目录摘要 1ABSTRACT 21 •引言 32 •实验材料及方法 32.1材料、试剂及仪器 32.2实验步骤 42. 2. 1取材、固定 42. 2. 2 脱水 42. 2.3 透明 42. 2. 4 浸蜡 42. 2. 5 包埋 42. 2. 6 制片 42. 2. 7 染色 52. 2. 8 封片 62. 2. 9 观察 63.实验结果 63.1肝小叶 63.2肝门管区 64 •实验讨论 7参考文献： 8图版I 9致谢 10金钱豹肝脏组织结构的光镜观察李永兰指导教师：俞诗源教授（西北师范大学，牛命科学学院，邮编：730070）摘要目的:研究金钱豹肝脏的组织结构方法：取金钱豹肝脏纟H•织，固定、石蜡包埠制作组织切 片、HE染色、再进行显微摄影观察结果：金钱豹肝脏实质由肝小叶和门管区组成肝小 叶包括肝细胞、肝血•窦和静脉，门管区包括小叶间动脉、小叶间静脉、小叶间胆管和结 缔纟H.织肝小叶大小均匀且数目多，相邻肝小叶界限清晰，肝细胞排列规则、成索，围绕中 央静脉呈放射状排列肝血窦、静脉发达，肝血窦内有巨噬细胞、内皮细胞和浆细胞, 窦周隙清晰门管区明显、数目多，其中小叶间静脉、小叶问动脉、小叶间胆管校清晰易于 辨别，结缔纟fl织少量。
另外，对金钱豹的肝脏与其他动物的肝脏进行了简单比较关键词：金钱豹肝脏组织结构Leopard microstructure observation of the liverLi Yonglan Guide teacher: professor YuShiYuan(College of Life Science, Northwest Normal University, zip code: 730070)AbstractAim: to study the leopard liver histological structure. Method: take leopard liver tissue and embed it with paraffin, fixed, stain it with HE dye solution, study the liver of Panthera pardus by histological methods. Results:the liver esse nee of Panthera pardus made up of the small leaf of liver and area un der control on the door, hepatic lobule in eludes liver cell , liver blood hole and cental vein, area under control includes the bile duct and connective tissue among the vein, light leaf among the artery, hepatic lobule among the little leaves on the door, hepatic lobules are uniform and the number is much, liver cell among them arrange rule,「ope，radiate out in around the central vein, liver blood holes ^central veins are developed, hepatic blood sinus, endothelial cells and plasma cells in macrophages, the liver blood holes area is clear. Interlobular portal area clear, number of venous, interlobular arteries and interlobular bile duct is clear easy to discern, small amounts of connective tissue. In addition, the Panthera pardus liver has carried on the simple comparison with other animals・Keywords： Panthera pardus liver histological structure1 •引言生物资源是人类赖以牛•存和发展的自然基础，也是牛态系统平衡与稳定的有 力保障。
和谐社会下国民经济长期、稳定和可持续发展也离不开牛物资源因此 野生动物资源是牛物资源的重耍组成部分Z-O我国幅员辽阔，横跨寒温带、 温带、暖温带和亚热带，是牛物多样性资源十分丰富的国家，但也是牛物多样 性遭受破坏最严重的国家之一在《濒危野牛动植物种国际贸易公约》中列出的 640个世界性濒危物种中，约占总数的1/4,其中高等野牛.动物就有118种 ⑸金钱豹（拉丁学名：Panthera pardus ）,又名文豹，隶屈于食肉H、猫科、 豹属，是国家一级保护珍稀动物体型与虎相似，但只有虎的三分之一大雄性 体重可达90公斤，雌性体重70公斤，身体全长1.5〜2.2米，尾长一般超过体长 之半头圆、耳短、四肢强健有力，爪锐利仲缩性强豹全身颜色鲜亮，毛色棕 黄，遍布黑色斑点和环纹，形成古钱状斑纹，故称之为“金钱豹”金钱豹分布地 区广泛，在，豹至少有3亚种的分布：印度豹/华南豹（P.pardus fusea）、华北 豹/豹（P.p.fontanieri）和远东豹长期的过度捕猎、栖息地的破坏、种群过小 且相互隔离导致种群退化等原因使金钱豹数量急剧下降，濒临绝迹依据毛皮收 购情况分析和估计，到80年代末全国豹的野牛种群数量可能尚有数百只。
全世 界估计数量：20万只据世界自然保护联盟发布的《2004年品味濒危物种红色 名录》指出：由于金钱豹数量十分稀少，被国际动物保护组织定为五级，即“难 保护级”，属于高度濒危状态因此，研究金钱豹肝脏的组织结构对于比较解剖学、金钱豹消化系统研究和 保护牛物学研究都具有重姜的意义关于人［⑹、牛、羊【金⑷、家兔⑸、梅花鹿⑺、 红腹锦鸡⑹、虎皮鹦鹉〔刃等动物肝脏的组织结构研究都已有文献报道而有关金 钱豹的研究多集中牛态、牛理、繁殖及疾病的治疗等方面，为了搞清楚金钱豹肝 脏的组织结构，本实验通过石蜡切片法、HE染色和显微摄影技术对金钱豹肝脏 的组织结构进行了初步研究2. 实验材料及方法2.1材料、试剂及仪器材料：实验室早期解剖固定的金钱豹肝脏 试剂:10%甲醛（现配）、酒精（50%、70%、80%、90%、95%、100%）、明胶（现配）、二甲苯、石蜡、苏木精染液、伊红染液主要仪器：烧杯、染色缸、切片机、电热板、恒温箱、解剖刀、蹑子、烧杯、载 玻片、盖玻片、酒精灯、展片台、显微镜等2.2实验步骤用石蜡包埋、组织切片、HE染色的方法观察组织以下为具体实验步骤： 2.2.1取材、固定将金钱豹肝脏组织切块，置现配的10%甲醛中进行尚定(l-2d),用较锋利 的刀切取组织块(0.5x0.5x0.2cm),不宜太大。
2.2.2脱水脱水的H的是把组织之中的水分脱干，脱水后的组织含水量不高于0.5% 常用脱水剂是乙醇，方法是酒精梯度脱水乙醇浓度梯度依次为70% (过夜)、 80% (lh) 95% (40〜45 min)> 95% (40〜45min)、100% (30min)、100% (20min), 注意放置顺序不能错位脱水剂的浓度要保证，若脱水不彻底，透明难以充分 2.2.3透明组织脱水后，必须经过某些既能与脱水剂相混合，乂能溶解石蜡的中间溶液 —二甲苯等透明试剂的处理后，使组织内的脱水剂全部被中间溶剂所取代，此吋 组织成为透明状态，方能够使石蜡浸入透明剂起到桥梁作用制片过程中有两次透明，第一•次是组织在浸蜡之前的透明(二甲苯+100%乙 醇(1： 1)： 30min；二甲苯：5〜lOmin,以组织基本透明为度)，笫二次是切片 染色后的透明(二甲苯I： 3〜5min；二甲苯II： 3〜5min；二甲苯+100%乙醇：3〜 5min)o2.2.4浸蜡浸蜡的H的是除去组织中的透明剂血代Z以石蜡，使原来较软组织变成具有 适当硬度的组织，以便切片石蜡熔点一般在54〜58CZ间浸蜡过程，石蜡+二甲苯：30 min,石蜡I ： lh〜2h,石蜡II： lh〜2h。
2.2.5包埋组织经过固定、脱水、透明、浸蜡后，用石蜡包埋，制成蜡块包埋时应注 意组织的摆放位置，一般是平放，以最大面积平铺，切面向下包埋过程，将组织块用温银子夹取平放于纸盒小，并将熔好的石蜡倾倒至纸 盒，静置使其自然冷却，形成蜡块2.2.6制片将蜡块修整为梯形，蜡块边缘离组织1mm左右即可将修理好的蜡块固定 在木块丄，调节好蜡块与刀刃的距离后进行切片(厚度6um)o展片过程在展片台丄进行，展片台的温度维持在30〜40C温度过低，蜡带 褶皱难以完全展开；温度过高，石蜡易融化，破坏蜡带先在载玻片上滴加明胶并涂匀，滴两滴蒸饰水，将蜡带移至载玻片上，在蜡 带以外滴加蒸饰水使蜡带漂浮于载玻片上，调节展片温度当蜡带展平后，吸出 蒸啊水，将展好的切片放入烘箱中烤干2.2.7染色对烤T的切片进彳亍HE染色即苏木精一伊红染色(hematoxylin-eosin staining) 0 HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最 广泛的技术方法，也是石蜡切片技术中最常用的染色方法之一苏木精染液为碱 性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色:伊红为酸性染料， 主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色, 软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色细胞浆被伊红染成深浅不同的粉 红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色胶原纤维呈淡粉红色，弹 力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色着色情况与组织或 细胞的种类有关，也随其牛活周期及病理变化而改变染色过程：二甲苯I6 〜8min二甲苯II6 〜8min二甲苯+100%乙醇3 〜5min100%乙醇1 〜2min95%乙醇1 〜2min80%乙醇1 〜2min70%乙醇1 〜2min50%乙醇1 〜2min苏木精染色10 〜15min自来水冲洗3〜5 min伊红染色7〜lOmin口来水冲洗3 〜5min放回50%乙醇逆着染色的步骤回至二甲苯I2.2.8封片切片经脱水、色埋、染色后，最后进行封片将其封藏，以使其永久保存便于 镜检封藏剂必须要能与透明剂相混合，对染料无影响，折光率必须与玻片和似, 也要具有粘性此实验用树胶进行封片，在此过程中尽量做到树胶滴而不流，盖片满而不溢, 无气泡2.2.9观察将制好的组织切片置于显微镜下观察并拍照3. 实验结果肝脏组织表而有被膜包裹，被膜属于浆膜，由结缔组织和其丄而的单层扁平 丄皮构成。
结缔组织深入肝实质构成肝的支架，将肝实质分割成许多肝小叶，小 叶间结缔组织较发达，肝小叶分界较明显，门管区清晰，每个肝小叶的周围一般 有3〜4个门管区3.1肝小叶肝小叶（图1）为不规则的多边形棱柱，肝小叶周围的角缘处可见较多的结缔 组织小叶边缘的肝细胞排列整齐静脉（图2）位于肝小叶或稍偏向一 侧，其管壁明显，由一层内皮细胞和一定量的。