中译本序译者的话第三版前言上册第［章质粒及其在分子克隆中i导言SDS碱裂解法制备质粒DNA（方案1~3）方案1SDS碱裂解法制备质粒DNA’小魁制备方案2SDS碱裂解法制备质粒DNA；中墜制备方案3SDS碱裂解法制备质粒DNA：大罐制备—煮彿裂解法制备质粒DNA（方案4和5）方案4煮沸裂解袪小量制备质粒DNA方案5煮沸裂解法大量制备质粒DNA方案6牙签法小量制备质粒DNA方案7SDS裂轉法提取质粒DNA聚乙二醇沉淀法纯化质粒DNA方案9层析法纯化质粒DNA方案10氯化艳-凜化乙锭梯度平衡离心法纯化闭环DNA：目录目录方案25方案26方案27用氯化钙制备和转化感受态大肠杆菌大肠杆菌的电击转化用X-gal和IPTG筛选细菌菌落沁互补方案28方案29•替代方案:Xgal和IPTG直接用于琼脂板一小量细菌克隆的杂交法歸选中等董细胞克隆的杂交法筛选方案30方案31方案32•替代方案：菌落的快速裂解和DNA固定于尼龙大嶽细菌克隆的杂交方法筛选菌落的裂解和DNA与滤膜的结合在滤膜上进行细菌DNA的杂交信息栏•…氯霉素卡那霉翥PBR322四环素鐵节青霉素和梭节青纂素X-gal□互补漠化乙聲缩合刑与聚合剂聚乙二尊沉淀进纯化质粒DNA溶菌醯聚乙二醇目录目录筑化艷和氯化蹩平衡密度梆度目录方案6方案7方案8方案9方案10方案11方案12方案13方案14方案15方案16方案17方案18方案19方案20方案21方案22方案23从大规模裂解物中制备X噬菌体颗粒通过瞬眩电泳测定X噬菌体原种和裂解物中DNA通过GC1尊密度梯度离心纯化X噬菌体颗粒•…・替代方案:通过0C1平衡梯度等密度离心纯化通过甘油分级梯度离心纯化X噬菌体颗粒方案24信息楼噬菌休:历史回顾•通过沉淀/离心纯化入噬菌体颗粒用蛋白酶K和SDS从大规模培养物中提取X噬遭用甲酰胺从大规模培养物中提取X噬菌怵DNA，可被单一限制酶切割用作克隆载体的X噬菌体D1经双限制篤切割用作克隆载体的X噬菌体DNA由A噬菌体載休DNA的碱性磷酸酶处理入噬菌体臂的纯化:通过薦糖密度梯度克心……用于基因组文库中的真核DNA的部分酶切:预反用于基因组文库的真核DNA的部分酶切:制备反入噬菌体臂与外源基因组DNA片段的连接基因组文库的扩增噬菌体DNA从噬菌斑到膜的转移・替代方案:从噬菌斑到滤膜的怏速转移•……噬菌体DNA在滤膜上的杂交X噬菌体分离物的快速分析:从平板裂解物中纯化•附加方案;通过CTA吕机淀除去多糖X噬菌体分离物的怏速分析:从液体培养物中纯化生长时间聚乙二醇第4章高容最载体的应月导官方案1应用黏粒载体构建基因组DNA文库目录方案2通过杂交筛选未扩增的黏粒文库:滤膜影印•……*附加方案;减少交叉杂交方案3黏粒文库的扩增和贮存*在液体培养基内扩增•…方案4黏粒文库的扩增和贮存:在滤膜上扩增替代方案；在平板上扩增方案5P1目录目录•附加方案:用点滴透析法纯化高分子质量DNA•替代方案:用Qiagen树脂层析纯化高分子质量为方案6F1噬菌体克隆在大肠杆菌宿主间的转移方案7细菌人工染色体的应用方案&从小量壇养物中分离BACDNA从大量培养物中分离BACDNA-方案10酵母人工染色体的应用目录目录方案11醸酒酵母的生长及其DNA的制备方案12酵母DNA的小量制备方案13利用PCR分析酵母菌落*方案14高容董载悴中基因组DNA片段末端的分离：小载信息栏方案9中性聚丙烯酰胺凝胶电泳方案10聚丙烯酰胺凝胶中DNA的染色检测方案口聚丙烯酰胺凝胶中DNA的放射自显影检测方案12聚丙烯酰胺凝胶中1JNA片段的回收：压碎与覆泡脉冲场凝胶电泳（方案13〜20）方案13脉冲场凝胶电泳制备DNA腮乳动物细胞和组织1方案14脉冲场凝胶电泳制备DNA：酵母完整DNA的分阀方案15琼脂糖凝胶栓中DNA的限制性内切核酸酶消化•方案16駅冲场凝胶电泳的分子质量标准方案17橫向交变场的脉冲场凝胶电泳替代方案:PFGE胶的银染方案18箝位匀强电场的脉冲场凝胶电泳方案19脉冲场凝胶中DNA片段的直接回收目录方案20fc冲场擬胶中浓缩DNA片段的回收第6章真核基HfiDNA的制备导言方案1用蛋白酶K和苯酚从哺乳动物细胞中分离高分子3目录•附加方案，用荧光计估计DNA的浓度方案2用甲酰胺从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA方案3用缠绕法从哺乳动物细胞［中分离DNA方案4从96孔微培养板生长的哺乳动物细胞中分离DNA•附加方案:适用于PCR的优化基因组DNA分离方案5从鼠尾或其他小样本中制备基因组DNACTAB…第7章真核细腕mRNA的提鉤导言一方案1用酸性酚-硫氤酸弧氯仿提取法纯化组织和细胞中方案2用一步法从细胞和组织中同时制备DNA.RNA和召方案3oligo(dT)-纤维素层析法提取poly(A)+RNA•…方案4批最层析方法筛选poly(A)+RNANorthern杂交.**•-方案5根据大小分离RNA忆二醛化RNA的琼脂糖凝胶i方案6按大小分^RNAS在含有甲醛的琼脂糖凝胶上进行方案7变性RNA在膜上的转移和目录目录*替代方案’下行毛细管转移方案8Northern杂交方案9纯化的RNA的点杂交和狭线杂交方案H)用S1核酸酶对RNA作图方案11核糖核酸酶保护:用核糖核酸酶和放射性标记的T方案12用引物延伸法进行RNA的分析……信息栏…如何去除RNAW*RNA酶的抑制制DEPC(焦碳酸二乙酣)弧盐・xiv・方案7应用PCR的遗传工程*方案8应用mRNA反转录扩增cDNACRTPCR)方案9cDNA5^末端的快速扩增(S^RACE)方案iOcDNA3,未端的快速扩壇(3'RACE)方案11应用混合寡核昔酸引物引导的cDNA扩增(MOPA方案12克隆在原核载体的DNA片段的快速鉴定•附加方案：用PCR方法筛选酵母转化子附加方案:筛选X噬菌休文库方案13长距离FCR…方案14反向PCR……方案15定量PCR…方案16差异显示PCR信息栏…參璽PCRTaqDNA聚合酶。
热启动FCR第9章放射性标记DNA探针与RNAh——导看…方案1随机引物法雷利用寡核昔酸延伸法进行纯化DNA片方案2随机引物法:在融化琼脂糖存在下利用随机寡核昔直记方秦3利用聚合酶链反应制备放射性标记的DNA探针-*附加方案:不对称探针七亡必II囲詰灶癥铝厶卅由宀上由站留戡珈曲方案16用交换反应进行亍突出端DNA分子的磷酸化……信息栏核酸的非放射性标记大肠杆菌DNA聚合験I和Klenow片段悴外转录累统通过邃异筛选和克隆分离差异表达的cDNA硫性磷酸酶第10章合成寡核昔战探电导言…方案1方案2方案3方案4方案3方案6方案7方案8方案9信息栏寡aw的合成解链溫度純化合成塞核晋酸的方法用聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化合成的寡核昔載寡核昔酸5’末端磷酸化乙醇沉淀法纯化放射性标记的寡核昔酸CPB沉淀法纯化放射性标记的寡核昔酸大小排阻层析法纯化放射性标记的寡核昔酸用Sep-Pak柱层析祛纯化放射性标记的寡核晋雷用大肠杆菌DNA聚合酶IKlenow片戟标记合成邯寡核昔酸探针在溶液中的杂交；用含季擁盐的缓沖带解链温度的实验测定j£第II章cDNA文库制备及基医目录阶段1:文库的构建阶段2：电穿孔法将文库转染COS-7细胞一・一阶段3：mRNA的提取目录阶段4：反转录PCR阶段5：克隆分析方案4用大片段基因组DMA克隆直接筛选qDNA信息栏商晶化的cDNA合成与文库构建试剂盒MoMLV反转录酶同聚物加尾XgtlO和AgtU少量细胞制备cDNA文库体外包装COS細胞生物索廳珠不依輸连接的克隆第12章DNA测序目录目录导言建立随机重叠DNA插入文库方案1•替代方案:M13噬菌体小量单链DMA模板制备.酣怖苦St•祐和审摆田土磯商化平耒端MH瞰官・xvi-方案10配制电解质梯度胶方案11上样并进行DN血测序方案12放射自显影和从测序凝胶上读取DNA序列…-信息栏自动化DNA测序微量滴定板coliDNA聚合酶I的Kknowj宁段用于测序的寡核昔酸引物的贮存液的制备十・使用PGR扩增DMA进行传统的链终止测存用于DNA测序的dNTPs和ddNTps贮存液的制备DNA序列测定中的甘油在DNA测序凝腔中的压缩现象7“脱鋭-dGTP二氯二甲基硅烷阅读放射自显影相片DNA的电泳迁移率第13章诱变寻曰方案1含尿唯唳的单链噬菌体M13DNA制备方案2寡核昔酸指导的单链DNA诱变*<4-«-L方案3方案4以双链DNA为模板的体外诱变】用DpM选择突理通过单一限制位点消除进行寡核苛酸指导的诱变（排除鼾生型DNA的定点诱变筛选-甲棊化腺膘吟，DAM甲基化醯和甲基化敏感限制酶………定点突变的海业试剂盒甘油突变检测第14章表达文库的筛选导言方案1筛选构建于X噬菌休载体的表达文库方案2筛选质粒载休构建表达的文库方案3去除抗血清中交叉反应的抗体:假端选•替代方案:用噬菌体感染细胞裂無液吸收抗体方案4方案5方案6方案7从抗血清中去除交叉反应性抗体:与大肠杆菌裂解辛从抗血清中去除交叉反应性抗体:亲和层析法……利用入噬菌休文库筛选DNA结合蛋白制备含有由A噬菌体溶源菌所编码融合蛋白质的裂方案8含有入噬菌悴编码融合蛋白质裂解液的制备:琼月旨木方案9含有入噬菌体编码融合蛋白裂解液的制备’液体培扌信息栏质粒及入噬菌怵表迖载体基因组DNA和cDNA表达文库抗体在免疫筛选中的应用第15章隹大肠杆菌中表达克隆附加方案;匱折叠从包涵体提取的溶解蛋白信息栏克隆基因的表达大肠杆菌表达系统Lac鼻融合离液剂第16章哺乳动物培养细胞中导入克导言…方案1方案2方案3方案4方案5方案召方案7信息栏共转化脂染介导的DNA转染•附加方案“单层细胞组化染色鉴定卩-葡萄糖醛酸I磷酸钙介导的质粒DNA转染真核细胞*•替代方案匸高效率的磷酸钙介导的质粒DNA转多磷酸钙介导的高分子輦基因组ONA转染细胞……•替代方案:磷酸钙介导的贴壁细胞的转染……・替代方案:磷酸钙介导的悬浮细胞的转染……DEAE-葡聚糖介导的高效率转染•替代方案:DEAE介导的转染:增强细胞生存力电穿孔转染DNA生物粒子介等的DNA转染•附加方案:单层细胞组化染色鉴定B-葡萄糖醛酸利用Polybrene进行DNA转染报道分子测定荧光霜酶和卩-半乳糖昔酶（方案5.6开方案5方案6方薬7方案B0!薄层层析法。