1 脯氨酸含量测定在测定样品脯氨酸含量之前， 以 OD 值为纵坐标， 标准脯氨酸的浓度为横坐标，绘制标准曲线一、脯氨酸标准曲线制作：1、 脯氨酸标准溶液：准确称取25mg 脯氨酸，用蒸馏水溶解后定容至250ml，其浓度为 100μg.ml-1 再取此溶液 10ml， 用蒸馏水稀释至100ml， 即成 10μg.ml-1的脯氨酸标准液2、 2.5%酸性茚三酮显色液：冰乙酸和6mol.L 磷酸以 3：2 混合，作为溶剂进行配制，此液在 4℃下 2-3 天有效3、管号0 1 2 3 4 5 6 脯氨酸标准溶液(ml) 0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 H2O(ml)2 1.8 1.6 1.2 0.8 0.4 0 冰醋酸(ml)2 2 2 2 2 2 2 茚三酮(ml)2 2 2 2 2 2 2 沸水加热 15min,冷却后 515nm 比色脯氨酸含量 (μg)0 2 4 8 12 16 20 4、以 OD 值为纵坐标，标准脯氨酸的浓度为横坐标，绘制标准曲线二、样品测定称取 1.0g新鲜材料，加入80%乙醇 10ml，于研钵中研磨成匀浆匀浆液定容至 25ml，混匀，在 80℃温水浴中提取 20min；再加入 0.5g 人造沸石和 0.2g活性炭，振荡 0.5min，匀浆液在 1000r．min-1下离心 10min，上清液保存备用。
然后取上述上清液2.0ml，分别加入 2.0ml 冰醋酸、 2.0ml 酸性茚三酮试剂，于沸水中加热 15min，冷却后在 515nm波长处测 OD 值；试验重复 3 次由标准曲线查出测定液中脯氨酸的浓度，然后根据脯氨酸 [μg.g-1(鲜重)]=(C×V/α)/W C: 由标准曲线求得的脯氨酸浓度(μg) W：样品重(g)V： 提取液总体积(ml)α： 测定时所吸取体积(ml) 2 超氧化物歧化酶（ SOD）活性的测定氮蓝四唑（NBT）在蛋氨酸和核黄素存在的条件下，照光后发生光化还原反应生成蓝甲唑后者在560nm 处有最大光吸收 SOD 能抑制氮蓝四唑发生光化还原反应，其抑制强度和酶活性在一定范围内成正比测定参照 Giannopiolitis［68］等方法进行，以抑制氮蓝四唑 (NBT) 光化还原 50%作为一个酶单位（ U） ，酶活性以 U. mg-1蛋白表示方法：选取透明度好，大小形状一致的5ml 试管 5 支，3 支为测定管，一支为空白对照管，另一支为最大光还原管按下表顺序加入下列试剂混匀后，空白管不照光，其他各管同时置于4000Lux 光下，反应 20min要求各管照光情况一致，反应温度控制在 25-30℃之间，视酶活性高低适当调整反应时间。
反应结束后，以空白管为对照，560nm比色从最大管开始最大光还原管：用缓冲液代替酶液，即加PBS2.3 ml，置于 4000Lux 光下，20min空白管：用缓冲液代替酶液和NBT，即加 PBS2.5 ml，黑暗放置试剂用量（ml）终浓度62.5mM, PH7.8 PBS 2.1 ml 43.75 mM 0.06mM 核黄素0.1 ml 2 M 130mM Met(蛋氨酸 ) 0.3 ml 13 mM 0.3mM EDTA-Na20.1 ml 10 M 1.125mM NBT 氮蓝四唑0.2 ml 75 M 酶液0.2 ml 计算：以抑制 NBT 光化还原 50%作为一个酶单位（ U）,酶活性以 U. mg-1蛋白表示 U=(ODmax-OD560)/(ODmax/2) 酶液的提取取 0.5g 鲜重的去叶脉叶片，剪碎，在预冷的研钵中，加1ml 预冷的提取液（ 0.15 mol/l 磷酸缓冲液，内含0.3%PVP 、PH 7.0） ，在冰浴上研磨成匀浆，加提取液最终体积为 10ml在 4℃条件下 15000 r/min 离心 10min，上清液用于酶活性测定 （参 162 页）3 丙二醛（ MDA ）含量的测定MDA 在酸性环境及高温条件下，发生异硫代巴比妥酸（TBA）反应，生成红色的三甲基复合物，该物质在532nm 处有最大光吸收，在600nm处有最小光吸收，该复合物的吸光系数为155[mmol/(L.cm)] 。
测定时取 1.0ml 上清液， 加入 1.0ml 磷酸缓冲液（62.5mmol/L pH 7.8） ， 2.0ml 10%三氯乙酸（含0.5%TBA（硫代巴比妥酸）） ，煮沸 15min 后于冰水中快速冷却，4000rpm 离心 20min，以 10% 三氯乙酸（含0.5%TBA）为参比，在 532、600 和 450nm波长下测定 OD 值试验重复 3 次，求平均值按赵世杰［66］等方法计算 MDA 含量，单位为 μmol.g-1.FW蛋白质含量的测定按考马斯亮蓝 G-250 染色法 Bradford (1976) ［72］定蛋白质含量， 考马斯亮蓝G-250 存在两种不同的颜色形式-红色和蓝色，和蛋白质结合后由红色形式转变成蓝色形式，最大光吸收由465nm 转变成 595nm，通过测定 595nm 处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量标准曲线绘制牛血清蛋白 (BSA): 1mg/ml,100 g/ml 10mg BSA 定容至 10ml 取 1ml 1mg/ml标准液，定容至 10ml，为 100 g/ml考马斯亮蓝 G-250: 100mg考马斯亮蓝 G-250，溶于 50ml 90%乙醇，待完全溶解后再加入 100ml 85%磷酸，用蒸馏水定容至1000ml。
常温下可以放置一个月0~100 g/ml 标准曲线管号1 2 3 4 5 6 100 g/m BSA 0 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 H2O 1.00 0.80 0.60 0.40 0.20 0 蛋 白 质 含 量mg 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 4 准确吸取上述各管溶液0.1ml，分别放入 10ml 具塞试管中，加入5ml 考马斯亮蓝 G-250试剂，盖塞，反复混合数次，放置2min 后，用 1cm 光径比色杯在595nm比色，绘制标准曲线0~1000 g/ml 标准曲线管号7 8 9 10 11 12 1000 g/m BSA 0 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 H2O (ml) 1.00 0.80 0.60 0.40 0.20 0 蛋 白 质 含 量(mg/ml) 0 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 准确吸取上述各管溶液0.1ml，分别放入 10ml 具塞试管中， 加入 5ml 考马斯亮蓝 G-250试剂，盖塞，反复混合数次，放置2min 后，用 1cm 光径比色杯在595nm比色，绘制标准曲线B)样品中蛋白质含量的测定准确吸取样品提取液0.1ml，分别放入 10ml 具塞试管中（设两个重复） ，加入 5ml 考马斯亮蓝 G-250 试剂，盖塞，反复混合数次，放置2min 后，用 1cm 光径比色杯在 595nm 比色，查标准曲线得到蛋白质含量。
C） 计算样品蛋白质含量 (mg/g 鲜重)=蛋白质含量（ mg/ml） 提取液总体积（ ml） 稀释倍数/取样量（ g 鲜重）1.4.3 叶绿素和类胡萝卜素含量的测定根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收原理,利用分光光度计在某一特定波长下测定其消光度 ,即可用公式计算出提取液中各色素的含量. 测定方法参照 Arnon ［64］和朱光廉［65］ 取样 0.2g浸入 25 mL 80%丙酮提取液中，密封，避光浸提至叶片无色时测定用UV-1601 紫外分光光度计分别在663、646、470nm波长处检测 OD 值，按下列公式计算：叶绿素 a（Chl a）=（12.21A663-2.81A646）*V/1000W 叶绿素 b（Chl b）=（20.13A646-5.03A663）*V/1000W 类胡萝卜素（ Car）=（4.4A470-0.01* Chl a-0.45* Chl b）*V/1000W5 式中，A 为吸光值， *代表乘号， V 为提取液总体积（ ml） ，W 为叶片鲜重（ g） ，并计算 Chl= Chl a + Chl b ，重复 3 次荷格伦特（ Hoagland ）营养液的配方如下：（1）.大量元素每升 1mol/L 培养液中加入的毫升数KH2PO41 KNO35 Ca(NO3)25 MgSO4 2 （2）.微量元素每升培养液中加入量（mg ）H3BO32.86 MnCl2· 4H2O1.81 ZnSO4 ·7H2O0.22 CuSO4 · 5H2O0.08 H2MoO4 · H2O0.02 （3）.每升培养液中加入1 mL FeEDTA溶液 (即乙二胺四乙酸铁盐溶液)。
Hoagland’s（霍格兰氏）营养液配方：硝酸钙945mg/L 硝酸钾607mg/L 磷酸铵115mg/L 硫酸镁493mg/L 铁盐溶液2.5ml/L 微量元素5ml/L pH=6.0 改良霍格兰配方：四水硝酸钙945mg/L 硝酸钾506mg/L 硝酸铵80mg/L 磷酸二氢钾136mg/L 6 硫酸镁493mg/L 铁盐溶液2.5ml 微量元素液5ml pH=6.0 铁盐溶液：七水硫酸亚铁2.78g 乙二胺四乙酸二钠（EDTA.Na ） 3.73g 蒸馏水500ml pH=5.5 微量元素液：碘化钾0.83mg/l 硼 酸 6.2mg/L 硫酸锰22.3mg/L 硫酸锌8.6mg/L 钼酸钠0.25mg/L 硫酸铜0.025mg/L 氯化钴0.025mg/L 若作为复合肥使用，可以采用天然水配制，省略微量元素液若作为无土栽培营养液需用人工软水配制，如蒸馏水，微量元素液必须加入经常将上述营养液配成10 倍或 20 倍浓度，用时稀释即可注意用前调整pH。