活性干酵母发酵生产班级：11应生1班第4,8组摘要：机械搅拌生物反应器，又称发酵罐，是进行液体发酵的特殊设备这次课程主要是认识小型发酵罐， 了解发酵罐的主要结构并掌握其使用方法，清洁发酵罐等相关仪器设备发酵前的准备操作及实罐灭菌操作，培养发酵用的菌种，准备分光光度计，离心机等仪器测OD值，残糖浓度等掌握实验操作的流程，熟悉实验仪器此次采用的是5L的小型发酵罐，主要由发酵罐、空气处理系统、蒸汽净化系统、电气控制 系统、恒温系统及管道、阀门等组成准备的菌种包括一级种子、二级种子要轮班看守发酵罐，及时准 确记录数据关键词：发酵罐的主要结构 上罐前的灭菌工作 菌种的无菌操作 数据的记录 实验后的分析一、 前言生物反应器是生物工程的主要组成部分，是生物技术转化为产品的关键设备，在生物工程中 处于中心地位机械搅拌式生物反应器，又称发酵罐，是进行液体发酵的特殊设备实验室 使用的小型发酵罐，其容积可从1L至数百升发酵罐配备有控制器和各种电极，可以自动 地调控实验所需的培养条件，是微生物，遗传工程，医药工业等科学研究所必需的设备 活性干酵母是以固体形式存在，而不失去活性的酵母细胞产品活性干酵母有两个基本特征： 一是常温下长期贮存而不失去活性，二是将活性干酵母在一定条件下复水活化后，即恢复成 自然状态并具有正常酵母活性的细胞。
二、材料与方法材料：1、菌种：对安琪活性干酵母进行筛选所得2、培养基：(1)斜面培养基：麦芽汁琼脂培养基(2) 一级种子培养基：120Bx麦芽汁培养基(3) 二级种子培养基：葡萄糖 120g/L，酵母膏 3.5g/L,(NH 4 )2 SO4 3.5g/L,KH 2 PO 4 2.0g/L，MgSO4 • 7H 2 O 0.8g/L,PH 为 5.0(4)发酵培养基：① 基液：自来水2.2L装入发酵罐内，121°C灭菌20min，灭菌后罐内大约2.5L (蒸汽冷凝的缘故)② 流加糖液：350g/L葡萄糖液1.6L装入流加瓶中，121C灭菌15min备用③ 流加营养液：,(NH4)2SO4 60g，KH2PO4 15g，MgSO4 - 7H2 O10g，玉米浆 (纱布过滤去渣)12g，用自来水配成400mL，121C灭菌15min④ 碱液：10%NaCO 2溶液⑤ 消泡剂：消泡剂与水按1:1配制成80mL，121C灭菌15min备用3、仪器及用具：5L全自动发酵罐，恒温振荡培养箱，恒温培养箱，大容量低速离心机，血细胞计 数板，还原糖测定装置，酵母发酵力测定装置，电子天平，吸管，烧杯，三角瓶， 试管，酒精灯，滴定管，显微镜，PH测定器方法：菌种一斜面（培养24h，37°C）-一级种子（250mL摇瓶）一二级种子（500mL摇瓶， 培养10h，37C） 一发酵发酵罐一管路准备一实罐灭菌一发酵（8-10h，37C） 一取样一分析测定一放罐1、一级种子培养250mL三角瓶8个，每个加35mL 一级种子培养基，121C灭菌15min冷却一每个瓶中 接种2-3环斜面菌种一30C静置培养28-32h一取样测定细胞浓度，美兰染色观察死亡细胞，确定酵母对数生长期末期（可以根据酵母细胞数0.8-1.0X108个/mL，出芽率20%，死亡1%以下，耗糖45-50%，酸度不增高等指标来确定），确定无杂菌一接入8瓶二级种 子培养基。
2、 二级种子培养1000mL三角瓶8个，每个加180mL二级种子培养基，121C灭菌15min冷却一每个瓶中 接入一级种子液20mL—恒温振荡培养12-16h，30C,96r/min一取样测定细胞浓度，美兰 染色观察死亡细胞，确定酵母对数生长期末期，确定无杂菌一8瓶二级种子全部接入发 酵罐3、 发酵罐清洗：把装好培养液的发酵罐密封好，各条管路包扎好，流加瓶密封一起放入高 压灭菌锅灭菌121C，15min4、 发酵生产（流加营养法）⑴接种：发酵罐实消后，温度降至30C，接入二级种子，启动搅拌，通入无菌空气，开 始搅拌⑵糖液流加：初始速度60-80mL/h后，发酵一小时后，每小时测定还原糖，根据测定结 果及时调整糖液流加速度发酵3-4h后，残糖浓度在0.1%-0.2%，发酵16h左右，全部 糖液克刘佳完毕⑶营养液流加：接种前先加入营养液50mL，接种后，每隔1h加50mL，至发酵8h加完⑷PH控制：酵母最适生长PH为4.4-5.4, PH过酸通过10%NaCO 2溶液进行调节，过碱用 柠檬酸调节⑸温度控制：发酵0-12h为30C，12-16h为32Co⑹溶氧控制：一般为和浓度的20%-30%，通过调节通风量和搅拌转速，后期以不再加营 养液，应适当减小通风。
⑺发酵周期：一般选择在对数生长期的后阶段⑻最终发酵体积：正常情况下，全部流加糖液和营养液能够被利用，最终发酵体积应为 7L左右5、 发酵液处理——离心分离发酵结束后，用大容量低速离心机分离酵母，2000r/min，离心20min，弃去上清液6、 用分光光度计车OD值7、 用PH计测样液PH值，与发酵机显示的PH校对，原因是发酵机可能没校准，PH不正确三、结果与分析0.180.160.140.12值0.1O 0.080.060.040.0200123456789 10还原糖1、 前发酵罐的灭菌做得不好，因为提前防压了，导致发酵液，流加糖液，营养液等蒸发了， 以致量不足2、 实验过程中，PH值一直上升，呈过碱性先用1%的柠檬酸调节，结果发现浓度过低， 改用5%柠檬酸调节，最后将PH调节至5.0——6.0原因应该与所使用的消泡剂有关， 该消泡剂是食品加工用的消泡剂，呈碱性，以至于发酵液呈过碱性3、 用显微镜镜检，没有结果4、 残糖浓度的测定前一个小时成上升状态，此后2-4个小时浓度有所下降，而后又上升再 下降，呈不稳定状态原因是没及时关注糖液消耗状况，流加糖流加过多四、结论1、 总体上这个实验很成功，准备工作和同学们间的配合程度都比较好.在整个实验的过程中， 对工艺流程比较熟悉.掌握一般.但是在运行的过程中，会出现很多错误.我们把问题考虑得 当，协作能力比较强。
2、 工艺流程的掌握比较好，在查阅资料和搜集内容方面,积极3、 数据分析不够准确.误差太大了。