.5 g 钼酸铵溶于 100 ml 水中（ 3）10% 抗坏血酸溶液： 10g 抗坏血酸溶于100 ml 水中，贮棕色瓶保存（溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄或棕色则失败，需纯化抗坏血酸） 。
临用时将上述3 种溶液与水按如下比例混合17%硫酸溶液： 2.5%钼酸铵溶液： 10% 抗坏血酸溶液：水 =1： 1： 1： 2 (V/V) ；11、酵母粉实验操作】1、溶解 RNA将 5 g 酵母悬浮于 90 ml 0.04 mol/L 氢氧化钠溶液于 150 ml 锥形瓶中， 在沸水浴中加热30 分钟，制成碱提取液，将其冷却2、解聚 RNA将冷却的碱提取液离心 （6000ｒ /min ）5 分钟，将上清液用乙酸调节 pH 至酸性（pH5~6 ））缓缓倾入 30 ml 乙醇溶液中，注意要一边搅拌一边缓缓倾入待核糖核酸沉淀完全后，离心（6000 ｒ /min ） 5 分钟弃去清液3、洗涤沉淀，抽滤得RNA采用倾倒法用95%乙醇洗涤沉淀两 一次，即得RNA4、 RNA各组分鉴定（ 1）水解液制备取 200 mg 提取的核酸， 加入 1.5 mol/L 硫酸溶液 10 ml，在沸水浴中加热 10 分钟后即得核酸水解液 2）组分鉴定① 嘌呤碱的鉴定取水解液 1 ml 加入过量浓氨水， 然后加入约 1 ml 0.1 mol/L 硝酸银溶液， 观察有无嘌呤碱的白色银化合物沉淀。
② 核糖的鉴定取 1 支试管加入水解液 1 ml ，三氯化铁浓盐酸溶液 2 ml 和苔黑酚乙醇溶液 0.2 ml 放沸水浴中 10 分钟溶液变成绿色，说明核糖的存在③ 磷酸的鉴定取 1 支试管加入水解液 1 ml 和定磷试剂 1 ml ，在水浴中加热，溶液变成蓝色，说明有磷酸的存在。