丙戊酸钠缓释片的质量检测方案一、设计背景癫痫症是属于慢性脑部疾病，是因毛神经元过度放电而导致的反复性阀座的中枢神经疾病，具统计全球先有 5000 多万癫痫病患者，每年新发病也达到 40-60 万人在结合《 （2020）中医药典》关于丙戊酸钠缓释片的记载，丙戊酸钠缓释片，西药名为抗癫痫药本方案中用到德巴金丙戊酸钠缓释片规格为 0.5g（以丙戊酸钠计算） 该药用于治疗（1）全身性癫痫：包括失神发作、肌阵挛发作、强直阵挛发作、失张力发作及混合型发作，特殊类型的综合症等 （2）简单部分发作、复杂部分性发作、部分继发全身性发作3）躁狂症：用于治疗与双相情感障碍相关的躁狂发作本文研究丙戊酸钠缓释片的质量和各项目检查，对于日常服用和临床实际意义二、设计依据根据《中国药典》 （2020 版）第二部，丙戊酸钠缓释片正文内容，本方案中多次利用高效液相色谱法该法优点分离效能高、灵敏度高、引用范围广、分析速度快能提高检验速度与准确性三、设计方案（一）实验仪器和试剂1. 试验仪器仪器选取 HIPP00 高效液相色谱仪、pHS-4D 型酸度计、电子分析天平 FA1004T、色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C8、ZD-2A 型自动电位滴定仪、RCY-1400T 智能溶出仪2. 试剂丙戊酸钠缓释片(德巴金） 、冰醋酸、醋酐、磷酸氢二钠-乙腈（70：30） 、丙戊酸钠对照品、磷酸盐缓冲溶液（pH6.8）（二）实验方案 1.性状本品为薄膜衣片，除去包衣后显白色。
2.鉴别（1）在含量测定项目下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰的保留时间一致2）取本品细粉 1g，加水 50ml，振摇使丙戊酸钠溶解，滤过，滤液显钠盐鉴别（1）的反应：取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显鲜黄色3.检查（1）丙戊酸钠取本品 0.5g， 加冰醋酸 50ml 与醋酐 20ml， 振摇使溶解， 照电位滴定仪法 （通则 0710） ，用玻璃-饱和甘汞电极，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，滴定的结果应用空白试验校正每 1ml 高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于 16.62mg 的丙戊酸钠，每片含丙戊酸钠 308-358mg 符合规定2）有关物质按照高效液相色谱法测定供试品溶液：取本品细粉 1g,,置于 100ml 量瓶中，加入乙腈 20ml，振摇 5 分钟，加磷酸盐酸缓冲溶液约 50ml，振摇 1 小时使丙戊酸钠溶解，用磷酸缓冲溶液稀释至刻度，摇匀滤过取续滤液对照品溶液：精密量取供试液 1ml，置于 200ml 量瓶中，用磷酸盐溶液稀释至刻度，摇匀色谱条件:填充剂：用十八烷基硅烷键合硅胶（4.6mm*250mm,5um）,流动性：以 0.01mol/L 磷酸二氢钠溶液-乙腈（70:30）流速：1.5ml 每分钟，柱温：45℃，检测波长：210mm，进样体积：50ul系统适用性要求：见含量测定项下测定法：精密量取供试品溶液与对照溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的 2 倍。
限度：供试品溶液色谱图中如有杂质峰，除相对保留时间 0.2 之前的辅料峰之外，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积（0.5%） ，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的 3 倍（1.5%） 3）溶出度：按照《中国药典》2020 版第四部（通则 0931 第一法）测定方法：第二法 测定之前，应调试仪器使转篮距离溶出杯的底部有合适的高度 25mm 左右分别量取溶出介质磷酸盐溶液（pH6.8）1000ml 分别置于各溶出杯内，转速为每分钟 60 转，各杯中放入的液体体积与规定的体积偏差应该在 1%的范围内，等待几分钟，让溶出介质温度处于 37℃ 0.5℃后，取供试品 6 片分别放置于 6 个溶出杯内，分别取出 1 小时、3 小时、6 小时、12 小时的溶出液 10ml，立即用适当的微孔滤过，并及时补充相同温度和相同体积的溶出物质供试品溶液：1 小时、3 小时、6 小时、12 小时时的溶出液，滤过，取续滤液对照品溶液：取丙戊酸钠对照品，精密称定 5g,加磷酸盐缓冲溶液（pH6.8）溶解并定量稀释成 100ml 溶液色谱条件填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶流动相：0.01mol/L 磷酸二氢钠-乙腈（70:30）流速每分钟 1.5ml，柱温为 45℃，检测波长为 210nm，进样体积 50ul系统适用性要求理论板数按丙戊酸峰计算不低于 3000，丙戊酸峰与杂峰之间高度应要大于 1.2。
测定方法精密量取供试液和对照品溶液，使用液相色谱仪，分别进样，记录色谱图限度： 每片在 1 小时、 3 小时、 6 小时和 12 小时时的溶出量分别为标示量的 10%~30%、30%~50%、50%~70%和 70%以上，均符合要求计算W 对：对照品称样量，mgW 样：样品规格.mg A 对：对照品溶液峰面积A 样：供试品溶液峰面积V 对：对照品稀释倍数V 样：供试品稀释倍数P：对照品纯度4.含量测定供试品制剂 取丙戊酸钠缓释片（德巴金）20 片，去糖衣，进行精密称定，混匀，置 100mL 容量瓶中，加超纯水稀释至指定浓度，摇匀，滤过待用对照品制剂丙戊酸钠(东京化成工业株式会社) ， 纯度为 99.5%: 取对照品 1.0g 精密至 0.0002L 量瓶中，采用超纯水稀释至指定浓度，并将其精准置于 100ml 量瓶中，摇匀，滤过待用色谱条件流动相：磷酸氢二钠-乙腈（8mmol/L）(50:50)(pH=2.5)波长：210nm，流速：1.2ml/min，柱温：30℃，进样量：20ul操作步骤（1）开启 HIPPOO 各个部件电源2）打开电脑，进入化学工作站3）把流动相磷酸氢二钠-乙腈、甲醇、重蒸馏水分别放入合适的试剂瓶中。
4）打开清洗阀，清洗所有的管线直至气泡消失为止5）设置合适的色谱条件，等待基线平稳（6）设置合适的分析参数（7）进样，进样针需洗净，进样动作需标准（8）打印图谱见图一图 1（9）分析完毕后，以无水乙醇清洗进样针次数用经过滤和超声波脱气处理的溶剂清洗色谱系统和进样阀正相柱用正己烷，反相柱依先用水然后用甲醇-水冲洗，冲洗剂流速采用分析流速，冲刺剂一般冲洗 30 分钟，特殊情况应延长冲洗时间 （10）冲洗完毕后，逐步降低流速至 0，关泵，进样器用相应溶剂冲洗，退出工作站，关闭电脑，关闭各个部件电源11）查看仪器各个部位是否完好，写使用登记系统适用性要求：理论板数按丙戊酸峰计算不低于 3000，丙戊酸峰与相邻杂质峰之间的分离度应大于 1.2计算：按外标法以峰面积计算其中 As:供试品溶液的吸收度（峰面积） ，Ar:对照品的吸收度Wr：对照品的取样量（g）Cs:供试品溶液浓度d:对照品溶液浓度p:对照品的含量%5.线性关系考察利用 HPLG 色谱仪进行进样，以丙戊酸钠的峰值面积（X）对其浓度（Y）进行线性回收计算，进行观察，线性回归方程式：Y=ax+b，在 25-1000μg/mL 的范围内时丙戊酸钠线性结果是非常良好的。
6.回收率分别取奥准也 0.5/2/6mL 配置成 50 、200 、600/mLd 丙戊酸钠溶液，并重复进行检测，见表 1.并且连续进行 6 次日内、日间的并戎酸钠的对照标准偏差 RSD 和回收率的实验，其结果发现该方法的回收率是非常好的表 1：回收率检测结果浓度日内日间实测值μg/mL回收率RSD%实测值μg/mL回收率RSD%5050.7±2.21101.42.550.4±0.17100.82.1200199.6±0.1999.82.1200.4±0.20100.22.0600600.4±0.15100.12.3600.6±0.18100.12.5结合表 1 的内容， 其平均回收率在 100.4%， 而平均 RSD%=2.25%， 而结合 2020 版 《中国药典》的标准，其中回收率 93%-103%之间，RSD=0.11%-0.54%是符合标准的四、操作注意事项1. 电位滴定仪使用时应注意：仪器工作时，不可将滴液漏到仪器上，如有出现漏液必须立即擦干净，应要保持仪器干燥，在工作中需调节液滴快慢只需调节电磁阀前面的柱头螺丝，鉴定完毕后，需用蒸馏水冲次胶管数次，仪器需卫生，整洁仪器如果长时间不使用最好将硅胶管取出，并冲洗干净，防止硅胶粘连和断裂。
2. 高效液相色谱仪使用时应注意： （1）储液瓶储存的流动相应预先经 0.45um 滤膜滤过，脱气后才可以使用溶剂过滤器使用 3-6 个月后，出现阻塞时可先经过超声波震荡清洗，如果没有效果就要及时更换储液瓶要定时清洗，尤其当使用磷酸盐缓冲溶液时，容易产生絮状沉积物必须及时清理，否则容易引起柱阻塞 （2）色谱柱柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或者强烈震动；应在要求的 pH 值范围和柱温下使用，每次试验后应该用冲洗剂洗至基线平直，以后才能使用 （3）检测器每次使用时因及时排除流通池中的气泡，开机后待基线平直，后再注入样品分析 （4）六通进样阀：进样阀转动手柄用力要适当;进样的样品最好是用 0.45um 滤膜过滤后再用于进样;应使用平头注射器进样;每次实验结束时要冲洗进样阀3. 溶出仪使用时应注意：供电电源应有地线且接地良好，否则可能对人身造成伤害或者对仪器性能造成伤害，水浴箱中无水时严禁启动温控状态，否则将损坏加热器，应保持水浴箱中水位不低于溶出杯内液面高度仪器的温度校正,仪器使用六个月，或者必要时需要使用分辨率 0.1℃的标准温度计对仪器显示的温度值予以校正4.溶出介质应新鲜制备和必须脱气处理，因为溶解的气体在实验过程中可能形成气泡从而影响实验结果，在达到该品种规定的溶出时间时，应在仪器开动的情况下取样。
从 6 杯中完全取样时间应在 30 秒以内取样位置应在转蓝的顶端至液面的中点，并距溶出杯内壁 10mm 处测定时，除另外有规定外，每个溶出杯只允许投入供试品 1 片不得多投，并应注意投入杯底中心位置五、附件 Agilent Technologies 1260 高效色谱仪赛诺菲德巴金 丙戊酸钠缓释片 六、参考材料[1]国家药典委员会中华人民共和国药典二部中国医药科技出版社，2020.[2]娄志军.丙戊酸钠缓释片在老年癫痫治疗中对患者生活质量的影响[J].淮海医药,2020,38(01):82-83.[3]习志洁,程涛,司丽丽,肖小嫱,吴冬梅,孙红斌.丙戊酸钠缓释片与托吡酯治疗新诊断成人症状性癫痫疗效和生活质量的比较研究[J].癫痫杂志,2018,4(04):324-329.[4]石宏,谢军平,相恒杰.不同剂型丙戊酸钠治疗儿童癫血药浓度监测及临床分析[J].中国实用神经疾病杂志,2011,14(23):25-26.[5]何小诗,廖卫平,邓宇虹,杨少青,潘英.丙戊酸钠常规剂型和缓释片临床疗效及血药质量浓度对比研究[J].中国实用内科杂志,2003(07):415-416.[6]李静,李会卿,郭翠红,董浩浩.高效液相色谱法对丙戊酸钠缓释片含量的快速分析[J].精细与专用化学品,2016,24(12):44-48. 。